直肠腺癌的诊治标记物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及SLC26A9基因在直肠腺癌诊断、治疗中的用 途。
【背景技术】
[0002] 直肠腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一。近年来，随着我国人民生活水平的提 高，饮食结构的改变，人口老龄化以及直肠腺癌普查的开展，直肠腺癌在我国的发病率呈逐 年上升的趋势，严重威胁着人们的健康。而且由于直肠腺癌早期大多数没有特殊症状或根 本没有症状，因此直肠腺癌的诊断常被延误。当贫血、消瘦、便血、腹痛等肿瘤症状出现时， 癌症常常已经到了中晚期。直肠腺癌的发病率和死亡率均较高。据统计，世界范围内直肠腺 癌患者每年新增约123万人，其中约有60万患者死亡。直肠腺癌生物学行为复杂，其发生发 展是一个多阶段、多因素的过程。
[0003] 目前临床上直肠腺癌早期诊断主要依赖于直肠指检、血CEA检测、粪便隐血检查、 直肠镜或结肠镜检查、盆腔磁共振检查、腹盆腔CT、直肠镜内B超、胸部CT或胸部X线检查。而 临床上的治疗外科手术为主，辅以化疗、放疗或靶向治疗等的综合治疗。手术治疗主要是根 据癌肿所在部位、大小、活动度、细胞分化程度、术前的排便控制能力及术前临床分期等因 素进行局部切除，腹会阴联合直肠癌根治术，永久性乙状结肠造口、经腹直肠癌切除术，经 腹直肠癌切除、近端造口、远端封闭手术。
[0004] 直肠腺癌早期临床症状隐匿，不易发现，大多患者就诊时已到中晚期，失去了最佳 手术时机。有报道表明，早期直肠腺癌患者术后5年生存率约为90%，而晚期患者仅为15%。 因此，早发现、早治疗是降低直肠腺癌患者高死亡率、改善预后的关键。随着分子生物学技 术的发展，国内外研究者不断探索直肠腺癌新的生物标志物，以对传统肿瘤标志物进行有 效补充，从而对直肠腺癌患者的病情监测、预后判断以及实施个体化综合治疗，而且对新型 抗肿瘤药物的研发和应用，均具有重要的理论意义和临床价值。
【发明内容】
[0005] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种直肠腺癌的诊治标记物， 为直肠腺癌的诊断和治疗提供一种分子手段。
[0006] 为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] 本发明提供了SLC26A9在制备抑制或预防直肠腺癌转移、侵袭的药物中的应用。
[0008] 进一步，所述的药物包含SLC26A9基因和/或其表达产物的抑制剂。
[0009] 进一步，本发明所述抑制剂包括:通过干扰RNA抑制SLC26A9基因表达的双链核糖 核酸，或基于SLC26A9抗原蛋白的肿瘤疫苗，或用于抑制SLC26A9蛋白活性的蛋白质。
[0010] 优选的，所述抑制剂是针对SLC26A9基因的siRNA。
[0011]本发明还提供了一种用于治疗直肠腺癌转移、侵袭的药物，所述药物包含SLC26A9 基因和/或其表达产物抑制剂。所述抑制剂包括抑制SLC26A9基因表达的物质、抑制SLC26A9 基因表达产物稳定性的物质、和/或抑制SLC26A9基因表达产物活性的物质。
[0012] 进一步，本发明所述抑制剂包括:通过干扰RNA抑制SLC26A9基因表达的双链核糖 核酸，或基于SLC26A9抗原蛋白的肿瘤疫苗、或用于抑制SLC26A9蛋白活性的蛋白质。
[0013] 本发明的药物还可与其他治疗直肠腺癌的药物联用，多种药物联合使用可以大大 提尚治疗的成功率。
[0014] -方面，本发明所述的"抑制或预防直肠腺癌转移、侵袭的药物"包含SLC26A9基因 和/或其表达产物的抑制剂。所述抑制剂包括抑制SLC26A9基因表达的物质、抑制SLC26A9基 因表达产物稳定性的物质、和/或抑制SLC26A9基因表达产物活性的物质。
[0015] 另一方面，本发明所述的"抑制或预防直肠腺癌转移、侵袭的药物"包括能够括抑 制细胞生长、促进细胞凋亡的物质。
[0016] 本发明提供了SLC26A9在制备预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转 移、判断直肠腺癌转移是否复发的产品中的应用。
[0017] 进一步，上面所提到的产品能够通过检测直肠腺癌组织中SLC26A9基因的表达水 平来预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断直肠腺癌转移是否复发。
[0018] 进一步，所述通过检测直肠腺癌组织中SLC26A9基因的表达水平:通过RT-PCR、实 时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测SLC26A9基因及其表达产物的表达水平进行检 测。
[0019] 其中，所述用RT-PCR来预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断 直肠腺癌转移是否复发的产品至少包括一对特异扩增SLC26A9基因的引物;所述用实时定 量PCR预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断直肠腺癌转移是否复发的 产品至少包括一对特异扩增SLC26A9基因的引物;所述用免疫检测预判直肠腺癌转移风险、 诊断直肠腺癌是否发生转移、判断直肠腺癌转移是否复发的产品包括:与SLC26A9蛋白特异 性结合的抗体;所述用原位杂交预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断 直肠腺癌转移是否复发的产品包括:与SLC26A9基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片预 判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断直肠腺癌转移是否复发的产品包 括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括与SLC26A9蛋白特异性结合的抗体，基因芯片 包括与SLC26A9基因的核酸序列杂交的探针。
