一种氰类化合物降解菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种氰类化合物降解菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 氰化物是一种剧毒物质，人体摄入0. 18g的氰化物就会死亡，氰化钾的致死量为 0. 12g。含氰废水主要来源于电镀、煤气、焦化、冶金、金属加工、化纤、朔料、农药、化工等行 业，这些废水对环境照成极大的污染。基于氰化物的特殊性，许多国家的环保部门制定了严 格的水体氰化物排放标准，如美国环保署（USEPA)提议饮用水和生态水体中氰化物的最高 质量浓度分别为〇. 〇5mg/L和0. 2mg/L。我国环境保护部和国家质量监督检验检疫总局于 2012年6月27日颁布的《炼焦化学工业污染物排放标准》规定独立焦化企业废水总排放口 或钢铁联合企业焦化分厂废水排放口的氰化物出水排放标准为〇. 2mg/L，而且监测的氰化 物不只是简单的无机氰化物，〇. 2mg/L的排放标准指的是总氰化物。
[0003] 鉴于此，克服以上现有技术中的缺陷，提供一种新的氰类化合物降解方法成为本 领域亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种氰类化合物降解菌、以及 上述降解菌的应用。
[0005] 本发明的目的可通过以下的技术措施来实现：
[0006] 本发明第一方面提供了一种氰类化合物降解菌，与现有技术相比，其不同之处 在于，该降解菌为根癌农杆菌（Agrobacterium sp.)TQH6菌株，以保藏号CCTCC NO: Μ 2015613 保藏。
[0007] 优选地，所述降解菌的16SrRNA基因序列为SEQ ID No. 1。
[0008] 优选地，所述氰类化合物为无机氰CN、铁氰化物或乙腈。
[0009] 本发明第二方面还提供了上述的保藏号为CCTCC NO: Μ 2015613的氰类化合物降 解菌的生物学纯培养物。
[0010] 本发明第三方面还提供了一种氰类化合物的降解方法，使上述的降解菌与氰类化 合物接触，降解氰类化合物。
[0011] 优选地，所述降解菌与氰类化合物的接触在28~35°C的范围内进行。
[0012] 优选地，所述降解菌与氰类化合物的接触在pH7. 0~8. 0的范围内进行。
[0013] 优选地，所述降解菌与氰类化合物的接触在以氰类化合物为唯一氮源的培养基中 进行。
[0014] 优选地，所述降解菌与氰类化合物的接触在含氰焦化废水中进行。
[0015] 本发明第四方面还提供了上述的降解菌或上述的纯培养物在氰类化合物降解中 的用途。
[0016] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于，本发明的氰类化合物降解菌能够高效 降解氰类化合物，对氰类化合物的耐受力强，适合应用于含氰焦化废水的生物处理。
【附图说明】
[0017] 图1是本发明实施例2中TQH6菌株对氰化钾的降解变化图。
[0018] 图2是本发明实施例3中TQH6菌株对铁氰化钾的降解变化图。
[0019] 图3是本发明实施例4中TQH6菌株对乙腈的降解变化图。
【具体实施方式】
[0020] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施 例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于限定本发明。
[0021] 本发明实施例提供了一种氰类化合物降解菌，该降解菌为根癌农杆菌 (Agrobacterium sp.)TQH6菌株，所述菌株的保藏号为CCTCC NO: Μ 2015613,保藏单位：中 国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏日期：2015年10月19日。
[0022] 进一步地，所述菌株鉴定特征如下：细胞呈杆状，菌落乳白色、隆起、边缘光滑齐 整，菌株的最适生长条件为：PH7. 0,温度30°C。
[0023] 所述氰类化合物为无机氰CN、铁氰化物或乙腈。
