一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及菌株培育技术领域，更为具体地说，设及一株解淀粉芽抱杆菌菌株及 其应用。
【背景技术】
[0002] ±传病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在±壤中，条件适宜 时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害。±传病害包括立枯、纹枯、青枯、枯萎、疫病、 巧倒、根腐、软腐、根结线虫、胞囊线虫等，运些病害通常侵染植物根部或茎部，从而引起作 物根茎部乃至全株发病，造成重大经济损失。
[0003] 目前主要是通过采用化学药剂对±传病害进行防控，而化学药剂的长期使用，会 造成水源±壤污染、生态平衡被破坏、农药残留、次要病害猎獄和使病源微生物产生抗药性 等一系列的严重后果。随着人们环保意识的增强，对食品安全问题的重视，W及对生态环境 建设，保护生物多样性和农业可持续发展的要求，使得生物防控±传病害成为当前研究和 开发的热点。
[0004] 芽抱杆菌度acillusSP.)是一类产芽抱的革兰氏阳性细菌，好氧或兼性厌氧生 活，能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和抗有机溶剂的内生抱子，所产芽抱可制成粉剂、可湿性 粉剂等各种剂型，且与化学农药混用后不失活，是理想的生防菌筛选对象。在芽抱杆菌中， 解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)是一种具有广谱抑菌活性的细菌，该解淀 粉芽抱杆菌具有较强的代谢产物产生能力，能够产生多种抑菌物质，因而具有较好的应用 前景。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株解淀粉芽抱杆菌菌株及其应用，W使本发明提供的解淀 粉芽抱杆菌及其所生产的发酵液能够有效防治植物±传真菌病害。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
[0007]本发明提供了一株解淀粉芽抱杆菌菌株，所述解淀粉芽抱杆菌菌株为解淀粉 芽抱杆菌IBFCBF-1，且所述解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的分类命名为：解淀粉芽抱杆菌 度acillusamyloliquefaciens),并已于2015年8月11日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中屯、（保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院 微生物研究所；邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNo. 11230。
[0008] 优选地，所述解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的菌落呈乳白色，半透明，圆形，边缘不整 齐，表面湿润光滑。
[0009] 本发明还提供了解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的制备方法，所述制备方法包括W下 步骤：
[0010] SOI:通过多点采样法采集±样，并将采集到的±样研细； W11] S02 :将研细的±样放入装有无菌水的离屯、管中充分震荡，得到±壤悬浮液；
[0012] S03:将所述±壤悬浮液梯度稀释，得到不同浓度的±壤悬浮液；
[0013] S04 :选取浓度为10 5、10 6和10 7的上壤悬浮液，并加入到Μ培养基平板上进行 涂布处理，放到30°C的培养箱中培养，得到菌落；
[0014]S05 :挑选形态不一的单菌落进行划线保种，培养24小时，得到分离菌，将所述分 离菌置于4°C的冰箱中保存备用；
[0015]S06 :将病原菌菌块接种到PDA培养基平板的中屯、，在距平板中屯、等距离处接种所 述分离菌，25 °C培养，选择抑菌圈最大的为解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1。
[0016] 本发明还提供了解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的应用，所述解淀粉芽抱杆菌 IBFCBF-1及所述解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的发酵液应用于防治真菌病害。
[0017] 优选地，所述真菌病害为±传菌病害。
[0018] 优选地，所述±传菌病害为立枯丝核菌、亚麻炭痘菌、尖镶抱亚麻专化型、辣椒疫 霉菌、番茄灰霉菌、尖抱镶刀菌、禾谷镶刀菌、串珠镶刀菌、禾谷丝核菌、早疫病菌、禾顶囊壳 菌或核盘菌。
[0019] 优选地，所述解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的发酵液的制备包括：将解淀粉芽抱杆菌 IBFCBF-1接种在液体发酵培养基中，在25-30°C进行发酵培养，摇床震荡2-4天，得到解淀 粉芽抱杆菌IBFCBF-1的发酵液。
[0020] 优选地，所述摇床震荡的转速为18化/min。
[0021] 优选地，所述液体发酵培养基按照浓度包含W下组分：l〇g/L的膜蛋白腺，5g/L的 酵母浸出膏，20g/L的薦糖，5g/L的化C1。
[0022] 优选地，所述液体发酵培养基的pH为7. 2-7. 4,且在溫度为12rC时灭菌20分钟。
