伴pcsk9功能获得性突变的常染色体显性高胆固醇血症的治疗方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及治疗伴血脂和脂蛋白水平升高的疾病和病症的领域。更具体地说，本 发明设及使用PCSK9抑制剂来治疗有一个或多个PCSK9基因功能获得性突变的常染色体显 性高胆固醇血症患者。
【背景技术】
[0002] 常染色体显性高胆固醇血症（ADH)的特征是遗传性高血清LDL胆固醇（LDkC)水 平和屯、血管疾病早期发作。A畑的病因包括LDL受体（LDLR)及其配体载脂蛋白B(apoB) 突变，W及（约1%的患者中）肝细胞LDLR的强效调节因子前蛋白转化酶枯草溶菌素 9 (PCS脚）的功能获得性突变（G(Fm)。
[0003] 前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种前蛋白转化酶，属于分泌性枯草杆菌 酶家族的蛋白酶K亚族。为降低血清总胆固醇、LDL胆固醇和血清甘油Ξ醋而使用PCSK9抑 制剂（抗PCSK9抗体），在美国第8062640、8357371号专利和第2013/0064834号美国专利 申请公开书中已有所说明。 发明概述
[0004]本发明提供了用于治疗常染色体显性高胆固醇血症（ADH)，例如，由PCSK9功能 获得性突变引起或与PCSK9功能获得性突变相关的ADH的方法。本发明的方法包括选择 PCSK9基因等位基因中有一个或两个功能获得性突变（GOFm)的ADH患者，并给患者施用含 有PCSK9抑制剂的医药组合物。
[0005] 可按照本发明的方法施用的PCSK9抑制剂包括例如抗PCSK9抗体或其抗原结合片 段。可用于实施本发明之方法的具体的典型抗PCSK9抗体，包括如美国第8357371号专利 所述和/或本文所公开的任何抗体或抗原结合片段。
[0006] 所述PCSK9抑制剂可W皮下或静脉注射的方式给受试者注射。此外，所述PCS脚 抑制剂也可施予在治疗性干预时正在接受他汀类药物治疗方案的患者。
[0007] 在审阅随后的详细说明过程中，本发明的其他实施方案将变得明显。 附图的简要说明
[0008] 图1A显示来自所分析的不同国家有各种PCSK9突变的个体人数（η)及每个相应 国家的系谱数目（Ρ)。"最小"表示谱系的最小数目（一些个体没有显示系谱）。
[0009] 图1Β提供了家族性PCSK9功能获得性突变（GOFm)患者的临床数据摘要。
[0010] 图2显示有PCS脚GOFm而没有LDLR突变的患者的基线LDL-C分布。P值是指有 特定突变时LDL-C的平均水平是否比有遗传变体的群体显著升高（向上箭头）或下降（向 下箭头）。
[0011]图 3 显示PCS脚GOFm(无LDLR突变，N=134)、即（有LDLR突变，N=2126 [受 试者与荷兰注册数据库中的患者在年龄和性别上进行了匹配])和抑B(ApoB突变，N= 470 [受试者与荷兰注册数据库中的患者在年龄和性别上进行了匹配])受试者的平均总胆 固醇、LDkC、皿心(：和甘油Ξ醋水平。（t)表示与PCS脚-GOFm受试者比较，P<0. 0001 ;(扣 表示与PCS脚-GOFm受试者比较，P<0. 001。
[0012] 图4显示PCS脚-G(Fm受试者对当前降脂治疗化LT)的反应，依据是用药前后报告 的血脂状况。（*)表示p<0.0001 表示P<0.0002。LLT包括他汀类药物（阿托伐他汀 10-80毫克、西伐他汀0. 3毫克、氣伐他汀30毫克、匹伐他汀1-4毫克、普伐他汀10-20毫 克、瑞舒伐他汀5-40毫克、辛伐他汀20-80毫克）、依泽替米贝10毫克或非诺贝特100-250 毫克。
[0013] 图5显示PCS脚G(Fm患者对当前降脂治疗化LT)的反应，依据是有PCS脚G(Fm、 没有LDLR突变、基线和治疗中LDkC达到LDkC目标的情况（N= 63)。LDkC目标是基于 NCEP-ATPIII指南（Grundyetal.，Circulation2004,110:227-239)。
[0014] 图6是实施例3中描述的临床试验的示意图。A组患者在第-14、57、85和99天接 受安慰剂任80)，并在第1、15、29、43和71天接受減6316?(減6)。6组患者在第-14、1、71 和99天接受安慰剂（PB0)，并在第15、29、43、57和85天接受mAb316P(mAb)。两组的单盲 安慰剂导入期都是第-14天到第1天；两组的双盲治疗期都是第1天至第99天。随访期是 第99天至第155天。
[0015] 图7显示实施例3中描述的临床试验的所有13名患者在第8周时LDkC、载脂蛋 白B、TG、皿心(：、载脂蛋白A1和Lp(a)自基线的百分比变化。
[0016] 图8显示A组和B组患者在接受沿X轴灰色和白色箭头所示的治疗后，LDL-C测 量值（晕克/分升）随时间的变化。
[0017] 图9显示A组和B组患者在接受沿X轴灰色和白色箭头所示的治疗后，游离PCSK9 自基线随时间的变化（％)。
[001引 图10显示有各种PCS脚G0F突变值364Y、L108R、S127R和R218巧的患者在接受 沿X轴灰色和白色箭头所示的治疗后，LDkC自基线随时间的变化（％)。
