OblongifolinC分子印迹聚合物及其制备方法和应用

文档序号:9591689阅读:707来源:国知局
Oblongifolin C分子印迹聚合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物技术领域,具体涉及一种OblongifolinC分子印迹聚合物及 其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 分子印迹技术(molecularimprintingtechnique,MIT)也叫分子模板技术,属于 超分子化学研究范畴,涉及物理化学,高分子化学,分子化学以及超分子化学等基础学科。 是指以某一特定的目标分子(模板分子,印迹分子)为模板,制备对该份子具有特异选择性 聚合物的过程。分子印迹技术在高效分析与分离、环境监测与分析、手性拆分、药物监测与 分析、传感器、人工酶与人工受体等领域有较多应用。当模板分子与聚合物单体接触时会 形成多重作用点,通过聚合过程这种作用会被记忆下来(分子识别),当模板分子去除后, 聚合物就形成了与模板分子空间构型相匹配的,具有多重相互作用位点的空穴,这样的空 穴将对模板分子及其类似物有选择性识别。基于该技术制备的分子印迹聚合物有特异识别 性、抗恶劣环境能力强、稳定性好、使用寿命长、应用范围广等特点。
[0003] 分离分析技术是分子印迹聚合物最广泛的应用之一,分子印迹聚合物在这一领域 较多的是用于液相色谱或薄层色谱固定相,其次是作为固相萃取剂富集分离复杂样品中目 标化合物。但在目前的研究中,仅仅是作为一个富集作用,未能纯化单体化合物是其较大局 限,在天然产物分离应用中还是存在较大局限性。
[0004] 如云南藤黄果皮提取物,该提取中有2个主要成分Oblongifolin C(0C)和GuttiferoneK(GK),其结构相似。GangXu等(J.Agric.Food Chem. 2008, 56(23):11144-11150)从Garciniayunnanensis的果皮(9.0kg)中分离得到 化合物OblongifolinC(9. 375g果实换算所得产量,得率:0. 10% ),其采用丙酮浸泡提取, 提取物经硅胶柱层析分离,氯仿、乙酸乙酯、丙酮依次洗脱,氯仿洗脱部位以正己烷-丙酮 体系过硅胶柱进行梯度洗脱分离,洗脱液再经制备液相反相C18柱纯化得到Oblongifolin C,对于GuttiferoneK,在正己烷-丙酮体系梯度洗脱后,洗脱液再以石油醚-丙酮体系过 硅胶柱进行梯度洗脱分离,后再采用制备液相经反相C18柱,以乙腈-0. 1%乙酸水为流动 相洗脱,纯化制得(9. 375g换算所得产量,得率:0. 10% ),该分离方法较为繁琐,效率低。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的旨在提供一种PPAP类天然产物OblongifolinC分子印迹聚合物及 其制备方法和应用。本发明的OblongifolinC分子印迹聚合物可用于从云南藤黄果实等 植物中纯化分离得到OblongifolinC和GuttiferoneK。本发明的OblongifolinC分子 印迹聚合物具有与0C分子结构相匹配的印迹位点,故而其对0C分子具有高度的亲和性。
[0006] 具体而言,本发明的第一方面是提供了一种OblongifolinC分子印迹聚合物,所 述聚合物通过以下步骤制备:
[0007] (1)将 0· 125mmolOblongifolinC、0. 5~lmmol功能单体、1· 25 ~5mmol交联 剂、0. 03~0. 12mmol引发剂和0. 5~6mL致孔剂混和,超声脱气,然后充氮除氧,密封后于 40~80°C恒温水浴聚合12~24小时,得到含有OblongifolinC的聚合物;
[0008] (2)将步骤⑴所得聚合物研磨、过筛,用10 %乙酸甲醇溶液回流除去 OblongifolinC,得到OblongifolinC分子印迹聚合物;
[0009] 所述的功能单体选自丙烯酰胺、4-乙烯基吡啶或甲基丙烯酸,所述的交联剂选自 二甲基丙烯酸乙二醇酯或二乙烯苯,所述的引发剂选自偶氮二异丁腈或偶氮二异戊腈,所 述的致孔剂选自二甲亚砜、乙腈、氯仿或甲苯。
[0010] 本发明的第二方面是提供了一种OblongifolinC分子印迹聚合物的制备方法,所 述方法包括以下步骤:
