1-(2-(金刚烷-1-基)-1h-吲哚-5-基)-3-取代脲衍生物及制备和用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及含吗I噪结构的脈类衍生物，尤其是设及一类1-(2-(金刚 烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是威胁人类生命的常见病和多发病，其死亡率仅次于屯、血管疾病而位居 第二。近年来，由于细胞毒类抗肿瘤药物具有难W避免的选择性差、毒副作用强、易产 生耐药等缺点，抗肿瘤药物的研发巳从传统的细胞毒药物转向针对特定祀点和作用机 制的祀向治疗药物，发现选择性作用于特定祀点的高效、低毒、特异性强的新型抗肿 瘤药物已成为抗肿瘤药物研发的重要方向（[1]M.Sun,X.Wu,J.Chen,J.Cai,M.Cao,M. Ji,Design,synthesis,曰ndinvitroantitumorev曰lu曰tionofnoveldi曰rylure曰s derivatives,EurJMedQiem, 45(2010)2299-2306.)。
[0003] 蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinases, PTKs)与肿瘤的发生和发展密 切相关，酪氨酸激酶的活性过高，导致其下游信号途径激活，从而导致细胞分化、增殖、 迁移、抑制细胞调亡，最终导致肿瘤的形成和转移（[2] J.化0, J.化en，Z.胎，W. Sun, W. Xu, Design, synthesis and biological activities of thiourea containing sorafenib analogs as antitumor agents, Bioorgan Med Qiem, 20(2012)2923-2929.)。因此，酪氨酸 激酶抑制剂已成为发展最迅速的一类抗肿瘤药物，与传统的细胞毒类抗肿瘤药物相比，运 类药物选择性好，疗效高、不良反应小，已成为当前抗肿瘤药物研究的热点。
[0004] 含吗I噪结构的脈类衍生物作为一类重要的酪氨酸激酶抑制剂，已有索拉非尼等药 物上市，还有一系列处于临床研究的化合物。通过在吗I噪上引入金刚烧并在脈的另一端改 变取代基，研究了其对肿瘤细胞的生长抑制作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一类1- (2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈 衍生物及其制备方法。
[0006] 本发明的第二目的在于提供所述一类1-(2-(金刚烧-1-基）-lH-吗I 噪-5-基）-3-取代脈衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0007] 所述1-(2-(金刚烧-1-基）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的结构式为：
[0008]
[0009] 其中，R代表Ci-Cs的烷基，取代或未取代的芳基。
[0010] 所述一类1- (2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的制备方法， 包括w下步骤：
[0011] 1)2'-甲基金刚烧酷苯胺的合成
[0012] 在反应瓶中，依次加入2-甲基苯胺、碳酸钟、1-金刚烧甲酯氯和甲苯；升溫反应， 反应液冷却至室溫，抽滤，水洗滤饼，烘干得白色固体产物2' -甲基金刚烧酷苯胺粗品，再 用乙醇重结晶；
[0013] 在步骤1)中，所述2-甲基苯胺、碳酸钟、1-金刚烧甲酯氯、甲苯、乙醇的摩尔配比 可为1 : (0.7~1) : 1 :巧~10) : (12~20);所述升溫反应的溫度可为70~80°C， 升溫反应的时间可为化；所述升溫反应可采用薄层色谱法（TLC)检测反应是否完全，反应 完全后停止反应；其收率可达到80 %~90%。
[0014] 2)中间体2-金刚烧-1H-日引噪的制备
[0015] 在反应瓶中，依次加入2'-甲基金刚烧酷苯胺和四氨巧喃；再在揽拌状态降溫到 0~10°C，氮气保护下加入正下基裡，保溫反应，用盐酸调抑至7~7. 5 ;分液，有机相用 无水硫酸钢干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离得白色固体产物 2-金刚烧吗I噪，反应液冷却至室溫，加入冰水，抽滤，收集滤饼，烘干得绿色中间体2-金刚 烧-1H-吗I噪；
[0016] 在步骤2)中，所述2'-甲基金刚烧酷苯胺、四氨巧喃、正下基裡的摩尔配比可为 1 : (20~30) : 10。所述保溫反应的时间可为3~地；所述盐酸可采用质量百分浓度为 5%的盐酸；所述用硅胶柱层析分离的洗脱剂可为石油酸/乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的 体积比可为10 : 1;收率可达60%~70%。
[0017] 3)中间体2-金刚烧-5-硝基-1H-日引噪的制备
[001引在反应瓶中，依次加入2-金刚烧-1H-吗I噪和硫酸，揽拌状态降溫到0~5°C，再加 入硝酸钢的硫酸溶液，保溫反应，在反应液中加入冰水，析出黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干 燥得到粗产物，粗产物用硅胶柱层析分离得黄色中间体2-金刚烧-5-硝基-1H-吗I噪；
[001引在步骤如中，所述2-金刚烧-1H-吗I噪、硫酸、硝酸钢的摩尔配比可为1 : (15~ 20) : 1.05;所述保溫反应的时间可为1~化；所述粗产物用硅胶柱层析分离的洗脱剂 可为石油酸/乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的体积比可为5 : 1;得黄色固体产物2-金刚 烧-5-硝基-1护吗|噪，收率可达70%~85%。
