一种葡萄籽中蛋白质的提取方法
【技术领域】
[0002] 本发明涉及一种葡萄籽中蛋白质的提取方法。
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【背景技术】
[0004] 葡萄(8抑口68)，是葡萄科(>；^&〇6&6)葡萄属(>；[1^8)的落叶藤本植物。果实可制成 葡萄汁、葡萄干和葡萄酒等产品，随着葡萄产品的生产量越来越大，使得加工过程中产生的 废弃物如葡萄皮、葡萄籽、葡萄废渣等亟待进行综合利用。
[0005] 有关研究表明葡萄废弃物中含有丰富的葡萄籽油、蛋白质、单宁、白藜芦醇等物 质，其蛋白质含量高、氨基酸种类非常齐全、矿物质丰富，对满足人体的需要都是非常重要 的，并且这些物质在药品、保健品、化妆品等行业也被广泛应用，所以如何将这些葡萄籽废 弃物加以综合开发利用，变废为宝意义深远。如果处理得当，既可以减轻给环境带来的污染 又可以创造出巨大的经济效益，从而可以达到双赢的效果。
[0006] 葡萄籽中的蛋白质主要是由16种氨基酸组成的，而且葡萄籽蛋白质所含的氨基酸 中有7种是人体所必需的氨基酸(人体必需的8种氨基酸为缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋 氨酸、苏氨酸、色氨酸、亮氨酸、赖氨酸），所以葡萄籽蛋白质具有较高的营养价值和研究价 值。蛋白质经过水解后得到的多肽具有更好的营养价值，这些低肽物质既能够作为能量物 质，又能调节人体的生理机能，有些研究表明葡萄籽蛋白质中的一些特殊序列还具有抗氧 化、降低血压、促进矿物质吸收、调节血脂等作用。所以，探究从葡萄籽中提取蛋白质的最佳 工艺条件有极大的应用价值。
[0007] 本申请应用响应面分析法对葡萄籽中蛋白质的提取工艺进行优化研究，采用多元 二次回归方程作为函数估计的工具，结合数学和统计学建立等高线和曲面模型，使得葡萄 籽中蛋白质的提取率达到最高，为葡萄籽的综合开发利用提供了一定的科学依据。
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【发明内容】
[0009]针对【背景技术】中存在的问题，本发明的目的在于提供一种葡萄籽中蛋白质的提取 方法，本申请通过碱溶酸沉法对葡萄籽中蛋白质提取工艺的条件进行优化，考察了原料、料 液比、提取时间和提取温度对葡萄籽中单宁提取率的影响，通过单因素实验和响应面优化 实验的结果分析，得出最佳的葡萄籽中蛋白质提取条件为提取时间为48.Olmin，提取温度 为60.89°C，料液比为1:32，在此条件下，蛋白质的提取率高达3.25%。
[0010]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的： 一种葡萄籽中蛋白质的提取方法，所述提取方法包括如下步骤： 1) 将脱脂葡萄籽柏进行粉碎、过筛、浸提、抽滤得到滤液和滤渣备用； 2) 将步骤1)中的滤液进行减压浓缩，将减压浓缩得到的馏出液备用； 3)将步骤1)中的滤渣及步骤2)中得到的馏出液进行浸提、抽滤、离心、加酸调等电点、 离心、沉淀、真空干燥得到粗蛋白。
[0011] 进一步，所述步骤1)中的粉碎、过筛具体为:取适量的脱脂葡萄籽柏，用高速多功 能粉碎机进行粉碎，然后使用60目的筛子过筛备用。
[0012] 进一步，所述步骤1)中的浸提的提取液为乙醇，所述乙醇的体积分数为30-70%，过 筛后的葡萄籽柏与所述乙醇的料液比为：1:40-1:80,提取时间为2-4h，提取温度为40-80 V。
[0013] 进一步，所述步骤1)中的浸提的提取液为乙醇，所述乙醇的体积分数为51.70%，过 筛后的葡萄籽柏与所述乙醇的料液比为 ：1:60，提取时间为3.081!，提取温度为61.87°〇。
[0014] 进一步，所述步骤3)中浸提的提取液为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度 为0.02 mol/L，料液比为：1:20-1:40，提取时间为30-70min，提取温度为40-80°C。