[0011] (1)将 0· 125mmolOblongifolinC、0. 5~lmmol功能单体、1· 25 ~5mmol交联 剂、0. 03~0. 12mmol引发剂和0. 5~6mL致孔剂混和,超声脱气,然后充氮除氧,密封后于 40~80°C恒温水浴聚合12~24小时,得到含有OblongifolinC的聚合物;
[0012] (2)将步骤(1)所得聚合物研磨、过筛,用10 %乙酸甲醇溶液回流除去 OblongifolinC,得到OblongifolinC分子印迹聚合物;
[0013] 所述功能单体选自丙烯酰胺、4-乙烯基吡啶或甲基丙烯酸,所述交联剂选自二甲 基丙烯酸乙二醇酯或二乙烯苯,所述引发剂选自偶氮二异丁腈或偶氮二异戊腈,所述致孔 剂选自二甲亚砜、乙腈、氯仿或甲苯。
[0014] 在一优选例中,所述方法还包括将OblongifolinC分子印迹聚合物置于真空干燥 箱中干燥至恒重的步骤。
[0015] 本发明还提供了OblongifolinC分子印迹聚合物在分离提纯OblongifolinC和 GuttiferoneK中的应用。
[0016] 在一优选例中,所述应用包括以下步骤:
[0017] (1)将上述OblongifolinC分子印迹聚合物装柱做SPE柱,用30%甲醇润柱;
[0018] (2)将云南藤黄果实95 %乙醇粗提物用70 %~100 %甲醇、70~100 %乙醇或 70~100 %乙腈溶解后上柱,所述溶剂的用量为所述粗提物用量的2~5倍,且所述粗提物 与所述OblongifolinC分子印迹聚合物的质量比为4:1~20:1 ;
[0019] (3)用30%~40%甲醇洗脱,直至高效液相色谱检测显示所述粗提物中的杂质已 全部洗脱完毕;
[0020] (4)用50%甲醇洗脱,直至高效液相色谱检测显示所述粗提物中的Guttiferone K已全部洗脱完毕,合并洗脱液,浓缩,干燥,得GuttiferoneK;
[0021] (3)用70%甲醇洗脱,直至高效液相色谱检测显示所述粗提物中的Oblongifolin C已全部洗脱完毕,合并洗脱液,浓缩,干燥,得OblongifolinC。
[0022] 在另一优选例中,所述高效液相色谱检测的色谱条件如下:
[0023]色谱柱:Shim_packVP-0DScolumn,250X4. 6mm,4. 5μm;
[0024] 流动相:C:乙腈,D:0· 1%甲酸水;
[0025]梯度洗脱程序:0-15min,C:D= 30:70 - 100:0,15-35min,C:D= 100:0 - 100:0, 35-50min,C:D= 100:0 - 30:70,50-60min,C:D= 30:70 - 30:70 ;
[0026] 流速:1.OmL/min;
[0027]检测波长:347nm。
[0028] 如本发明所用,所述功能单体优选为丙烯酰胺;所述的交联剂优选为二甲基丙烯 酸乙二醇酯;所述致孔剂优选为二甲亚砜;所述引发剂优选为偶氮二异丁腈。
[0029] 在本发明提供的OblongifolinC分子印迹聚合物的应用方法中,所述用于溶解云 南藤黄果实95%乙醇粗提物的溶剂优选为80%甲醇,所述溶剂的用量优选为所述粗提物 用量的5倍,所述粗提物与所述OblongifolinC分子印迹聚合物的质量比优选为12:1。
[0030] 本发明以OblongifolinC为模板,以本体聚合的方法制备得到了可特异性识别 OblongifolinC的分子印迹聚合物。而且,以OblongifolinC为模板制备得到的本发明的 0C分子印迹聚合物还能识别与0C结构类似的其他化合物,故而,利用其对印迹分子的特异 亲和力,可将本发明的0C分子印迹聚合物通过梯度洗脱的方式应用于从云南藤黄等植物 中提纯OblongifolinC以及与其结构相似的GuttiferoneK。经本发明人研究证实:用本 发明的OblongifolinC分子印迹聚合物提纯0C和GK,化合物的流失较少,并且其是从粗提 物浸膏一步直接纯化,得率显著高于现有的方法。
[0031] 相较于现有技术,本发明具有如下的优点:
[0032] (1)本发明首次将分子印迹技术应用于分子量大于600的天然产物的分离,与其 他分子印迹在天然产物中的应用相比具有一定的挑战性,并首次通过梯度洗脱方式及利用 分子印迹聚合物的选择性识别功能分离结构相似化合物。
[0033] (2)本发明的以OblongifolinC为模板分子的分子印迹聚合物生产成本低,有机 溶液用量少,较传统分离方法环境危害性降低。
[0034] (3)本发明的以OblongifolinC为模板分子的分子印迹聚合
当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1