一种唾液保存液及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种唾液保存液及其制备方法和用 途。
【背景技术】
[0002] 人体组织及体液中提取得到的核酸DNA样本在法医鉴定、疾病检测与治疗等领域 应用广泛。当前科研人员和临床医生主要用抗凝血提取DNA，然而抗凝血保存时间稍长后出 现凝集现象对提取过程造成不便。同时，通过采血提取DNA还有如下几点不便；（1)对采血 人员要求有专业的培训；(2)耗费人力，需要有人辅助完成；（3)部分人必理对抽血无法接 受，甚至出现晕血等状况；(4)通量低，无法大量随时随地采集样本。
[0003] 近些年来，科研和医药领域逐渐采用唾液取样的方式获取个体的DNA，因为唾液里 有一些口腔上皮细胞和唾液腺来源的白细胞，送些细胞里面有DNA。唾液样本采集相对于血 液样本采集来讲，对个体无创伤且无痛、操作简便、便于大量采样。此外，室温条件下保存时 间较长的唾液样本仍然可W提取得到完整的基因组DNA。
[0004] 唾液样本中含有大量人体分泌的体液，其中包含粘蛋白、球蛋白、消化酶和白蛋白 等物质，多种有机物的存在容易滋生大量的微生物，如何避免微生物的生长同时保证脱落 细胞中基因组DNA的完整，成为唾液保存液的关键作用所在。
[0005] 公布号为CN102440234A的中国发明专利申请公开了一种人体唾液保存固定液及 其制备与应用，该唾液保存固定液W藏糖、Tris-HCl、氯化镇、异硫氯酸脈和水为主要成分， 可用于唾液保存。但是，由于含有藏糖成分，虽然可W很好的保持该唾液保存固定液的粘度 并维持细胞渗透压，但是容易引起细菌等微生物的滋生；氯化镇作为核酸酶的激活剂，容易 引起DNA的降解；异硫氯酸脈作为变性剂虽可W抑制核酸酶的活性，但是容易引起细胞的 破裂，使得DNA处于暴露状态，易于断裂。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术的不足，本发明提供一种唾液保存液及其制备方法和用途，所述唾 液保存液用于保存唾液，能够长期保持细胞中DNA的完整性，并且能够避免细菌等微生物 的滋生。
[0007] 根据本发明的第一方面，本发明提供一种唾液保存液，其包括如下组分和含 量：氯化裡 0.l-2mol/L，Tris-HCll-50mmol/L，尿素 0.l-2mol/L，SDS0. 1-2 % (w/v)， 邸TAl-lOmmol/L，己醇10-90% (v/v)，体系抑范围在7-10之间。
[0008] 其中，w/v表示质量体积分数，v/v表示体积分数。
[0009] 在第一方面中，氯化裡W摩尔浓度计含量为0. 1-2111〇1/1，典型但非限定性的含量 例女Π0. 12mol/L、0. 15mol/L、0. 2mol/L、0. 3mol/L、0. 5mol/L、0. 8mol/L、l. 0mol/L、l. 2mol/ L、l. 5mol/L、l. 8mol/L、l. 9mol/L、0. 1-0. 5mol/L、0. 2-0. 8mol/L、0. 1-1. 2mol/L、0. 5-lmol/L、0.8-1. 5mol/L。
[0010] 在第一方面中，Tris-HClw摩尔浓度计含量为l-50mmol/l，典型但非限定性的 含量例女口 2mmol/L、5mmol/L、8mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、32mmol/ L、38mmol/L、42mmol/L、48mmol/L、l-20mmol/L、2-30mmol/L、l-42mmol/L、2〇-35mmol/L、 l〇-45mmol/L。
[0011] 在第一方面中，尿素W摩尔浓度计含量为0.l-2mol/l，典型但非限定性的含量例 女口 0. 12mol/L、0. 15mol/L、0. 2mol/L、0. 3mol/L、0. 5mol/L、0. 8mol/L、l. 0mol/L、l. 2mol/L、 1. 5mol/L、l. 8mol/L、l. 9mol/L、0. 1-0. 5mol/L、0. 2-0. 8mol/L、0. 1-1. 2mol/L、0. 5-lmol/L、 0. 8-1. 5mol/L〇