[0019] 图11显示有各种PCS脚G0F突变值364Y、L108R、S127R和R218巧的患者在接受 沿X轴灰色和白色箭头所示的治疗后，游离PCSK9自基线随时间的变化（％ )。 详细说明
[0020] 在说明本发明之前先要指出，应该理解，本发明并不限于所述的具体方法和实验 条件，因为运些方法和条件是可W改变的。还应理解，本文所用的术语仅出于说明具体实施 方案的目的，并非意在限制本发明，因为本发明之范围仅受所附权利要求书的限制。
[0021] 除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语的含义均将与本发明所属技术领 域的普通专业人员通常理解的相同。本文中所用的术语"大约"，当用于列出的某一具体数 值时，意为该数值可在与所列数值相差不超过1 %的范围内变化。例如，本文中所用的表达 "约100"包括99和101W及运两者之间所有数值（例如99. 1、99. 2、99. 3、99. 4等）。
[0022] 尽管与本文所述的方法和材料类似或相当的任何方法和材料都可用于本发明之 实施，但现在说明的是首选的方法和材料。本文所提及的所有出版物均通过引用而W其整 体纳入本文。 治疗常染色体显性高胆固醇血症的方法
[0023] 本发明提供了治疗常染色体显性高胆固醇血症（ADH)的方法。在某些实施方案 中，本发明提供了一些方法，用于治疗由PCSK9的一个或多个功能获得性突变（GOFm)引起 或与PCSK9的一个或多个功能获得性突变（GOFm)有关的ADH。如本文所用/'PCS脚G(Fm"运一表达是指编码PCSK9蛋白的一个或两个等位基因的任何突变，其导致的氨基酸改变可 增强人类患者体内PCSK9降低LDL受体水平的能力，或与高胆固醇血症有关或相关。典型的 PCS脚G0F突变包括V4I、E32K、D35Y、E48K、P71L、R96C、L108R、S127R、D129N、R21甜、F21化、 R218S、R357H、D374H、D374Y、S46化和R496W。
[0024]本发明的方法包括选择PCSK9基因的一个或两个等位基因有GOFm的患者，并给患 者施用含有PCSK9抑制剂的医药组合物。G(Fm可W是任何PCS脚G0F突变。根据某些实施 方案，所述G(Fm编码含有氨基酸替换的PCSK9变体蛋白，该氨基酸替换选自由V4I、E32K、 D35Y、E48K、P71L、R96C、L108R、S127R、D129N、R215H、F216L、R218S、R357H、D374H、D374Y、 S46化和R496W组成的一组突变。确定患者是否有PCS脚G(Fm的方法是本领域内众所周知 的。例如，在本发明的背景下，可W使用PCSK9基因的DNA序列分析来确定携带编码PCS脚 GOFm的一个或多个等位基因的患者。用于确定PCSK9G0F突变的基于蛋白质组学的方法也 包括在本发明的方法范围内。
[0025]在某些实施方案中，可基于是否显示高胆固醇血症的一个或多个其他特征或风险 因素来进一步选择患者。例如，本发明包括W下方法：即在给予含有PCSK9抑制剂的医药 组合物之前基于血浆LDL-C水平大于或等于约70毫克/分升运一指标，进一步选择PCS脚 GOFm患者进行治疗。在其他实施方案中，在给予含有PCSK9抑制剂的医药组合物之前基于 身体质量指数（BMI)大于约18. 0千克/平方米运一指标，进一步选择PCS脚G(Fm患者。
[0026]根据本发明，在给予含有PCSK9抑制剂的医药组合物之时或之前，患者可正在接 受背景降脂治疗。背景降脂治疗的实例包括他汀类药物[例如，西伐他汀、阿托伐他汀、辛 伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、氣伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等]、依泽替米贝、贝特类、烟 酸、ω-3脂肪酸和胆汁酸树脂。
[0027]将W本发明之方法治疗的患者可基于由选自下列一组因素的一个或多个因素来 选择：年龄（例如40、45、50、55、60、65、70、75或80岁W上）、种族、民族起源、性别（男性或 女性）、锻炼习惯（例如经常锻炼、不锻炼）、其他原有疾病（例如II型糖尿病、高血压等）， W及目前的用药状态（例如目前正在服用他汀类药物[例如西伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他 汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、氣伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等]、β-受体阻断剂、烟酸等）。 本发明的方法还可W用于治疗对常规他汀类药物治疗不耐受、无反应或反应不足的ADH患 者。可能的患者人选可在用本发明之方法治疗之前，在一种或多种前述选择因素的基础上 选择/筛选（例如通过问卷、诊断评估等）。
