一种芽孢菌快速产孢的培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物工程技术领域，具体地说是涉及一种芽孢菌快速产孢培养基。
【背景技术】
[0002] 益生菌的生存能力和稳定性是生产者在技术和市场方面临的两大挑战。由于芽孢 对多种不利环境有极大的抗性而成为近年来益生菌剂中一个研究热点。芽孢的抗性与多种 因素有关，并通过芽孢这种独特结构来实现。
[0003] 芽孢是产芽孢菌在生长发育后期在细胞内形成的圆形或椭圆形、厚壁含水量低、 抗逆性强的休眠构造。芽孢没有新陈代谢，能经受多种环境伤害，包括热、紫外线、多种溶 剂、酸、碱、酚类、醛、酶和烷基化试剂的处理。
[0004] 作为微生态制剂中的微生物，在制剂过程中要经过干燥、制粒、甚至是压片等处理 过程；口服制剂还需耐胃酸、胆盐；在贮存期内需保持其活性；甚至一些益生菌剂的疗效只 归结为芽孢或它们在肠道外的营养生长。因此，通过干燥、制剂、与其它成分包括抗生素配 伍用药和经过胃环境后保持活性及在贮藏期内有较高的稳定性，是益生菌剂有效性的重要 指标。但作为活菌制剂，要使其能够真正在生产中大量应用，必须解决产量、活性、稳定性、 功能性、成本、生产工艺方法等多方面问题。由于芽孢菌的芽孢对上述不良物理、化学刺激 具有极强的抗性及其他益生菌不具备的生物功能，因此如何快速整齐的产生健康稳定的芽 孢已成为亟待解决的问题。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述问题，本发明提供一种芽孢菌快速产孢培养基。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 芽孢菌快速产孢培养基，每升中包含玉米面、豆饼粉、豆柏粉中的一种或多种5~10g， 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖中的一种或多种：T6g，鱼粉2~8g，磷酸二氢钾0.l~0.5g，硫酸亚铁 0. 1~0. 5g，硫酸镁l~5g，硫酸锰 0. 1~0. 5g，碳酸钙 0. 1~0. 5g。
[0007] 进一步地，本发明还提供用所述的培养基培养芽孢菌的方法。
[0008] 具体地，包括如下步骤：取复苏好的菌液，按培养基体积1~5%的量接种到培养 基中，25~40°C，15(T200rpm培养 12~24h。
[0009] 应用本发明的培养基进行芽孢菌的培养，菌体生长同步性好，状态整齐，出孢时间 集中，可以缩短芽孢菌的产孢周期，在12h至18h就能够出孢80~90%，且芽孢稳定健康， 经过85°C水浴lOmin仍能得十亿以上的菌活数。该培养基配料简单，取材方便，配制工艺简 单易行，可操作性强，有利于芽孢菌的研究应用及其后续菌粉的生产。
【具体实施方式】
[0010] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神 和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴 实施例1 玉米面5g，豆饼粉5g，葡萄糖3g，鱼粉2g，磷酸二氢钾0.lg，硫酸亚铁0.lg，硫酸 镁lg，硫酸猛〇. 2g，碳酸|丐0.lg，水1000mL，混合均匀，121°C，高温湿热灭菌20min。
[0011] 实施例2 玉米面5g，蔗糖2g，鱼粉2g，磷酸二氢钾0. 2g，硫酸亚铁0. 2g，硫酸镁3g，硫酸锰 〇.lg，碳酸1丐〇. 3g，水1000mL，混合均匀，121°C，高温湿热灭菌20min。
[0012] 实施例3 豆柏粉l〇g，蔗糖4g，鱼粉2g，磷酸二氢钾0.2g，硫酸亚铁0.2g，硫酸镁3g，硫酸锰 〇.lg，碳酸1丐〇. 3g，水1000mL，混合均匀，121°C，高温湿热灭菌20min。
[0013] 实施例4 玉米面5g，豆柏粉5g，蔗糖6g，麦芽糖3g，鱼粉8g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸亚铁 〇. 5g，硫酸镁5g，硫酸猛0.lg，碳酸|丐0. 5g，水1000mL，混合均匀，121°C，高温湿热灭菌 20min〇
[0014] 实施例5 豆饼粉5g，豆柏粉5g，蔗糖2g，麦芽糖3g，鱼粉6g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸亚铁 〇. 5g，硫酸镁5g，硫酸猛0.lg，碳酸|丐0. 5g，水1000mL，混合均匀，121°C，高温湿热灭菌 20min〇
[0015] 实施例6 玉米面2g，豆饼粉3g、豆柏粉3g，葡萄糖2g，蔗糖2g，麦芽糖lg，鱼粉2g，磷酸二氢钾 0. 2g，硫酸亚铁0.lg，硫酸镁lg，硫酸锰0.lg，碳酸钙0.lg，水1000mL，混合均匀，121°C， 高温湿热灭菌20min。
[0016] 对比例1不同培养基，芽孢菌产孢时间及状态对比试验 制备不同种类的芽孢菌培养基，用于对比试验，各实验组的具体成分如下： Ml:玉米淀粉 1.5g，葡萄糖 5g，尿素lg，K2HP04 3g，KH2P04 1.5g，MgS04 0 . 5g，酵母 膏 0.2g，FeCl2 0·lg，CaC03 0·lg，大豆柏 10g，3.08% 浓度的MnS04 溶液 0· 1%，水 1000mL， pH7. 0~7. 2。