[0024] 本发明实施例提供的细菌的纯培养物为上述菌株的纯培养物或培养物浓缩物或 发酵液，可以是上述菌株在固体培养基表面形成纯培养物，例如：平板固体培养基或斜面固 体培养基上形成的菌落，也可以是上述菌株在液体培养基（发酵培养液）中发酵培养后经 过离心分离所得的细菌悬液，还可以是上述菌株在液体培养基（发酵培养液）中生长发酵 形成的发酵液。
[0025] 其中，术语"发酵培养液"是指液体培养基；术语"发酵液"是指菌株在液体培养基 中发酵培养一段时间后所形成的液体（包括了培养液）；术语"细菌悬液"是发酵液经过离 心处理后收集沉淀（菌株培养物或菌体），将沉淀溶于水或缓冲液中，经过震荡或吹打使得 沉淀状的菌株培养物悬浮起来所形成的均一的悬浊液。
[0026] 具体地，本发明所提供的根癌农杆菌TQH6菌株的培养方法包括：将根癌农杆菌 TQH6菌株置于培养基中，
[0027] TQH6 菌株的培养基成分为（g/L) :10g 葡萄糖、0· 9g ΚΗ2Ρ04、6· 5g Na2HP04 · 12H20、 铁氰化钾（总氰浓度lOmg/L)每1L培养基加入lmL微量元素溶液（微量元素溶液配制： lg FeS04 · 7H20, lg MnS04 · Η20,0· 25g Na2Mo04 · 2Η20,0· lg Η3Β04,0· 25g CuCl2 · 2Η20,0· 25g ZnCl2,0. 25g C〇(N03)2 ·6Η20,0· lg NiS04 ·6Η20,溶解于 900mL 蒸馏水中，加 5mL*H2S04,补 蒸馏水至1000mL);铁氰化钾过滤灭菌，待无机盐培养基高温高压灭菌后加入，终浓度按总 氰计最初为l〇mg/L。
[0028] TQH6菌株可以高效降解氰化物，在纯培养基中以氰化钾作为唯一氮源时（按总氰 浓度计5mg/L)，TQH6菌株在36h内降解率可以达到93 % ;若以铁氰化钾作为唯一氮源时 (总氰浓度20mg/L)，TQH6菌株在36h内降解率为97. 75% ;若以乙腈为唯一氮源（总氰浓 度为10mg/L)，TQH6菌株在36h内降解率为96. 4%。
[0029] 本发明实施例提供的氰类化合物的降解方法，使上述的降解菌与氰类化合物接 触，降解氰类化合物。
[0030] 在一个优选实施方式中，所述降解菌与氰类化合物的接触在28~35°C的范围内 进行；所述降解菌与氰类化合物的接触在pH7. 0~8. 0的范围内进行。
[0031] 在另一个优选实施方式中，所述降解菌与氰类化合物的接触在以氰类化合物为唯 一氮源的培养基中进行。
[0032] 进一步地，上述的TQH6菌株可以接种于含氰焦化废水中，与含氰焦化废水中氰类 化合物接触，降解含氰焦化废水中氰类化合物。
[0033] 本发明的根癌农杆菌TQH6菌株或其纯培养物可以在氰类化合物降解中应用。
[0034] 例如，本发明的根癌农杆菌TQH6菌株在含氰焦化废水中应用，具体应用方法为将 TQH6菌株在LB培养基中，30°C，180R培养12h后将菌体离心，用无菌水将菌体稀释回原来 的体积，以体积百分比5%的接种量将菌悬液接入到焦化废水中，30°C，180R培养36h，投加 TQH6菌株后，总氰去除效果同比增效55. 63%。
[0035] 实施例1 :
[0036] TQH6菌株的分离和鉴定
[0037] 1. TQH6菌株的分离和纯化
[0038] TQH6菌株是采用富集培养法从辽宁某焦化厂生化好氧池活性污泥中分离得 到。具体步骤如下：用250mL三角瓶，装100mL分离培养基（g/L) 10葡萄糖0. 9KH2P04， 6. 5Na2HP04 · 12H20,铁氰化钾（总氰浓度10mg/L)每1L培养基加入lmL微量元素溶液，铁氰 化钾过滤灭菌，（待培养基高压灭菌后加入）。微量元素溶液配方（g/L) :lg FeS04*7H20， lg MnS04 · Η20,0· 25g Na2Mo04 · 2Η20,0· lg Η3Β04,0· 25g CuCl2 · 2Η20,0· 25g ZnCl2,0. 25g C〇(N03)2 · 6H20,0. lg NiS04 · 6H20,溶解于900mL蒸馏水中，补蒸馏水至1000mL。向培养基 中接入5mL从辽宁省某焦化厂采集的生化好氧池活性污泥，