[0020] 优选地，所述产品包括芯片、试剂盒。
[0021] 本发明提供了一种预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移、判断直 肠腺癌转移是否复发的产品，所述产品能够通过检测直肠腺癌组织中SLC26A9基因的表达 水平来预判直肠腺癌转移风险、诊断直肠腺癌是否发生转移。
[0022] 进一步，所述产品包括芯片、试剂盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片； 所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括 用于检测SLC26A9基因转录水平的针对SLC26A9基因的寡核苷酸探针;所述蛋白质芯片包括 固相载体以及固定在固相载体的SLC26A9蛋白的特异性抗体;所述试剂盒包括基因检测试 剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试剂盒包括用于检测SLC26A9基因转录水平的 试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括SLC26A9蛋白的特异性抗体。
[0023]进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法 检测SLC26A9基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对SLC26A9基因的 引物和/或探针。根据SEQIDNO.2所示的核苷酸序列信息设计出可以用于检测SLC26A9基 因表达水平的引物和探针。
[0024]与SLC26A9基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其 它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结 合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针 的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对 杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不 超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补 序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0025]进一步，所述固相载体包括无机载体和有机载体，所述无机载体包括但不限于有 硅载体、玻璃载体、陶瓷载体等;所述有机载体包括聚丙烯薄膜、尼龙膜等。
[0026]进一步，所述SLC26A9蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 SLC26A9蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、 scFv、Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与SLC26A9蛋白的结合能力即可。用于蛋 白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所 述抗体。
[0027]本发明的药物还可包括药学上可接受的载体，这类载体包括(但并不限于）：稀释 剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合剂如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊 精、蔗糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚 乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素等;表面活 性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等;致 湿剂如甘油、淀粉等;吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土和皂粘土等;润滑剂如硬 脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物 油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、 十二烷基硫酸镁等;填充剂如甘露醇(粒状或粉状）、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶 纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉 末、碳酸钙和碳酸氢钠等;崩解剂如交联乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、 交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。
[0028]本发明的药物可以使用不同的添加剂进行制备，例如矫味剂、泡腾剂、稳定剂、杀 菌剂、等渗剂、螯合剂、生物利用度剂等中的一种或几种。所述矫味剂包括但不限于甘露醇、 木糖醇、甜菊甙、乳糖、果糖、蔗糖、蛋白糖、麦芽糖醇、甘草甜素、环己氨基磺酸钠、明胶、阿 斯巴甜、香蕉香精、菠萝香精、香兰素、香橙香精、桔子香精、薄荷香精、人参香精、草莓香精、 枸橼酸、柠檬酸;所述泡腾剂包括但不限于苹果酸、柠檬酸或枸橼酸