氨基糖偶联物的合成方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药品技术领域，尤其涉及一种氨基糖偶联物的合成方法。
【背景技术】
[0002]为提高来那度胺对肿瘤组织的靶向性，利用前药原理，通过丁二酰基或戊二酰基将来那度胺与氨基糖进行偶联，设计合成了 8个来那度胺和氨基糖偶联物(4a?4h)，其结构均经IR、1HNMR、MS、元素分析确证。初步体外实验结果显示化合物4a?4c能够抑制血管内皮细胞的增殖。为改善血管阻断剂CombretastatinA-4的水溶性和成药性，本文利用前药原理，以戊二酰基为连接臂，将CombretastatinA-4与氨基糖进行偶联。在实体瘤的发生发展过程中，血管系统作为能量和氧气的重要来源以及代谢产物排出的主要途径起着至关重要的作用。因此，抑制或破坏肿瘤血管已成为治疗恶性肿瘤的重要方法。CombretastatinA-4(CA-4,1)是一种从南非树木CombretumCaffnom中分离出来的活性成分，它既是一种微管蛋白聚合抑制剂，也是一种血管阻断剂，它能利用肿瘤组织与正常组织内皮细胞的生理差异，选择性地抑制肿瘤微管蛋白活性，改变其内皮细胞的骨架结构与形态，增强其血管渗透性、扰乱血流，从而引起肿瘤血管内皮细胞凋亡，导致次级肿瘤细胞死亡。但是它的水溶性非常低，生物利用度不高，其临床应用受到了限制，因此已有大量的文献报道了以CA-4为先导物的结构修饰与优化研究，但多数CA-4类似物存在或活性不够高、或毒性较大、或合成比较复杂等缺点。只有少数CA-4衍生物如水溶性前药CA-4磷酸二钠盐(CA-4P，2)已在美国进入III期临床阶段。
【发明内容】
[0003]本发明就是针对上述问题，提供一种水溶性高且对人脐静脉内皮细胞增殖均有较强的抑制作用氨基糖偶联物的氨基糖偶联物的合成方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
[0005]氨基糖偶联物的合成方法包括下步骤。
[0006]1、取500mL三颈瓶，将样品溶解在甲醇溶液中，浓度为5mg/ml ;使用硅胶粒径为5um-10um的玻璃基薄板层析,薄板的娃胶层厚度为3mm ;在500mL三颈瓶中加入3，4，5-三甲氧基苯乙酸50.0g, 0.22mol、3-羟基-4-甲氧基苯甲醛34.0g, 0.22mol、62.5mL三乙胺和150mL乙酸酐，N2保护搅拌升温至140oC，反应4h，停止加热，冷却至10oC，冰浴下缓慢滴加浓盐酸200mL，室温下搅拌过夜；有土黄色固体析出，停止反应过滤出固体，用约200mL乙醇重结晶，得47.5g黄色针状物，产率为59.6% ；
2、将5um-10um的硅胶粉于110°C，高温活化12h ;取45ml正丁醇、30ml异丙醇、25ml60去离子水置于平底烧瓶中混合，洗脱前，加入2%的氨水混合静置5min，在装有温度计、回流冷凝管、干燥管的500mL三颈瓶中加入新制铜粉6.6g, 0.103mol，喹啉72mL，N2保护反应加热至200° C，搅拌3h ;反应完毕后加入乙醚适量，用硅藻土滤除铜粉；用300mL5MHCl把喹啉洗掉，用乙醚150mL萃取，将分出的水层用乙醚洗3X150mL,合并有机层。有机层分别用500mL水洗一次，饱和80Na2C032 X 300mL洗两次，饱和NaC12X300mL洗两次，无水Na2S04干燥过夜。滤去硫酸钠，减压旋掉2/3体积的乙醚，有微黄色固体析出，滤出固体并用适量乙醚洗涤，回收母液，再除去部分溶剂，将析出的固体滤出，共得产物15.0g，产率79.1% ；
3、冰浴下将三乙胺1.8mL, 12.8mmol缓慢滴入8mL丙酮中，溶液澄清，再加入
11.0g, 3.2mmol和戊二酸酐1.37g, 12mmol，使反应温度保持在15oC，搅拌，反应24h，停止反应，90旋去丙酮，加适量乙酸乙酯，用13mLlMHCl洗有机层，并用20mL水洗一遍，饱和NaC12 X 20mL洗，无水MgS04干燥4h，过滤，旋干溶剂，用大量乙醚溶解粗品，滤除不溶物，旋去大部分溶剂，将析出的固体过滤出来并用少量乙醚洗涤，得类白色固体粉末，既得。
[0007]作为一种优选方案，本发明所述化合物12a~12f合成方法:将10溶于DMF5mL中，加入PyBOP，常温搅拌约lOmin ;加入G-NH22.59mmol，于室温搅拌2h，TLC监测反应完毕；将反应液倒入约50mL水中，用乙酸乙酯30mLX3萃取，合并有机层；有机层依次用水30mLX 3，饱和碳酸氢钠溶液30mLX 3，饱和食盐水30mLX 3洗涤，无水硫酸钠干燥过夜；过滤，减压蒸去乙酸乙酯，剩余物硅胶柱层析，得目标化合物12a~12f。
[0008]本发明有益效果:本发明利用前药及拼合原理设计合成了 6个CombretastatinA-4氨基糖偶联物,并采用MTT法测定了 6个目标化合物对人胳静脉内皮细胞增殖的抑制作用。实验结果显示，6个目标化合物在10-5，10-6，10-7mol/L三个浓度对人脐静脉内皮细胞增殖均有较强的抑制作用。175由构效关系研究可知，由于糖分子中的羟基增加了化合物的水溶性，目标化合物12d和12f较其它化合物的抑制作用更强。而且，12d在10-5mol/L和化合物12f在10-7mol/L浓度下对人脐静脉内皮细胞抑制作用较阳性药 CombretastatinA-4 更强。
[0009]为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下【具体实施方式】，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的【具体实施方式】仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
【具体实施方式】
[0010]本发明氨基糖偶联物的合成方法包括下步骤。
[0011]1、取500mL三颈瓶，将样品溶解在甲醇溶液中，浓度为5mg/ml ;使用硅胶粒径为5um-10um的玻璃基薄板层析,薄板的娃胶层厚度为3mm ;在500mL三颈瓶中加入3，4，5-三甲氧基苯乙酸50.0g, 0.22mol、3-羟基-4-甲氧基苯甲醛34.0g, 0.22mol、62.5mL三乙胺和150mL乙酸酐，N2保护搅拌升温至140oC，反应4h，停止加热，冷却至10oC，冰浴下缓慢滴加浓盐酸200mL，室温下搅拌过夜；有土黄色固体析出，停止反应过滤出固体，用约200mL乙醇重结晶，得47.5g黄色针状物，产率为59.6% ；
2、将5um-10um的硅胶粉于110°C，高温活化12h ;取45ml正丁醇、30ml异丙醇、25ml60去离子水置于平底烧瓶中混合，洗脱前，加入2%的氨水混合静置5min，在装有温度计、回流冷凝管、干燥管的500mL三颈瓶中加入新制铜粉6.6g, 0.103mol，喹啉72mL，N2保护反应加热至200° C，搅拌3h ;反应完毕后加入乙醚适量，用硅藻土滤除铜粉；用300mL5MHCl把喹啉洗掉，用乙醚150mL萃取，将分出的水层用乙醚洗3X 150mL,合并有机层。有机层分别用500mL水洗一次，饱和80Na2C032 X 300mL洗两次，饱和NaC12X300mL洗两次，无水Na2