[0015] 进一步，所述步骤3)中浸提的提取液为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度 为0.02 mol/L，料液比为：1:32，提取时间为48. Olmin，提取温度为60.89°C。
[0016] 本发明具有以下积极的技术效果： 本申请应用响应面分析法对葡萄籽中蛋白质的提取工艺进行优化研究，采用多元二次 回归方程作为函数估计的工具，结合数学和统计学建立等高线和曲面模型，使得葡萄籽中 蛋白质的提取率达到最高，为葡萄籽的综合开发利用提供了一定的科学依据。
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【附图说明】
[0018]图1是不同pH对蛋白质提取液吸光值的影响曲线图； 图2是不同料液比对蛋白质提取率的影响； 图3是不同提取温度对蛋白质提取率的影响； 图4是不同提取时间对蛋白质提取率的影响； 图5是提取时间和提取温度的交互作用对蛋白质提取率的影响(等高线图）； 图6是提取时间和提取温度的交互作用对蛋白质提取率的影响(3D曲面图）； 图7是提取时间和料液比的交互作用对蛋白质提取率的影响(等高线图）； 图8是提取时间和料液比的交互作用对蛋白质提取率的影响(3D曲面图）； 图9是提取温度和料液比的交互作用对蛋白质提取率的影响(等高线图）； 图10是提取温度和料液比的交互作用对蛋白质提取率的影响(3D曲面图）。
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【具体实施方式】
[0020] 下面，参考附图，对本发明进行更全面的说明，附图中标示出了本发明的示例性实 施例。然而，本发明可以体现为多种不同形式，并不应理解为局限于这里叙述的示例性实施 例。而是，提供这些实施例，从而使本发明全面和完整，并将本发明的范围完全地传达给本 领域的普通技术人员。
[0021] 本申请提供了一种葡萄籽中蛋白质的提取方法，该提取方法包括如下步骤:1)将 脱脂葡萄籽柏进行粉碎、过筛、浸提、抽滤得到滤液和滤渣备用；2)将步骤1)中的滤液进行 减压浓缩，将减压浓缩得到的馏出液备用；3)将步骤1)中的滤渣及步骤2)中得到的馏出液 进行浸提、抽滤、离心、加酸调等电点、离心、沉淀、真空干燥得到粗蛋白。取适量的脱脂葡萄 籽柏，用高速多功能粉碎机进行粉碎，过筛(60目）备用。
[0022]如图1所示，将各组葡萄籽蛋白质提取液加酸调到不同的pH值，并沉淀离心后，测 定的吸光值；由图1可知，当pH=3.8时吸光值最小。所以，pH=3.8为葡萄籽蛋白质的等电点， 在此pH条件下蛋白质的溶解度最低，沉淀量最大，葡萄籽中蛋白质的提取率最高。
[0023] 如图2所示，取1 g原料对应加入不同体积的碱液，设置不同的料液比对葡萄籽的 蛋白质进行提取，计算不同料液比的蛋白质提取率。根据绘制的标准曲线查找所测得的吸 光值对应的蛋白质浓度，计算出蛋白质含量及提取率；由图2可明显看出，随料液比的增加 蛋白质提取率逐渐增大，是因为随碱液的增多溶出的蛋白质越来越多。当料液比为1:30左 右时蛋白质的提取率达到最大，而再增加料液比蛋白质提取率稍有下降，变化平缓。过多的 提取剂不仅会造成资源浪费而且还会给后续工作带来难度，所以舍弃料液比为1:40的水 平，而选择料液比为1:25、1:30、1:35的三个水平进行优化实验，进一步选取更优水平。
[0024] 如图3所示，根据蛋白质提取的适宜温度范围设定6个梯度水平进行葡萄籽中蛋白 质提取率的比较，计算不同提取温度下蛋白质的提取率。根据绘制的标准曲线查找所测得 的吸光值对应的蛋白质浓度，计算出蛋白质含量及提取率；由图3可明显看出，随着提取温 度的增加，葡萄籽中蛋白质的提取率也有所增加，60°C左右时蛋白质提取率最高，当温度继 续增高时蛋白质提取率逐渐降低。这是由于温度较低时，温度的增高将会促进蛋白质在碱 液中的溶解，提取的蛋白质含量逐渐增加。但是过高温度条件下蛋白质易发生化学反应结 构变化，导致蛋白质提取率下降。