一株短密木霉及其在黄瓜枯萎病防治中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一株短密木霉及其在黄瓜枯萎病防治 中的应用。
【背景技术】
[0002] 黄瓜枯萎病又名"萎蔫病"、"蔓割病"、"死秧病"，是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型 (Fusariumoxysporumf·sp·cucumerinum)引起的一种系统性病害，病原菌随种子、土壤、 肥料、灌溉水、昆虫、农具等传播，由土壤传染;从根或根颈部，通过根部伤口和根毛顶部细 胞间隙侵入;在维管束内寄生繁殖，并向上扩展，堵塞导管，产生毒素使细胞致死(导管型枯 萎病），是黄瓜生产上较难防治的病害之一，常造成较大损失。
[0003]病原菌以菌丝体、菌核和厚垣孢子在土壤、病残体和种子上越冬，成为第二年的初 侵染源，在土壤中可存活5~6年或更长的时间。土壤中病原菌数量的多少是当年发病程度 的决定因素之一，重茬次数越多病害越重。枯萎病的防治目前仍以化学农药防治为主，但一 般的化学杀菌剂防效期短，防治效果不理想，并且污染环境，破坏生态平衡。因此迫切需要 研究和开发利用有益微生物资源对病害进行生物防治。
[0004] 木霉属（Trichodermasp·)按照传统分类系统，属于无性型真菌（anamorphic fungi)丝抱纲（Hyphomycetes)、丝抱目（Hyphomycetales)、丝抱科（Hyphomycetaceae)，在 全世界范围均有分布，主要存在于森林、坡沟、农田、草地等潮湿的生境中，土壤、枯枝落叶 腐木等植物残体以及其他真菌的子实体都是其生长基物，其物种多样性丰富。木霉菌是一 类重要的自然生物资源，具有较高的经济价值。该属部分种类对植物病原真菌具有较强的 杀伤能力，因而作为生物防治制剂广泛使用，目前比较广泛地应用于农业、工业、环境保护 等相关领域。
[0005] 在农业领域，国际上已有50余种木霉生防制剂或菌肥产品注册登记，并进行商业 化生产，利用哈茨木霉TrichodermaharzianumRifai和绿木霉T.virensArx生产的商业 制剂TRICH0DEXX?和Soi1 -Gard?被广泛用于各种植物真菌病害的防治，在农业生产中发挥 着重要作用。授权公告号为CN103374536B的发明专利申请公开了枯草芽孢杆菌在黄瓜枯萎 病防治中的应用，其对黄瓜苗期枯萎病防效可达58.66%。目前研究的生防制剂对黄瓜枯萎 病的防效有待提高，需要寻找发现防效更好的生防制剂。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是如何防治黄瓜枯萎病。
[0007]为解决以上技术问题，本发明提供了一株短密木霉。
[0008] 本发明所提供的短密木霉，其菌株号为BF06,其在中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo. 11845,下文简称短密木霉BF06。
[0009] 短密木霉BF06可以分生孢子、菌丝或含有分生孢子和/或菌丝的菌丝体的形式存 在。
[0010]为解决以上技术问题，本发明提供了一种病原菌抑制剂和一种植物病害抑制剂。 [0011]本发明所提供的病原菌抑制剂，它的活性成分是短密木霉BF06和/或短密木霉 BF06的代谢物。
[0012]上述病原菌抑制剂中，所述病原菌抑制剂对尖孢镰刀菌黄瓜专化型具有抑制作 用。
[0013] 本发明所提供的植物病害抑制剂，它的活性成分是短密木霉BF06和/或短密木霉 BF06的代谢物。
[0014] 上述植物病害抑制剂中，所述植物病害可为黄瓜枯萎病。
[0015]上述植物病害抑制剂中，所述黄瓜枯萎病可由尖孢镰刀菌黄瓜专化型引起。
[0016] 上述植物病害抑制剂中，所述黄瓜枯萎病可为黄瓜苗期发生的枯萎病。
[0017] 培养上述短密木霉BF06的方法、制备所述病原菌抑制剂的方法、制备所述植物病 害抑制剂的方法均属于本发明的保护范围。
[0018] 本发明所提供的培养短密木霉BF06的方法，包括将短密木霉BF06在用于培养霉菌 的培养基中培养的步骤。
[0019] 本发明所提供的制备所述病原菌抑制剂的方法或制备所述植物病害抑制剂的方 法，包括将短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物作为活性成分，得到所述病原菌抑制 剂或所述植物病害抑制剂的步骤。
[0020] 短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物的下述任一种用途也属于本发明的保 护范围：
[0021] 1)短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物在抑制病原菌中的应用；
[0022] 2)短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物在制备病原菌抑制剂中的应用；
[0023] 3)短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物在抑制植物病害中的应用；
[0024] 4)短密木霉BF06和/或短密木霉BF06的代谢物在制备植物病害抑制剂中的应用。
[0025]上述用途中，所述病原菌可为尖孢镰刀菌黄瓜专化型，所述植物病害可为黄瓜枯 萎病。所述黄瓜枯萎病可由尖孢镰刀菌黄瓜专化型引起。所述黄瓜枯萎病可为黄瓜苗期发 生的枯萎病。
