一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用

文档序号:9642185阅读:430来源:国知局
一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业植物保护技术领域,具体涉及一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制 备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 香蕉枯萎病是一种毁灭性病害,其病原菌为古巴尖孢镰刀菌,其中以4号和1号生 理小种对香蕉的危害最严重。该病为土传病害,病原菌从香蕉根部侵入后,通过维管组织从 下部向上部传导,并在根、球茎和假茎中定殖,因而药剂防治的效果较差,选育抗病品种被 认为是防治该病最有效的措施。
[0003] 抗病品种的大田鉴定和筛选是香蕉枯萎病抗病品种选育的关键。目前,抗病品种 大田鉴定和筛选的方法主要有两种,一种是直接种植在发病的田块进行抗病性鉴定,另一 种是种植后大田接种单一的病原菌,这两种方法都存在病原菌单一、分布不均匀、发病慢、 鉴定周期长、筛选结果不准确等缺点。

【发明内容】

[0004] 为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种香蕉枯萎病复合病原菌。
[0005] 本发明的目的之二是提供了所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法。
[0006] 本发明的目的之三是提供了所述香蕉枯萎病复合病原菌的应用。
[0007] 本发明是通过以下技术方案来实现的:
[0008] -种香蕉枯萎病复合病原菌,由液体病原菌菌液和固体病原菌菌块组成,每IL所 述液体病原菌菌液中混合80~120g所述固体病原菌菌块。
[0009] 其中,所述液体病原菌菌液由香蕉枯萎病菌块接种于马铃薯-乳糖培养液中制 得;所述固体病原菌菌块由香蕉枯萎病病原菌母液接种至麦粒培养基中制得。
[0010] 其中,所述液体病原菌菌液为浓度为106cfu/mL的香蕉枯萎病4号生理小种病原 菌菌液和1号生理小种病原菌菌液混合物,所述香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1 号生理小种病原菌菌液之间的体积比3~5 : 1。
[0011] 其中,所述固体病原菌菌块为香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生 理小种固体病原菌菌块的混合物,所述香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生 理小种固体病原菌菌块之间的重量比3~5 : 1。
[0012] 所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法,具体为:
[0013] (1)病原菌母液的培养:将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接 种于马铃薯-乳糖培养液中,22°C~28°C下培养5~7天后,分别制得香蕉枯萎病4号生理 小种的病原菌母液和香蕉枯萎病1号生理小种的病原菌母液;
[0014] (2)液体病原菌菌液制备:
[0015] A.将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种到初级马铃 薯-乳糖培养液中,22°C~28°C下培养6~8天,得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理 小种的初级培养物;
[0016] B.接着将初级培养物接种到次级马铃薯-乳糖培养液中,22°C~28°C下培养7~ 9天至菌液浓度为108cfu/mL,分别得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌 液;
[0017] C.分别将所述香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液,稀释至 106cfu/mL,再将稀释后的两者菌液按体积比3~5 : 1的比例混合均勾,得到所述液体病 原菌菌液;
[0018] (3)固体病原菌菌块制备:香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母 液分别接种至麦粒培养基中,22°C~28°C下培养8~12天,分别香蕉枯萎病4号生理小种 和1号生理小种的固体菌块,将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块按重 量比3~5 : 1的比例混合均匀,得到所述固体病原菌菌块;
