一株中华根瘤菌及其用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株中华根瘤菌及其用途。
【背景技术】
[0002]氮肥是农业生产中最重要的生产资料之一。生产化学氮肥消耗大量能源，且化学氮肥价格日益上涨，加重了农民负担。化学氮肥在提高作物产量、保障我国粮食安全方面发挥了巨大作用，同时，不合理施氮已经形成了严重的污染，如水体富营养造成藻类过量繁殖，城市地下水硝酸盐污染威胁饮用水安全造。
[0003]大气中富含氮气，部分微生物可以将游离的氮元素转化为可供植物吸收的氮元素。微生物氮肥施入土壤后，利用微生物的生命活动将空气中的惰性氮素转化为作物可直接吸收的离子态氮素，将土壤中难溶的无机物变成可溶性的无机物增加土壤中的有效氮含量；将作物不能从土壤中直接利用的物质转化成可被吸收利用的物质，制造和协助农作物吸收营养，改善作物营养条件，抑制病原菌的活动，增强作物抗病和抗旱能力；土壤中大量微生物的活动使土壤有机质转化形成腐殖质，促进土壤团粒结构的形成，提高土壤肥力，改善土壤理化形状，增强土壤保肥、保水能力，从而提高中药材的产量和品质。选用高效固氮微生物菌种工厂化生产制成菌剂，或进一步与其它富含植物营养的物料复合加工成生物制品，应用于农业生产，可以提供作物氮素营养，改善作物根际生态环境，提高土壤生物肥力性状，这就是通常所说的固氮微生物菌剂或固氮微生物肥料。
[0004]菌种是微生物肥料生产应用的基础。目前，限制我国微生物肥料行业发展的瓶颈就是高效菌种，农业生产迫切需要能够高效固氮的生产用菌株。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一株具有固氮作用的细菌。
[0006]本发明提供的是中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.)G04，该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC N0.11376。
[0007]本发明的另一个目的是提供中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.)G04的用途，S卩用于制备菌剂，或者用于制备生物有机肥，或者用于制备植物栽培拌种剂，或者用于制备叶面喷施剂，或者用于制备育苗接种剂。
[0008]以上所述中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.) G04的用途中的菌剂，具体可为下述1)- 5)任一的菌剂:
1)用于固氮的菌剂；
2)产生固氮酶的菌剂；
3)促进植物生长的菌剂；
4)改良培肥土壤的菌剂；
5)提高植物抗逆性的菌剂。
[0009]该菌剂除包含活性成分的中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.)G04 CGMCC N0.11376夕卜，还可包括辅料，如草炭、人畜粪便、各类作物的秸杆等。所述菌剂还可包括载体，所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物载体为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白炭、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物为聚乙烯醇和或聚二醇。所述液体载体为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂为癸烷和或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。该菌剂可用于固氮、改良培肥土壤、促进植物生长、提高植物抗逆性、产生固氮酶等。
[0010]本发明的具有固氮作用的细菌是从农田作物根际土壤中分离固氮菌，进一步筛选较高固氮酶活性的菌株，最终筛选到高效固氮菌中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.) G04CGMCC N0.11376，该菌株固氮酶活性达到208.14 (C2H2，nmol h 1 ml 3，高于微生物肥料常用生产菌种圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum) 1.178，在接种剂、固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应用前景。
[0011]
保藏说明
菌种名称:中华根瘤菌拉丁名:Sinorhizobium sp.菌株编号:G04
保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称:CGMCC
地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期:2015年9月14日
保藏中心登记入册编号:CGMCC N0.11376
【具体实施方式】
[0012]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0013]下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0014]下述实施例中所使用的培养基如下:
固氮菌富集培养基:蔗糖15g，磷酸二氢钾0.8g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，碳酸钙l.0g，质量分数为1%的钼酸钠、硼酸、硫酸锰、硫酸亚铁(现配)水溶液各1ml，蒸馏水1000ml，pH6.5-7.0。
[0015]阿须贝培养基:甘露醇10g，酵母膏0.4g，氯化钠0.2g，碳酸钙l.0g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁 0.2g，蒸馏水 1000ml，ρΗ7.4-7.6。
[0016]固氮培养基:磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钾0.8g，硫酸镁0.2g，硫酸钙0.lg，氯化铁微量，钼酸钠微量，酵母提取物0.5g，甘露醇20g，蒸馏水1000ml，pH7.2。
[0017]以上均为液体培养基配方，相应的固体培养基在上述基础上添加琼脂15g，半固体培养基为在上述基础上添加琼脂5g。
[0018]下述实施例中所用的圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum) 1.178，公众可从中国工业微生物菌种保藏管理中心甘肃分中心获得该菌株，以重复本申请的实验。
[0019]
实施例1、中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.) G04 CGMCC N0.11376的分离及鉴定
一、菌种分离纯化
取5g 土样(采自甘肃省眠县)放入三角瓶中，加入50ml无菌水，封口后于摇床震荡20min制成混悬液，吸取5ml加入100ml固氮菌富集培养基中，28°C培养，72h后吸取5ml菌液加入100ml固氮菌富集培养基继续培养，重复培养三次后进行单菌落分离。分离采用平板划线法与梯度稀释法:平板划线法即用接种环蘸取菌液在阿须贝固体培养基上进行划线分离；梯度稀释法是将培养后的菌液按照10 2、ιο 4、ιο 6、10 8稀释度用无菌水制成菌悬液后，吸取0.lml在阿须贝固体培养基上均匀涂布。涂布好的平板于28°C静置培养，5-7d后挑取单菌落用平板划线法进行菌种纯化。将分离纯化所得的其中一个菌株命名为G04。
[0020]
二、菌种鉴定
从以下几个方面对分离纯化得到的G04菌株进行鉴定。
[0021]1.形态学鉴定
将处于对数生长期且菌落大小稳定，上述步骤分离纯化得到的G04进行单菌落状态观察，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、湿润度、菌落表面状态(是否平坦