淡紫灰链霉菌及其用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药技术领域，特别涉及淡紫灰链霉菌及其用于制备α -葡萄糖 苷酶抑制剂的方法，以及该α-葡萄糖苷酶抑制剂在治疗糖尿病方面的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是以持续高血糖为主要生化特征的综合代谢性疾病，临床上主要分为I型 糖尿病和II型糖尿病，我国以II型居多。临床症状表现为血液及尿液中葡萄糖浓度异常 升高，患者有明显的多饮，多食，多尿，体重减轻的"三多一少"症状，并伴随有疲乏无力的症 状。随着病情加剧，持续高血糖可以造成许多并发症的发生，危害健康，严重可造成残疾或 死亡。伴随人民生活水平的不断提高，糖尿病作为一种慢性、终身性疾病，其发病人数快速 上升，严重影响到人们的正常生活。目前已被世界卫生组织列为慢性病防治的重点之一。
[0003] 治疗II型糖尿病的药物主要有胰岛素及类似物、促胰岛素分泌剂、胰岛素增敏剂 以及α-葡萄糖苷酶抑制剂。其中，α-葡萄糖苷酶抑制剂已被第三次亚太地区糖尿病治 疗药物指南推荐为降低餐后血糖的一线药物。II型糖尿病患者服用α -葡萄糖苷酶抑制剂 后，抑制了小肠绒毛上皮细胞刷状膜上的α -葡萄糖苷酶，可以延缓小肠上段对低聚糖类 的分解和吸收，减少单糖生成，从而使餐后血糖变化平稳，显著减轻高血糖的危害，减少并 发症和死亡率。
[0004] 目前临床上使用的α -葡萄糖苷酶抑制剂仅有化学-生物合成的阿卡波糖、伏格 列波糖和米格列醇，且这三种产品均为国外专利药。绝大多数II型糖尿病患者服用上述三 种药物，均可获得餐后血糖水平降低、糖基化血红蛋白降低、空腹血糖及脂肪水平降低，或 对胰岛素需求降低的效果，但效果与药物、剂量、个体因素而存在明显差异。此外，服药后， 患者会出现如下一些较明显的不良反应：胃胀、腹胀、腹泻、胃肠痉挛性疼痛、顽固性便秘、 肠鸣音亢进、排气增多，部分患者甚至会出现低血糖和损害肝脏。这些药物的副作用表明， 它们作为α -葡葡糖苷酶抑制剂仍然有待改进和完善，而患者也需要更安全、更方便的新 型药物。
[0005] 检索到以下关于α -葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法及其药物用途： 中国专利，申请人：赵全成；【申请号】200910067094. 3 ;发明名称：皂角总苷元及刺囊酸 在制备α -葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用；摘要：本发明公开了皂角总苷元及刺囊酸 单一成分在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的新用途，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药 物中可以是皂角总苷元或刺囊酸单一成分，也可以是含皂角总苷元及刺囊酸的组合物；可 用于制备各种药物制剂。
[0006] 中国专利，申请人：大理学院；【申请号】201010521335.x ;发明名称：B环甲氧基水 飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及B环甲氧基水飞蓟宾用于制 备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种B环甲氧基取代的水飞蓟宾酯 型黄酮木脂素或其可药用盐用于制备抑制α -葡萄糖苷酶、防治II型糖尿病的药物之用 途。该黄酮木脂素具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其40微克/毫升浓度时对 α -葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到75. 6%，通过测定其半数抑制浓度显示：该黄酮木 脂素抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的8倍。药效学结果表明该黄酮 木脂素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的药物用途。
[0007] 中国专利，申请人：大理学院；【申请号】201010521360. 8 ;发明名称：4-氯肉桂酰 水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及4-氯肉桂酰水飞蓟宾用于 制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种4-氯肉桂酰基取代的水飞蓟 宾酯型黄酮木脂素或其可药用盐在制备抑制α-葡萄糖苷酶、防治II型糖尿病的药物中 的应用。该黄酮木脂素具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其在40微克/毫升浓 度时对α -葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到92. 1%，通过测定其半数抑制浓度显示：该 黄酮木脂素抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的30倍。药效学结果表 明该黄酮木脂素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的 药物之用途。