[0019] (4)复合病原菌的制备:按IL液体病原菌菌液加入80~120g固体病原菌菌块的 量,将所述固体病原菌菌块捣碎在所述液体病原菌菌液中,混合均匀即得所述香蕉枯萎病 复合病原菌。
[0020] 较佳地,所述的马铃薯乳糖培养液通过以下方法制得:称取去皮马铃薯块100~ 300g,加水800~1200ml煮沸15~25min至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止,用双层纱布过 滤取汁,加水至1000 ml,称取15~25g乳糖加入马铃薯过滤夜中,搅拌均匀,装入三角瓶中, 放入高压灭菌锅内在121°C ±2°C和98kpa±0. 2kpa下高温灭菌15~25min ;制得所述马 铃薯-乳糖培养液。
[0021] 较佳地,所述的麦粒培养基通过以下方法制得:将麦粒用水浸泡4~6h,沥干, 取70~80g麦粒,装入体积为100~150ml的培养瓶中,盖好瓶盖,放入高压灭菌锅内在 121°C ±2°C和98kpa±0. 2kpa下高温灭菌15~25min ;制得所述麦粒培养基。
[0022] -种香蕉枯萎病抗病品种选育中的应用,使用了所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
[0023] -种香蕉种苗和植株接种方法,具体为:
[0024] 首先,在香蕉枯萎病病区选择田块作为试验基地;
[0025] 其次,选择7~8片生长健壮的二级试管苗作为试验种苗,用锋利小刀在育苗杯内 插2~3刀,深度约8cm左右,进行伤根处理,
[0026] 再将试管苗浸泡到装有所述的香蕉枯萎病复合病原菌的盆中,浸泡时间约5min ; 再次,将伤根浸泡接种后的香蕉种苗种植于试验基地,种植后24h左右再淋足定根水;
[0027] 另外,在香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别挖穴淋菌接种一次所述的香蕉枯 萎病复合病原菌。
[0028] 本发明通过配制香蕉枯萎病复合病原菌、种植前种苗伤根浸泡接种、种植后植株 挖穴淋菌接种等措施,缩短了香蕉枯萎病抗(耐)病品种鉴定周期,提高了大田鉴定筛选的 准确性,为香蕉枯萎病抗(耐)病品种的选育提供技术参考。通过配制香蕉枯萎病复合病 原菌接种液并对香蕉种苗和植株进行接种,可以比较准确的鉴定不同香蕉品种的抗病性, 同时缩短香蕉品种抗病性鉴定的时间,从而筛选出抗(耐)香蕉枯萎病品种。 具体的实施方式
[0029] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的详细说明,以助于本领域技术人员理 解本发明。
[0030] 实施例1
[0031] 香蕉枯萎病复合病原菌的制备:
[0032] 1)培养基配制
[0033] 马铃薯-乳糖培养液:称取去皮马铃薯块200g,加水1000 ml煮沸20min左右至 马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止,用双层纱布过滤取汁,加水至1000ml,称取20g乳糖加入马 铃薯过滤夜中,搅拌均匀,装入三角瓶中,放入高压灭菌锅内在121°C和98kpa下高温灭菌 20min〇
[0034] 麦粒培养基:将适量麦粒用水浸泡5h,捞起后将水沥干,然后取约75g麦粒,装 入体积为120ml的培养瓶中,盖好瓶盖,放入高压灭菌锅内在121°C和98kpa下高温灭菌 20min〇
[0035] 2)病原菌母液的培养
[0036] 将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于灭菌后的马铃薯-乳 糖培养液中,每300ml培养液接入3块直径约I. 5cm的菌饼,在温度为25°C、转速为150r/ min摇床上振荡培养6天后,备用。
[0037] 3)液体病原菌菌液制备
[0038] 首先,培养病原菌菌液。配制7L和70L马铃薯一乳糖培养液,分别装入10L-100L 微生物发酵设备的IOL和100L发酵罐中,然后在121°C下高温灭菌30min。待培养液冷却 后,向IOL小发酵罐中接种500ml病原菌母液,25°C培养7天后,将小发酵罐中的菌液抽到 100L大发酵罐中进行接种,25°C培养8天,当菌液的浓度达到10 scfU/mL后,将菌液从发酵 罐抽出放到25L塑料壶中备用。按照以上培养方法,分别培养香蕉枯萎病4号生理小种和 1号生理小种病原菌菌液。
[0039] 其次,制备液体病原菌菌液。将经10L-100L微生物发酵设备培养的香蕉枯萎病4 号生理小种和1号生理小种菌液分别稀释到10 6cfu/mL浓度,然后将稀释后的两者菌液按 体积比4 : 1的比例混合均匀,得到液体病原菌菌液。
[0040] 4)固体病原菌菌块制备
[0041] 首先,培养病原菌菌块。用消毒过的移液抢取3ml香蕉枯萎病病原菌母液,接种至 消毒后的麦粒培
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