一种用高效液相色谱分离纯化奈马菌素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种纯化方法，特别是一种高效液相色谱法纯化莫西菌素前体奈马菌 素的方法。
【背景技术】
[0002] 随着抗寄生虫药需求的持续增长，得到高纯度高药效的抗寄生虫药物已是一种不 可或缺的技术需求。
[0003] 莫西菌素（Moxidectin)是一种新型的抗寄生虫大环内酯类第三代阿维菌素类药 物，其有更高的脂溶性和水溶性，在血浆中的代谢产物比其他阿维菌素类的药物如伊维菌 素、多拉菌素等高，其在体内停留的时间长，因而药效持续更长，可对牛、羊、骆驼安全注射 并预防体内外寄生虫。若想高效生产莫西菌素必须首先得到高纯度高回收率的奈马菌素 (Nemadectin)。奈马菌素经过化学修饰或者衍生，可以得到莫西菌素。
[0004] 奈马菌素又名尼莫克汀，它是一种十六元大环内脂类驱虫抗生素，由蓝灰链霉菌 发酵生产，也是米尔贝霉素族的一员，同莫西菌素一样可以用于治疗牛羊等动物体内外寄 生虫。其具有杀虫谱广、易降解、低残留、无抗药性、对人畜无害、环境污染少等优点。奈马菌 素药学活性不如莫西菌素，高纯度的奈马菌素对高纯度的莫西菌素的合成具有重要意义。
[0005] 奈马菌素的分子式为C36H520s，其结构式如下：
[0006]
[0007] 奈马菌素相对分子质量小于2000,其疏水性较强，在有机溶剂中易溶，可采用反相 液相色谱（RPLC)的方法制备。
[0008] 中国专利CN104193760A公开了一种利用奈马菌素发酵液提取奈马菌素粗品的方 法，该方法主要采用板框过滤、闪蒸干燥、浸提、降膜浓缩、酸化、脱色处理、萃取、反萃取、吸 附、结晶等一系列物化过程，得到奈马菌素粗品。但该过程步骤繁杂，且该专利并未涉及该 过程得到奈马菌素的纯度。
[0009] 中国专利CN103588784A公开了一种制备高纯度奈马菌素的方法，该方法需要经 过萃取、离子交换树脂脱色、大孔吸附树脂1吸附萃取液中的蛋白质、多糖和色素等杂质， 大孔树脂2吸附、分离奈马菌素等多个步骤才能使奈马菌素从纯度58% -59%的粗品达到 纯度90%以上。
[0010] 在这些现有技术中，有的纯化方案仅能得到纯度较低的奈马菌素粗品，产品的纯 度不能达到后续高效生产莫西菌素的要求，因而需要进一步提高其纯度以满足要求。有的 则工序复杂，须经过脱色、萃取、吸附等诸多步骤，并且所用的淋洗液体积较多，有机溶剂比 例较大，成本较高，对人体和环境有一定影响，因而需要进一步减少工序及有机溶剂的用 量，以达到环境友好、纯度高、回收率高的奈马菌素纯品以满足后续要求。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的是提供一种用高效液相色谱纯化奈马菌素的方法，不仅能达到高的 纯度和回收率，而且流动相使用量小，纯化时间短，工艺步骤少，从而大大缩短生产周期。
[0012] 为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种用高效液相色谱纯化奈马菌素的方 法，所述方法是用苯乙烯-二乙烯基苯交联的微球为色谱填料，将奈马菌素粗品溶液上样 到色谱柱后，以酸性醇水溶液为流动相洗脱吸附在填料上的奈马菌素。
[0013] 优选的，所述苯乙烯-二乙烯基苯交联的微球是UniPS30-300或者UniPS 40-300。
[0014] 优选的，所述奈马菌素粗品用甲醇水溶液或者乙醇水溶液溶解。
[0015] 优选的，所述酸性醇水溶液流动相为pH在2-3的乙醇和pH在2-3的酸溶液。
[0016] 优选的，所述奈马菌素粗品的纯度在55% -70%。
[0017] 优选的，所述流动相洗脱吸附在填料上的奈马菌素过程：先用68-72%的酸性乙 醇水溶液洗杂9-10个柱体积，然后再用78-80%的酸性乙醇水溶液洗脱目标组分8-9个柱 体积，最后用90% -95%的酸性乙醇水溶液2个柱体积清洗残留组分。
[0018] 优选的，所述方法在装柱和纯化过程中的压力均小于4Mpa。
[0019] UniPS30-300和UniPS40-300是苯乙烯-二乙烯基苯交联的聚合物微球，孔径 300A、粒径分别为30± 1. 5μm和40± 1. 5μm，具有高度的粒径均一性。其作为色谱填料 具有耐酸碱、寿命长、反压低，并且载量高、分离效果好等优点。
[0020] 在纯化奈马菌素时，以UniPS40-300作为色谱柱的固定相，只需要一步即可将奈 马菌素粗品纯度从65% -68%提高到90%以上，且回收率在70%以上，同时具有很好的脱 色效果。本分离纯化方法兼顾了产品的纯度和回收率，是一种非常实用、快速的分离纯化奈 马菌素的方法，适合工业化生产推广。
[0021] 因此，本发明应用苯乙烯-二乙烯基苯交联的微球UniPS30-300和UniPS40-300 为色谱填料，以酸性醇水溶液为流动相洗脱吸附在填料上的奈马菌素，不但能够高纯度和 高回收率地对奈马菌素进行分离纯化，而且流动相使用量小，纯化时间短，工艺步骤少，从 而大大缩短生产周期。
【附图说明】
[0022] 图1是实施例1中使用的色谱填料UniPS30-300的扫描电镜图片。
[0023] 图2是实施例1中使用UniPS30-300分离纯化奈马菌素的制备图。
[0024]图3是实施例1中纯化前的奈马菌素粗品的HPLC分析图谱。
[0025]图4是实施例1中纯化后的奈马菌素的HPLC分析图谱。
[0026] 图5是按照实施例1中的方法纯化奈马菌素后的相关杂质和目标组分奈马菌素随 各收集馏分的含量变化趋势图。
[0027] 图6是实施例2中使用的色谱填料Uni PS 40-300的扫描电镜图片。
[0028] 图7是实施例2中使用UniPS 40-300分离纯化奈马菌素的制备图。
[0029] 图8是实施例2中分离纯化前后奈马菌素粗品与纯品的HPLC色谱对比图。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这 些实施例。
[0031] 实施例1
[0032] 奈马菌素的纯化：采用（4. 6X250)mm的色谱柱，UniPS30-300(聚苯乙烯-二乙 烯基苯共聚体球粒径30 ± 1. 5μm，苏州纳微科技有限公司）作为分离纯化填料，装柱体积 4.lml，用68-72%的酸性乙醇水溶液平衡处理柱子。流动相A为pH值为2~3的盐酸水 溶液，流动相B为pH为2~3的乙醇，不同百分比的流动相A和流动相B配成洗脱时所用 的流动相。奈马