[0017]M2:豆饼粉 50g，蔗糖 20g，（NH4)2S04 15g，柠檬酸三钠 2. 5g，K2HP04 0· 3g，MgS04 0· 5g，FeS04 0· 005g，水 1000mL，pH7. 0~7. 2。
[0018]M3:牛肉膏3g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，NaCl5g，玉米淀粉3g，3. 08%浓度的MnS04 溶液 〇· 1%，水lOOOmL，ρΗ7· 0~7· 2。
[0019]Μ4:葡萄糖 15g，玉米淀粉 2g，豆饼粉 30g，MnS04lg，ΚΗ2Ρ04 1· 5g，MgS04 0· 5g，酵 母膏 0· 2g，FeCl30.lg，CaC030.lg，水 1000mL，ρΗ7· 0~7· 2。
[0020]M5:玉米淀粉 40g，豆饼粉 3g，CaC03 3g，KH2P04 5g，柠檬酸 0· 25g，MgS04 2. 5g， FeS04 0· 25g，水 1000mL。
[0021] M6 :葡萄糖 20g，玉米淀粉 40g，蛋白胨lg，NaN03 10g，K2HP04 3g，MgS04lg，CaC03 0· 9g，水 1000mL。
[0022] M7 :玉米粉5g，酵母粉L5g，豆饼粉20g，尿素2. 5g，蛋白胨0· 75g，KH2P042. 5g， CaC03 0· 5g，MgS04 0· 35g，水 1000mL。
[0023] M8:玉米淀粉lg，葡萄糖 15g，豆饼粉 30g，酵母膏 0· 2g，KH2P04 1. 5g，K2HP04 3g， MnS04lg，MgS04 0· 5g，CaC03 0·lg，FeCL30.lg，水lOOOmL。
[0024] M9 :玉米面 50g，葡萄糖 8g，豆饼粉 20g，麸皮 20g，NaCl4g，水lOOOmL。
[0025] M10 :玉米面17g，葡萄糖10g，黄豆粉23g，麦芽糖10g，酵母膏5g，水lOOOmL。
[0026] Mil:玉米面 40g，豆饼粉 30g，酵母粉 5g，K2HP04 5g，MgS04 1. 5g，水lOOOmL。
[0027] M12 :玉米面 20g，豆饼粉 30g，麸皮 20g，柠檬酸钠 5g，KH2P04 0· 3g，K2HP04lg，CaCl2 lg,水 1000mL〇
[0028] M13 :硫酸铵2g、碳酸钙6g、鱼粉4g、豆柏粉3g、葡萄糖7g、玉米粉15g、磷酸氢二钾 〇· 2g、硫酸镁(λ2g和硫酸锰(λ2g，水1000mL。
[0029] 实施例1至实施例6分别对应的培养基分别为试验例1至试验例6。
[0030] 取复苏好的枯草芽孢菌CGMCCNo. 4628菌液，按培养基体积2%的量接种到上述 培养基中，30°C，180rpm培养12~24h。过程中分别在12h，18h，24h显微镜观察并记录菌体 形态，并在24h发酵结束后取发酵液85°C水浴10min记录芽孢活力结果见表1 : 表1 :芽孢生成时间及状态
从表1的数据结果可以看出，相对比常用芽孢菌培养基，试验组的培养基在培养12h后，芽孢接近90%以上，缩短了产孢时间，大大的加快了出孢效率。经过85°C水浴，芽孢存活 率有很大提1?，为进一步的生广及应用做好准备。
[0031] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种芽孢菌快速产孢的培养基，其特征在于，每升培养基中包含玉米面、豆饼粉、豆 柏粉中的一种或多种5~10g，葡萄糖、蔗糖、麦芽糖中的一种或多种：T6g，鱼粉2~8g，磷酸 二氢钾0. 1~0. 5g，硫酸亚铁0. 1~0. 5g，硫酸镁l~5g，硫酸锰0. 1~0. 5g，碳酸钙0. 1~0. 5g。2. -种使用权利要求1所述的培养基培养芽孢菌的方法。3. 根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：取复苏好的菌液，按 培养基体积1~5%的量接种到培养基中，25~40°C，15(T200rpm培养12~24h。
【专利摘要】本发明提供了一种芽孢菌快速产孢的培养基，该培养基每升中包含玉米面、豆饼粉、豆粕粉中的一种或多种5~10g，葡萄糖、蔗糖、麦芽糖中的一种或多种3~6g，鱼粉2~8g，磷酸二氢钾0.1~0.5g，硫酸亚铁0.1~0.5g，硫酸镁1~5g，硫酸锰0.1~0.5g，碳酸钙0.1~0.5g。应用本发明的培养基进行芽孢菌的培养，菌体生长同步性好，状态整齐，可以缩短芽孢菌的产孢周期，且芽孢稳定健康。该培养基配料简单，取材方便，配制工艺简单易行，可操作性强，有利于芽孢菌的研究应用及其后续菌粉的生产。
【IPC分类】C12R1/07, C12N1/20
【公开号】CN105462870
【申请号】CN201410416569
【发明人】吴雅琨, 孙晓雯, 唐涛, 何增国
【申请人】北京大北农科技集团股份有限公司, 湖南大北农农业科技有限公司, 北京伟农生物科技有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2014年8月22日