[0020] 4)中间体2-金刚烧-5-氨基-1H-日引噪的制备
[0021] 在反应瓶中，依次加入乙醇、水、乙酸和铁粉；再在揽拌状态升溫到65~75°C，加 入2-金刚烧-5-硝基-1H-吗I噪，保溫反应，反应液热过滤，滤液减压浓缩除去溶剂；浓缩后 滤液里加入水，后在揽拌下加入乙酸乙醋，最后用碳酸氨钢调抑至7~8;过滤，分液，有机 相用无水硫酸钢干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离得红色中间 体2-金刚烧-5-氨基-1H-吗I噪；
[002引在步骤4)中，所述2-金刚烧-5-硝基-1H-吗I噪、铁粉、乙醇、水和乙酸的摩尔配 比可为1 : 4 : (30~50) : (80~100):巧~10);所述保溫反应的时间可为1~化； 所述浓缩后滤液里加入水的量可与乙醇等体积；所述在揽拌下加入乙酸乙醋的量可与乙醇 等体积；所述硅胶柱层析分离的洗脱剂可为石油酸/乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的体积 比可为3 : 1;收率可达65%~75%。
[002引 5)中间体2-金刚烧-5-异氯酸-1H-日引噪的制备
[0024] 在反应瓶中，依次加入Ξ光气和二氯甲烧，再在揽拌状态降溫到0~5°C，加入 2-金刚烧-5-氨基-1H-吗I噪的二氯甲烧溶液，继续加入Ξ乙胺，升到室溫反应3-地，过 滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离得白色中间体2-金刚烷基-5-异氯 酸-1H-吗I噪；
[002引在步骤5)中，所述Ξ光气、2-金刚烧-5-氨基-1H-吗I噪的摩尔配比可为1 : 1;所述硅胶柱层析分离的洗脱剂可为石油酸/乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的体积比可为 10 : 1;收率可达60%~70%。
[0026] 6) 1- (2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的制备
[0027] 在反应瓶中，依次加入2-金刚烷基-5-异氯酸-1H-吗I噪、甲苯、脂肪氨或未取代 或取代的芳基氨，再在揽拌状态升溫至70~80°C，保溫反应，再冷却，抽滤，滤饼用甲苯洗 涂，干燥，得白色固体产物1-(2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物。 [002引在步骤6)中，所述2-金刚烷基-5-异氯酸-1H-吗I噪、脂肪氨或未取代或取代的 芳基氨的摩尔配比可为1 : 1。所述保溫反应的时间可为8~lOh;收率可达85%~90%。
[0029] 所述1- (2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物可在制备治疗肿 瘤药物中应用。
[0030] 首先，利用Μ?Τ法对化合物进行体外抗肿瘤活性测试。测定特定浓度的化合物 在多种肿瘤细胞中的生长抑制率，确定敏感细胞。W1-(2-(金刚烧-1-基）-lH-吗I 噪-5-基）-3-取代脈衍生物用Μ?Τ法进行体外抗肿瘤活性测试。结果表明该类化合物对多 种肿瘤细胞有生长抑制作用。其中化合物1-(2-金刚烧-1H-吗I噪-5-基）-3-(2-氣-6-甲 基苯基）脈抑制肿瘤细胞H460生长效果比较明显。在本实验中设置0. 2μΜ、2μΜ、20μΜ 共3个浓度，并取2地、4她、72h、9化共4个时间点，测定其0D值，并计算各自的生长抑制率 IR值。实验结果表明，H460细胞对该化合物较敏感，能够呈时间和剂量依赖地抑制肿瘤细 胞生长，如图1。为进一步确定该化合物是否具有促调亡作用，采用westernblotting检测 Pa巧切割情况，Pa巧切割是细胞早期调亡的标志，因此能简便且有效地检测化合物促调亡 作用。仍采用上述较敏感的H460细胞，设置5μM、10μM、15μΜ共3个浓度，处理24h后进 行检测，结果表明该化合物能引起Pa巧切割，且呈一定的剂量依赖性，如图2。
[0031] 本发明提供一类具有新结构的1- (2-(金刚烧-1-基）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代 脈衍生物及其制备方法，反应成本低，产率高，反应过程简单易控制，适用于工业化生产，且 该类衍生物具有抗癌活性，可用于制备抗肿瘤药物和研究该类化合物的构效关系。
【附图说明】
[0032] 图1为1-(2-金刚烧-1H-日引噪-5-基）-3-(2-氣-6-甲基苯基）脈呈剂量和时 间依赖地抑制肿瘤细胞H460生长。在图1中，横坐标为时间化our);纵坐标为生长抑制率 (% )。
[003引图2为1- (2-金刚烧-1H-日引噪-5-基）-3- (2-氣-6-甲基苯基）脈能够引起Pa巧 切害d。在图2中，设置浓度梯度5μM、10μM、15μM，WDMS0作为对照，该化合物能够明显引 起Pa巧切割，且具有剂量依赖性。β-actin为内参。
【具体实施方式】
[0034] 为了便于理解本发明，现结合【具体实施方式】对本发明作进一步说明，W进一步i全 释本发明，但不构成对本发明的任何方式的限制。
[0035] 实施例1 : 2'-甲基金刚烧酷苯胺的合成
[0036] 在50血干燥单口瓶中依次加入2-甲基苯胺（l.〇7g，〇. Olmol)，碳酸钟（1.38邑， 0.0 lmol)，1-金刚烧甲酯氯（1. 98g, 0.0 lmol)，甲苯（20血），在揽拌状态下升溫至70~ 80°C，反应化，TLC检测反应已结束，停止反应。反应液冷却至室溫，抽滤，水洗滤饼，烘干得 白色固体产物2' -甲基金刚烧酷苯胺粗品2. 6g，粗品用15血乙醇重结晶，得2' -甲基金刚 烧酷苯胺2.35g，收率87.0%。
[0037]波谱数据：1护醒R(600MHz,CDCI3):δ7.88(d,J=8. 07Hz, 1H), 7. 18 ~ 7. 24 (m，2H)