一种新的甾体类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从黑三棱的干燥块茎中分离得到的一种具有 肝脏保护作用的留体类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 三棱是黑三棱科植物黑三棱SparganiumstoloniferumBuch.-Ham.的干燥块莖， 自1977年起，被各版《中国药典》收载。其具有破血行气、消积止痛的功效，为常用破血药； 主治癥瘕痞块、瘀血经闭、食积肿胀等证，多用于治疗月经不调、积聚结块。冬季至次年春采 挖，洗净，削去外皮，晒干。分布于东北、黄河、流域、长江中下游及西藏。
[0003] 三棱药材趋于木质化，脂溶性成分总量较低，多数成分微量存在，且三棱质地坚 硬，难于破碎，所以三棱中各成分的提取、分离和鉴定工作起步较晚。目前，已报道的成分 主要有挥发油类、有机酸类、黄酮类、苯丙素类、皂苷类、留醇类、糖类、生物碱类及微量元素 等。三棱的挥发油存在于分泌细胞中，主要为芳香族化合物及其含氧衍生物。三棱中苯丙 素类化合物主要以甘油酯和配糖体的形式存在。据报道，三棱中主要的留醇类化合物为 β-谷留醇和胡萝卜苷。现代药理研究表明，β-谷留醇有降低血清中胆固醇水平的作用， 可用于治疗动脉粥样硬化和冠心病，这与三棱的活血化瘀功效一致。甘露醇是一种水溶性 成分，系三棱活性成分之一，传统的作用有脱水利尿、润肠通便。据报道，甘露醇有很好的镇 痛作用。临床试验表明，甘露醇可抑制脑血栓形成，改善脑部血液循环，这与三棱的传统功 效活血化瘀、镇痛是一致的。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种从黑三棱的干燥块茎中分离得到的一种具有肝脏保护 作用的留体类化合物及其制备方法。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0007]
[0008] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将黑三棱的干燥块茎粉 碎，用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用80%乙醇洗 脱10个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩得80 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中 80 %乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45:1、25:1、15:1和1:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为20:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分 2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱， 收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0009] 进一步地，所述大孔树脂为D101大孔吸附树脂。
[0010] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。
[0011] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0012] 所述的化合物（I)在制备肝脏保护的药物中的应用。
[0013] 所述的药物组合物在制备肝脏保护的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0015] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0016] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0017] 图1为化合物（I)结构式；
[0018] 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0020] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0021 ] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0022] 制备方法：（a)将黑三棱的干燥块茎（10kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3 次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（431g) 和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗 脱8个柱体积，再用80 %乙醇洗脱10个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩得80 %乙 醇洗脱物浸膏（161g) ;(c)步骤（b)中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比 为75:1 (8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (52g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和8:1 (8个柱体 积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (26g)用十八烷基硅 烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(237mg)。
[0023] 结构确证：白色无定形粉末；HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z419. 3308,结合核磁 特征可得分子式为C2SH440,不饱和度为7。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,500MHZ): H-1 (1. 43,m)，H-1 (1. 84,m)，H-2 (1. 78,m)，H-2 (1. 86,m)，H-3 (2. 27,m)，H-3 (2. 35,m)， H-4(5. 59,dd，J= 1. 8,5. 4)，H-6(3. 16,br，s)，H-7(2. 41，m)，H-8(l. 09,m)，H-9(l. 27， m)，H-ll(1. 46,m)，H-ll(1. 52,m)，H-12(l. 98,m)，H-12(2. 08,s)，H-14(l. 47,m)， H-15(l. 66,m)，H-15(l. 75,m)，H-16(l. 30,m)，H-16(l. 91，m)，H-17(l. 18,m)，H-18(0. 71， s)，H-19 (1. 02,s)，H-20 (1. 50,m)，H-21 (0· 97,d，J= 6. 6)，H-22 (1. 57,m)，H-22 (2. 16， m)，H-23 (2. 05,m)，H-23 (2. 12,m)，H-25 (2. 23,m)，H-26 (1. 05,d，J= 6. 6)，H-27 (1. 03,d， J= 6. 6)，H-28(4. 64,d，J= 1. 5)，H-28(4. 71，s);核磁共振碳谱数据δc(ppm，DMS0-d6， 125MHz) :36. 8 (CH2,1-C)，31. 1 (CH2, 2-C)，41. 7 (CH2, 3-C)，123. 4 (CH，4-C)，145. 9 (C，5-C)， 59. 8(CH，6-C)，61· 1 (CH，7-C)，37. 2(CH，8-C)，41. 8(CH，9-C)，37· 1 (C，10-C)，20. 3(CH2， 11-C)，38. 7(CH2,12-C)，41. 8(C，13-C)，49. 2(CH，14-C)，23. 9(CH2,15-C)，27. 8(CH2,16-C)， 55. 2(CH，17-C)，11. 5(CH3, 18-C)，18. 1 (CH3, 19-C)，35. 4(CH，20-C)，18. 6(CH3,21-C)， 34. 4 (CH2, 22-C)，30. 5 (CH2, 23-C)，156. 6 (C，24-C)，33. 7 (CH，25-C)，21. 7 (CH3, 26-C)， 21. 5 (CH3, 27-C)，105. 6 (CH2, 28-C);碳原子标记参见图1。W-NMR谱显示两个单峰甲 基[δΗ0·71(Η3-18)和 1·02(Η3-19)，]，三个双峰甲基[δΗ0·97(Η3-21)，1·05(Η3-26)和 1·03(Η3-27)]和环外亚甲基[δΗ4·64(Η