利用微波逆流提取黑胡萝卜花青素的方法
【技术领域】
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[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种黑胡萝卜花青素的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流萃取和膜分离技术纯化黑胡萝卜花青素的方法。
【背景技术】
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[0002]黑胡萝卜色素是从伞形科黑胡萝卜肉质根中提取的花色苷类色素。黑胡萝卜色素具有花青素类色素的共同特性，易溶于水、乙醇等极性溶剂。黑胡萝卜对热稳定，可适于食品的加工生产及高温杀菌;黑胡萝卜对常见的阳离子表现出较好的稳定性。
[0003]国外对黑胡萝卜色素的生产和应用较早，早在20世纪初，一些欧美发达国家就开始对其进行研究，且黑胡萝卜色素被广泛应用于食品工业的各个方面；国内的天然色素起步较晚，也只是近几年才开始对黑胡萝卜色素进行研究，目前国内还没有相关法律和标准对其说明，国内生产的黑胡萝卜色素多用于出口。灰菜:别名粉仔菜、灰条莱、灰翟、白藜，形态特征:黎科藜属一年生草本植物，高60?120厘米。茎直立粗壮，有棱和绿色或紫红色的条纹，多分枝;枝上升或开展。单叶互生，有长叶柄；叶片菱状卵形或披针形，长3?6厘米，宽2.5?5厘米，先端急尖或微钝，基部宽楔形，边缘常有不整齐的锯齿，下面灰绿色，被粉粒。秋季开黄绿色小花，花两性，数个集成团伞花簇，多数花簇排成腋生或顶生的圆锥花序;花被5片，卵状椭圆形，边缘膜质;雄蕊5个;柱头两裂。胞果完全包于花被内或顶端稍露，果皮薄和种子紧贴。种子双凸镜形，光亮。灰条菜嫩茎叶含蛋白质，脂肪，糖类，粗纤维，钙，磷，铁，胡萝卜素，维生素BI，维生素B2，维生素PP，维生素C，还含有挥发油，如棕榈酸、油酸、亚油酸及谷甾醇等。
[0004]黑胡萝卜色素在国内的起步较晚，目前国内的种植和生产企业只有一家，由于国内对天然色素的需求有限，其黑胡萝卜色素产品主要出口发达国家。
[0005]目前，国内提取黑胡萝卜素大多采用有机溶剂提取法，其存在提取率相对较低，且提取时间长等缺点，而采用微波逆流萃取，大孔树脂技术可以提高产品纯度，缩短了提取时间，可以得到25%以上纯度的黑胡萝卜花青素。
[0006]
【发明内容】
:本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用微波逆流萃取和大孔树脂技术纯化黑胡萝卜花青素的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:
[0007]利用微波逆流萃取和大孔树脂技术纯化黑胡萝卜花青素的方法。其步骤如下:
[0008](I)前期处理:将新鲜黑胡萝卜去掉根部，清洗，备用；
[0009](2)将黑胡萝卜粉碎，压榨，加入浓度为80 %的乙醇溶液进行微波逆流提取，微波功率在300?800W，萃取时间为80min?120min，萃取温度为70?80°C，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，萃取二次；
[0010](3)萃取液经粗滤，滤去固体物，合并两次滤液，得到过滤液；
[0011](4)将过滤液进行减压浓缩，回收乙醇，得黑胡萝卜花青素粗提物；
[0012](5)将所得粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
[0013](6)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黑胡萝卜花青素各阶段洗脱液；
[0014](7)将黑胡萝卜花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得黑胡萝卜花青素半成品；
[0015](8)将所得黑胡萝卜花青素半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以乙醇、乙醚以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黑胡萝卜花青素各阶段洗脱液；
[0016](9)将收集的洗脱液在70?85°C之间进行喷雾干燥，得黑胡萝卜花青素成品，其含量在25%以上。
[0017]所述的步骤(2)中，黑胡萝卜粉碎后过60?80目筛。
[0018]所述的步骤(2)中，加入乙醇的体积为黑胡萝卜粉碎体积的8?10倍。
[0019]所述的步骤(5)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的NKA-1I型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附。
[0020]所述的步骤(6)中洗脱用10?90%的乙醇进行洗脱。
[0021]所述的步骤(6)和(8)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
[0022]在所述的步骤(8)中，加入乙酸乙酯的量按体积计算为提取物溶解后的10?20倍。
[0023]所述的步骤(8)中所采取的乙醇与乙醚的体积为1?5:1。
[0024]实验适用于室温为15_30°C下进行。
[0025]用本法制备的黑胡萝卜花青素纯度可达到25%以上。本法适用于以各种含花青素的天然植物，天然植物的提取物为原料制备高纯度的花青素。用微波逆流萃取和大孔树脂技术纯化黑胡萝卜花青素可达到提取速度快、成品纯度高，分离效果明显、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
【具体实施方式】
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[0026]实施例1:利用微波逆流萃取和大孔树脂技术纯化黑胡萝卜花青素的方法。其步骤如下:
[0027](1)前期处理:将新鲜黑胡萝卜去掉根部，清洗，备用；
[0028](2)将黑胡萝卜粉碎，过60目筛，进行压榨，加入浓度为80 %的乙醇溶液进行微波逆流提取，加入乙醇的量为黑胡萝卜粉碎体积的8倍;微波功率在300W，萃取时间为120min，萃取温度为80°C，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，萃取二次；
[0029 ] (3)萃取液经粗滤，滤去固体物，合并两次滤液，得到过滤液；
[0030](4)将过滤液进行减压浓缩，回收乙醇，得黑胡萝卜花青素粗提物；
[0031](5)将所得粗提物用天津南开大学所生产的NKA-1I型树脂进行吸附；
[0032](6)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黑胡萝卜花青素各阶段洗脱液；
[0033](7)将黑胡萝卜花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得黑胡萝卜花青素半成品；
[0034](8)将所得黑胡萝卜花青素半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析