一种用于治疗肾癌的柠檬苦素类化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥的香橼中分离得到的一种具有治疗肾 癌作用的柠檬苦素类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 香橡，为芸香科柑橘属植物枸橡（CitrusmedicaL.)或香圆（Citruswilsonii Tanaka)的干燥成熟果实。香橼始载于《本草图经》，为传统中药材。味辛、苦、温，归肝、脾、肺 经，具有疏肝理气、宽中化痰功效，主治肝胃气滞、胸胁胀痛、脘腹痞满、呕吐噫气、痰多咳 嗽。
[0003] 香橼中含有挥发油（柠檬烯），多种脂肪酸（油酸、亚油酸、棕榈酸等），还含有柠檬 酸、苹果酸、维生素C、柠檬苦素、橙皮苷、辛弗林、N-甲基酪胺、果胶，鞣质等化学成分。
[0004] 现代药理学分析发现，香橼中的醇类物质对于止咳、化痰、理气有特殊的功效和疗 效。香橼中含有的柚皮苷可以改善血液微循环，主要药理是通过调节毛细血管的通畅，故可 以用于心血管的临床上的一些辅助治疗作用。香橼深加工产品开发的香橼挥发油的香型为 典型的古龙香水香型，具有名贵和高雅的特点。因此，香橼油作为一种名贵的天然香料，常 应用于各类化妆品中。此外，鉴于香橼药理特性和特殊的口感，还可将其果实进行压榨制成 保健饮料。该饮料由于属于果实的天然提取液，故成为一些疾病患者、保健者、运动员的最 佳饮品。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的香橼中分离得到的一种具有治疗肾癌作用的 柠檬苦素类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的香橼粉碎，用75~ 85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙 酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱体积， 减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次 用体积比为80:1、55 :1、35:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（(1)步骤 (c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯 的化合物(I)。
[0010]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018]图1为化合物(I)结构式；
[0019 ]图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海 凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]经鉴定香橡为芸香科柑橘属植物枸橡(CitrusmedicaL.)的干燥成熟果实。
[0024]制备方法：（a)干燥的香橼（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取（25LX3次），合并 提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次)和水饱和的正丁 醇(6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(355g)和正丁醇萃取物；（b)步 骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用15 %乙醇(8L)和75 % (12L)乙醇洗 脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（154g);(c)步骤(b)中75%乙醇 洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体积）、55:1(8个柱体积）、35:1(6个 柱体积）、10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d) 步骤(c)中组分4(46g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1(8个柱体积）、10:1(10 个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2 (27g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(35mg)。
[0025] 结构确证：白色无定形粉末;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z655.2722，结合核磁特 征可得分子式为C33H44O12，不饱和度为12。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρηι，DMS0_d6，500MHz):H-1 (7.33，d，J=10.3)，H-2(6.09，d，J=10.3)，H-5(2.79，d，J= 7.0)，H-6(2.23，m)，H-6(2.34， dd，J=16.8,7.0)，H-9(2.86，d，J= 7.3)，H-ll(5.44，dd，J=10.4,7.3)，H-12(5.59，d，J= 10.4)，H-15(3.80，m)，H-16(2.08，m)，H-16(2.12，m)，H-17(2.87，m)，H-18(0.94，s)，H-19 (0.92，s)，H-22(6.77，s)，H-23(6.01，br，s)，H-28(0.95，s)，H-29(1.04，s)，H-30(5.14，s)， H-30(5.23，s)，7-0CH3(3.57，s)，n-0Ac(1.87，s)，H-2'（2.21，m)，H-3'（1.01，d，J= 6.0)， H-4'（0.96，d，J= 6.0);核磁共振碳谱数据(ppm，DMS〇-d6，125MHz): 152·1 (CH，1-C)，125·3 (CH，2-C)，203.9(C，3-C)，45.7(C，4-C)，44.6(CH，5-C)，30.8(CH2,6-C)，173.7(C，7-C)， 135.8(C，8-C)，52.3(CH，9-C)，41.5(C，10-C)，71.1(CH，11-C)，74.2(CH，12-C)，45.6(C，13-C)，94.6(C，14-C)，78.7(CH，15-C)，30.3(CH2，16-C)，38.0(CH，17-C)，13.4(CH3，18-C)，20.9 (CH3，19-C)，134.8(C，20-C)，170.7(C，21-C)，147.3(CH，22-C)，95.8(CH，23-C)，22.4(CH3， 28-C)，22·3(CH3，29-C)，120·9(CH2，30-C)，51 ·8(CH3，7-0CH3)，169.4(C，11 -OAc)，20·5(CH3， 11-0Ac)，175.2(C，1'-C)，33.4(CH，2'-C)，18.3(CH3,3'-C)，18.6(CH3,4'-C);碳原子标记参 见图1。红外光谱表明该化合物含有羟基（3441CHT1)和羰基（1738(31^1)基团。该化合物在 235nm处有紫外吸收带，说明含有α，β-不饱和酮羰基基团。13CNMR谱和DEPT谱显示有33个碳 信号，其中包括八个甲基(一个甲氧基），三个亚甲基(一个烯烃亚甲基），十一个次甲基(三 个烯属次甲基，四个含氧次甲基），以及十一个季碳(两个烯烃季碳，五个羰基碳，一个含氧 季碳）。上述数据表明该化合物是一个B环开环的柠檬苦素类化合物。HMBC谱中，Η-1(δ !17.33，(1，1=10.3抱），]^-28(5!10.95,8)和]^-29( 5!11.04,8)与(：-3(5〇203.9)的相关性表明 C-3 为酮羰基。HMBC谱中，!1-11〇!15.44，(1(1，1=1〇.4,7.3他）与乙酰氧基0(：169.4)的相关 性，表明C-11(SC71.1)位连有一个