[0026] 上文中，所述病原菌抑制剂和所述植物病害抑制剂中，除所述活性成分外，还含有 载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。所述载体可为固体载体 或液体载体;所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物;所述矿物材料可为粘 土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种;所述植物材料可为玉米 粉、豆粉和淀粉中的至少一种;所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇;所述液体载 体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水;所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
[0027]所述病原菌抑制剂和所述植物病害抑制剂中，上述短密木霉BF06可以分生孢子、 菌丝或含有分生孢子和/或菌丝的菌丝体的形式存在。
[0028] 所述病原菌抑制剂和所述植物病害抑制剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬 浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
[0029] 根据需要，所述病原菌抑制剂和所述植物病害抑制剂中还可添加表面活性剂(如 吐温20、吐温80等）、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂）、pH调节剂等。
[0030] 实验证明，短密木霉BF06对引起黄瓜枯萎病的尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporumf·sp.cucumerinum)具有显著的诘抗作用，使用该菌株分生孢子悬浮液与普通 栽培土混合作生防基质，可有效防治黄瓜枯萎病，对黄瓜枯萎病的防治效果为90.4%。本发 明为保护地黄瓜无公害生产提供了优良菌种资源，对于黄瓜枯萎病，特别是黄瓜苗期枯萎 病的防治具有实用价值。
[0031] 保藏说明
[0032] 菌种名称：短密木霉（Trichodermabrevicompactum)
[0033] 菌株编号：BF06
[0034]保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0035] 保藏机构简称:CGMCC
[0036]地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0037] 保藏日期：2015年12月09日
[0038] 保藏中心登记入册编号：CGMCCNo. 11845
【附图说明】
[0039]图1为短密木霉BF06与尖孢镰刀菌黄瓜专化型对峙培养实验结果，其中，1号为对 照;2、3、4号皿左边的菌蝶为短密木霉BF06,右边的菌蝶为尖孢镰刀菌黄瓜专化型。
[0040] 图2为短密木霉BF06防治黄瓜枯萎病实验结果，其中，1、2、3号分别为病原菌接种 处理对照的整体、局部和根部;4、5、6号分别为多菌灵处理的整体、局部和根部；7、8、9号分 别为短密木霉BF06处理的整体、局部和根部；10、11、12号分别为空白对照处理的整体、局部 和根部。
【具体实施方式】
[0041] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042] 实施例1、短密木霉BF06的分离和鉴定
[0043] 1.1菌株分离
[0044]短密木霉BF06是从北京市海淀区凤凰岭森林土壤中分离得到。具体分离筛选方法 如下：取10g土样加入内装100ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中，于100转/min摇床上振荡 20min，取0.5ml加入4.5ml无菌水中，再依次稀释ΙΟΛΙΟΛΠΓ4倍，分别取以上土壤悬液 0.lml在PDA培养基平板上均匀涂布，超净工作台内吹至略干;每浓度3个重复，置25 - 28°C 恒温箱中培养，出现菌落后挑取单菌落进行稀释划线分离获得纯培养菌株。以尖孢镰刀菌 黄瓜专化型为靶标菌，利用平板对峙培养对纯培养菌株法进行抑菌活性检测，筛选出具有 明显抑菌活性的菌株短密木霉(Trichodermabrevicompactum)BF06CGMCCNo. 11845。
[0045] 1.2菌株鉴定
[0046] 1.2.1形态学鉴定
[0047]将保存在PDA斜面的短密木霉BF06菌株，在TOA平板上，26°C、自然光条件下活化培 养3d，挑取菌落边缘转到新的PDA平板上。培养2d，孢子尚未产生时，挑取菌丝丛制片，观察 分生孢子梗的形态。培养3-5d，菌落上可以看到明显的绿色或深绿色孢子时，挑取分生孢子 制片，观察分生孢子的形态。
[0048] 短密木霉BF06菌株的形态学特征：在PDA培养基上26°C、自然光条件下培养120h 后，菌落具有宽的不规则形状产孢簇，呈棉絮状，气生菌丝上大量分生孢子形成明显的同心 轮纹。分生孢子梗产生于孢子簇，开始时具有长的不育区段，或者沿梗散生分枝，在尖端具 有几个瓶梗，一般在分生孢子梗的基部或者孢子簇内的梗上可育分枝之间的间距较短，分 枝长度短于宽度。分生孢子梗分枝成对称分布，分枝较短，二次分枝较少见。分生孢子梗的 顶端着生2-4个瓶梗呈直角生出，安瓿形，瓶梗中部轻微膨大。分枝基部产生的瓶梗以及孢 子簇内产生的瓶梗短，中间明显膨大，在支持细胞上形成头状结构。分生孢子绿色，分生孢 子亚球形至卵圆形，光滑，2.02