[0008] 中国专利，申请人：大理学院；【申请号】201010521468. 7 ;发明名称：一种槲皮素二 聚体黄酮用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及一种槲皮素二聚体黄酮用 于制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种槲皮素二聚体黄酮或其可 药用盐用于制备抑制α-葡萄糖苷酶剂、防治II型糖尿病的药物之用途，该槲皮素二聚体 黄酮具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其在4微克/毫升浓度时对α-葡萄糖 苷酶的抑制活性强度已达到75. 0%，通过测定其半数抑制浓度显示：该槲皮素二聚体黄酮 抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的88倍。药效学结果表明该槲皮素 二聚体黄酮或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的药物 之用途。
[0009] 中国专利，申请人：大理学院；【申请号】201010521475. 7 ;发明名称：E环碘取代水 飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及E环碘取代水飞蓟宾用于制 备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种E环碘取代的水飞蓟宾酯型黄 酮木脂素或其可药用盐用于制备抑制α -葡萄糖苷酶防治II型糖尿病的药物的用途。该黄 酮木脂素具有极其显著的抑制α -葡萄糖苷酶的活性，其在4微克/毫升浓度时对α -葡 萄糖苷酶的抑制活性强度已达到64. 1%。通过测定其半数抑制浓度显示：该黄酮木脂素抑 制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的35倍。药效学结果表明该黄酮木脂 素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病药物之用途。
[0010] 以上专利都是化学合成的药物在制备α -葡萄糖苷酶抑制剂的药物方面的应用， 目前还没有文献公开淡紫灰链霉菌及其用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法与应用。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供一种淡紫灰链霉菌，并利用其进行发酵生产制备α -葡萄糖 苷酶抑制剂，以及将该α-葡萄糖苷酶抑制剂应用于治疗糖尿病。
[0012] 为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的： 本发明的淡紫灰链霉菌，分类命名为淡紫灰链霉菌（UN-8， 保藏编号CCTCC NO: M 2015512,保藏日期为2015年9月6日，保藏单位：中国典型培养物 保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。
[0013] 淡紫灰链霉菌（SirejOJamwWaeO UN-8菌株具有下述特性： 1.培养特征 在不同组分固态培养基上，菌株UN-8均生长旺盛。气生菌丝发达，颜色变化不明显，初 期为淡粉色或灰白色，后期均为粉灰色。基内菌丝发达，初期颜色变化较大，后期多为黄色 或黄褐色。在高氏合成1号培养基上可产生暗黄色可溶性色素。
[0014] 2.形态特征 菌株UN-8在高氏1号培养基生长良好，表现出典型的链霉菌菌落特征。菌落干燥致密， 不透明，具有颜色不同的气生菌丝和基内菌丝。形成的孢子堆圆而突起，并呈粉灰色，有褶 皱；气生菌丝呈粉状，表面呈现出较明显的同心环。400倍光学显微镜下观察，气生菌丝生 长较密集，孢子丝长而呈波曲状，有分支。
[0015] 3.生理与生化特性 菌株UN-8可在25~37°C下快速生长，最适培养温度为32°C ;可在pH6. 0~9. 0范围 生长，最适pH为8. 0 ;培养基中不需要添加生长因子；可广泛利用有机碳氮源和无机碳氮源 生长，营养要求简单。此外，菌株UN-8可在无任何碳源或氮源的培养基中正常生长。
[0016] 菌株UN-8的生理生化特征与碳源利用情况如表2所示。
[0017] 4. 16S rDNA 序列分析 利用扩增引物 7f (5,-CAG AGT TTG ATC CTG GCT-3'）和 1540r (5,-AGG AGG TGA TCC AGC CGC A-3'）对菌株16S rDNA序列进行扩增测序，测得序列长度1391 bp。将所得序列 提交至GenBank数据库，获得序列编号GenBank ID: KP329573,与GenBank所提供的基因序 列进行Blast比对分析，结果表明菌株UN-8与淡紫灰链霉菌（JamwoWae) 同源性为99%。结合菌落培养特征、形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析，可以 将菌株UN-8分类鉴定为淡紫灰链霉菌，具体为淡紫灰链霉菌（topees Ja UN-8 〇
[0018] 该淡紫灰链霉菌的核苷酸序列为： ccttcggggtggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgcccttcactctgggacaagcc ctggaaacggggtctaataccggataccactgcgggaggcatctcctgcggttgaaagctccggcggtgaaggatg agcccgcggcctatcagettgttggtggggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgac cggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaag cctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtg acggtacctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaagcgttgtccgg aattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccgaggcttaacctcgggtctgca ttcgatacgggctagetaga