[0023] 本发明提供了一株解淀粉芽抱杆菌菌株，所述解淀粉芽抱杆菌菌株为解淀粉芽 抱杆菌IBFCBF-1，且所述解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中屯、，保藏编号为CGMCCNo. 11230。本发明提供的解淀粉芽抱杆菌菌株 IBFCBF-1具有抗真菌范围广、括抗效果显著的特性，因而具有良好的工业化应用前景。同 时，本发明提供的解淀粉芽抱杆菌菌株IBFCBF-1对农作物具有很好的促生长效果。
【附图说明】
[0024] 为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使 用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动 的前提下，还可W根据运些附图获得其它的附图。
[00巧]图1是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的制备流程图；
[00%]图2是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的菌落形态图；
[0027] 图3是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的革兰氏染色图；
[0028] 图4是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的芽抱染色图；
[0029] 图5是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的PCR产物琼脂糖电泳图；
[0030] 图6是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的16S序列构建的系统发 育树图；
[0031] 图7是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1括抗亚麻立枯病原菌的示 意图； 阳03引图8是本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1防治辣椒疫病的示意图。【具体实施方式】
[0033] 本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌菌株，使本发明提供的解淀粉芽抱杆菌及其 所生产的发酵液能够有效防治植物±传真菌病害。
[0034] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明实施例中的技术方案，并使本发明实 施例的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明实施例中的技术 方案作进一步详细的说明。
[0035] 本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌菌株为解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1，所述解淀 粉芽抱杆菌IBFCBF-1于2015年8月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中屯、（简称CGMCC，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微 生物研究所；邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNo. 11230。
[0036] 请参考附图1，附图1示出了本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的制 备流程图。本发明实施例提供的解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1的制备步骤为：
[0037] SOI:通过多点采样法采集±样，并将采集到的±样研细，本发明实施例中的±样 取自中国农业科学院麻类研究所況江实验站辣椒实验地； 阳03引 S02 :将研细的±样放入装有无菌水的离屯、管中充分震荡，制成浓度为10 1的±壤 悬浮液；
[0039] S03 :将所述±壤悬浮液逐级梯度稀释，得到不同浓度的±壤悬浮液； W40] S04 :选取浓度为10 5、10哺10 个梯度的±壤悬浮液，并加入到να培养基平 板上进行涂布处理，放到30°C的培养箱中培养48小时，得到菌落；
[0041] S05:挑选形态不一的单菌落在斜面上进行划线保种，并培养24小时，得到分离 菌，将所述分离菌置于4Γ的冰箱中保存备用；
[0042] S06 :用直径0. 5cm的打孔器将亚麻立枯、辣椒疫酶、黄瓜枯萎病原菌菌块接种到 PDA培养基平板的中屯、，在距平板中屯、2. 5cm十字交叉处等距离接种所述分离菌，同时W 不接种分离菌的作为对照（CK)，每次处理进行3次重复实验，在溫度为25°C条件下培养， 当对照组（CK)长满全部器皿时，记录抑菌圈的大小，选择抑菌圈最大的为解淀粉芽抱杆菌 IBFCBF-1〇
[0043] 其中，ΝΑ培养基为营养琼脂培养基，该营养琼脂培养基的组成按照浓度包括lOg/ L的膜蛋白腺，3g/L的牛肉膏，5g/L的化Cl。ΝΑ培养基在制备时的抑值为7. 2~7. 4,并经 过20min的灭菌处理，且灭菌时的溫度为121°C。PDA培养基为马铃馨葡萄糖琼脂培养基。
[0044] 本发明实施例提供了解淀粉芽抱杆菌IBFCBF-1括抗亚麻立枯病原菌的示意图， 示意图请参考附图7。从附图7中能够看出，当对照组全部长满器皿时，接种有解淀粉芽抱 杆菌IBFCBF-1分离菌的PDA培养基