[0012] 在第一方面中，SDS(十二烷基硫酸钢）W质量体积分数计含量为0. 1-2%，典型 但非限定性的含量例如 0. 12%、0. 15%、0. 2%、0. 3%、0. 5%、0. 8%、1. 0%、1. 2%、1. 5%、 1. 8%、1. 9%、0. 1-0. 5%、0. 2-0. 8%、0. 1-1. 2%、0. 5-1%、0. 8-1. 5%。
[0013] 在第一方面中，邸TA(己二胺四己酸）W摩尔浓度计含量为1-lOmmol/L，典型但 非限定性的含量例如 1. 2mmol/L、1. 5mmol/L> 1. 8mmol/L>2. 2mmol/L>3mmol/L>3. 8mmo1 / L、4. 5mmol/L、5mmol/L、7mmol/L、8mmol/L、8. 8mmol/L、9. 2mmol/L、l-8mmol/L、l-6mmol/L、 l-5mmol/L。
[0014] 在第一方面中，己醇W体积分数计含量为10-90%，典型但非限定性的含量例如 10%、12%、15%、18%、20%、25%、35%、40%、50%、58%、62%、70%、78%、85%、88%、 10-60 %、20-50 %、20-80 %、30-85 %。
[0015] 在第一方面中，体系pH范围在7-10之间，典型但非限定性的pH值例如7. 2、7. 5、 7. 8、8. 2、8. 5、9. 0、9. 4、9. 5、9. 8、7-9、7-8. 5、7-8、7. 5-8. 5。
[0016] 作为优选方案，第一方面的唾液保存液包括如下组分和含量；氯化裡0. 1-1. 2mol/ L，Tris-HCll-42mmol/L，尿素 0. 1-1. 2mol/L，SDS0. 1-1. 2 % (w/v)，邸TAl-6mmol/L，己醇 10-60% (v/v)，体系抑范围在7-8. 5之间。
[0017] 作为进一步优选方案，第一方面的唾液保存液包括如下组分和含量；氯化裡 0. 5-lmol/L,Tris-肥 12〇-35mmol/L，尿素 0. 5-lmol/L,SDS0. 5-1 % (w/v)，邸TAl-5mmol/L， 己醇20-50% (v/v)，体系抑范围在7-8之间。
[0018] 作为最优选方案，第一方面的唾液保存液包括如下组分和含量；氯化裡0. 67mol/ L，Tris-HC133mmol/L，尿素 0. 67mol/L，SDS0. 6% (w/v)，邸TA3. 3mmol/L，己醇 30% (v/v)， 体系抑范围在7-8之间。
[0019] 在第一方面中，所述唾液保存液的溶剂为无菌水。一般而言，所述唾液保存液由氯 化裡、Tris-HCl、尿素、SDS、邸TA、己醇和无菌水组成，不再包含其它组分，因此本发明中"包 括"也可W替换为"由……组成"的表达方式。但是，为了其它特定目的，本发明的唾液保存 液还可W包括苯扎氯倭和/或苯甲醇，其中苯扎氯倭是常用的医用杀毒剂，常用于伤口消 毒中，加入苯扎氯倭能够进一步抑制细菌等微生物滋生。
[0020] 作为优选方案，所述唾液保存液包含苯扎氯倭0. 01-5% (w/v)，苯甲醇10% -90% (v/v) 〇
[0021] 在第一方面的唾液保存液中，尿素、己醇和SDS作为变性剂，可W将唾液中的粘蛋 白和球蛋白等有机物质进行变性处理，在降低液体粘性的同时使得微生物不易于滋生；己 醇和SDS作为抑菌剂，可W杀灭或抑制保存后的唾液中的微生物滋生；氯化裡作为还原剂， 可W中和保存后的唾液中氧化剂的作用，避免产生微生物滋生的环境；邸ΤΑ作为莖合剂可W莖合镇离子等核酸酶的激活剂，从而抑制核酸酶类对核酸分子的降解作用，达到保护核 酸的作用；SDS作为助溶剂，可W与蛋白质形成复合物而增强蛋白质的可溶性；同时采用 化is-HCl作为缓冲液，可W维持溶液环境抑在7-10、优选7-8范围内；此外，由于不含有藏 糖，进一步抑制微生物的滋生，并防止唾液保存液变得粘稠而影响DNA的提取效果。
[0022] 根据本发明的第二方面，本发明提供一种制备第一方面所述的唾液保存液的方 法，包括：
[0023] (1)按照终浓度的要求，分别称量尿素和氯化裡，量取正确体积的Tris-HCl母液、 SDS母液、EDTA母液和己醇，混合后揽拌溶解均匀