[002引本发明的方法导致了选自由LDkC、载脂蛋白Β100、非皿kC、总胆固醇、VLDkC、 甘油Ξ醋、Lp(a)和残余胆固醇组成的一组脂质组分的一种或多种脂质组分的血清水平下 降。例如，根据本发明的某些实施方案，给PCS脚G(Fm受试者施用含有PCSK9抑制剂的医药 组合物后，导致血清低密度脂蛋白胆固醇（LDkC)自基线平均下降百分比为至少约25%、 30%、40%、50%、60%或^上；载脂蛋白8100自基线平均下降百分比为至少约25%、30%、 40%、50%、60%或W上；非皿kC自基线平均下降百分比为至少约25%、30%、40%、50%、 60%或W上；总胆固醇自基线平均下降百分比为至少约10%、15%、20%、25%、30%、35% 或W上；VLDkC自基线平均下降百分比为至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%或^上； 甘油Ξ醋自基线平均下降百分比为至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或^上； 及/或Lp(a)自基线平均下降百分比为至少约5 %、10 %、15 %、20 %、25 %或W上。 PCSK9抑制剂
[0029] 本发明之方法包括给患者施用含有PCSK9抑制剂的治疗组合物。本文所用的术语 "PCSK9抑制剂"是在体外或体内与人PCSK9结合或与其相互作用并抑制PCSK9的正常生物 功能的任何药剂。PCSK9抑制剂类别的非限制性实例包括小分子PCSK9括抗剂、肤基PCS脚 括抗剂（例如"肤抗体"分子），W及与人PCSK9特异性结合的抗体或抗体的抗原结合片段。
[0030] 本文所用的术语"人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9"或"人PCS脚"或"hPCS脚"是 指含有序列754所示核酸序列和序列755所示氨基酸序列或其生物活性片段的PCSK9。
[0031] 本文所用的术语"抗体"意指由四条多肤链，即两条重做链和两条轻（L)链W二 硫键相互连接而组成的免疫球蛋白分子及其多聚体（例如IgM)。每条重链均包含一个重 链可变区（本文简称为HCVR或Vh)和一个重链恒定区。重链恒定区包含Ξ个结构域，CJ、 句2和句3。每条轻链均包含一个轻链可变区（本文中简称为LCVR或\)和一个轻链恒定 区。该轻链恒定区包含一个结构域（CJ)。Vh和Vl区可进一步分为称为互补决定区（CDR) 的高变区，其中散布着较保守的称为框架区（FR)的区域。每个Vh和Vl均由Ξ个CDR和四 个FR组成，从氨基端到簇基端按W下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在 本发明另一些实施方案中，抗PCSK9抗体（或其抗原结合部分）的FR可能与人类种系序列 相同或可能经过天然或人工修饰。氨基酸共有序列可根据两个或两个W上CDR的并排分析 而定义。
[0032] 本文所用的术语"抗体"还包括完整抗体分子的抗原结合片段。本文所用的抗体 的"抗原结合部分"、抗体的"抗原结合片段"等术语，包括与抗原特异性结合而形成复合体 的任何天然产生的、可W酶促方式获得的、合成的或基因改造的多肤或糖蛋白。抗体的抗原 结合片段可W利用任何适宜的标准技术，例如蛋白水解消化或设及编码抗体可变区和（可 选）恒定区的DNA之操纵和表达的重组基因改造技术，从例如完整抗体分子产生。此类DNA 是已知的及/或很容易从例如市售来源、DNA库（包括例如隧菌体-抗体库）获得，或可W 合成。该DNA可W测序且W化学方法或分子生物学技术加W操纵，例如将一个或多个可变 区和/或恒定区排列成一种适宜的结构，或引入密码子、产生半脫氨酸残基、修饰、添加或 删除氨基酸等。
[003引抗原结合片段的非限制性实例包括：（i)F油片段；（ii)F(油'）2片段；（iU)Fd片段；（iv)Fv片段；(V)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；及（vii)由模拟该抗体高变区的 氨基酸残基（例如一个孤立的互补决定区CDR，如CDR3肤）或FR3-CDR3-FR4结构约束肤组 成的最小识别单位。本文所用的"抗原结合片段"运一术语还包括其他工程改造的分子，如 结构域特异性抗体、单域抗体、结构域删除的抗体、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、双抗体、Ξ聚 抗体、四聚抗体、微型抗体、纳米抗体（例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等）、小模块免疫 药物（SMIP)及整鱼可变IgNAR域。
[0034] 抗体的抗原结合片段通常会包含至少一个可变区。可变域可W是任何大小或可具 有任何氨基酸组成，且通常会包含至少一个邻近于一个或多个框架序列或位于其中的CDR。 在含有与V返相连接之VΗ区的抗原结合片段中，该VΗ区和V厄的相对位置可W任何适宜 方式排列。例如，该可变区可W是二聚化的且含有二聚体。或者，抗体 的抗原结合片段可含有一个单一的Vh区或V^区。
[0035] 在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可含