一组用于鉴定仓储书虱的引物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一组用于鉴定仓储书虱的引物及其应用，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 书風（booklice)又名纸風（paperlice)、米風（ricelice),隶属于啮虫目 Psocoptera、书風科Liposcelididae、书風属Liposcelis Motschy lsky 1852。书風属昆虫 体型微小，体长0. 6-1. 5_，在世界范围广泛分布；其大多数生活于室内，少数生活于室外， 是仓储保护中的常见害虫。该类害虫具有活动能力强，取食范围广，生长周期短，繁殖方式 多样，携带多种病菌以及抗性强和防控难度大等特点，严重为害仓储物品并威胁人类健康。 书虱类害虫可随仓储物远距离传播，随着国际贸易及储粮调运的日益频繁，该类害虫传播 扩散风险日益增大。近年来，随着国际贸易的日益频繁，我国出入境检验检疫部门截获书虱 的批次逐渐增多。
[0003] 为害储粮的世界常见仓储书虱共计10种，其中包括嗜虫书虱 L. entomophila(Enderlein),嗜卷书風 L. bostrychophila Badonnel,无色书風 L. decolor (Pearman)，小目艮书風 L. paeta Pearman，啮书風 L. corrodens (Heymons)，暗 褐书風 L. brunnea Motsch μ Lsky,虚伪书風 L. mendax Pearman,皮氏书風 L. pearmani Lienhard,三色书風 L. tricolor Badonnel,红书風 L.rufa BroadheacL
[0004] 传统的书虱种类鉴定多以雌虫成虫形态特征为依据，存在专业技能要求高、耗时 长等缺点，尤其是非成虫态昆虫，如卵、幼虫和蛹等的准确鉴定难以实现，给检疫工作造成 很大困难。利用分子生物学技术进行昆虫鉴定研究，不受标本个体发育状态及样品完整性 的影响，可实现高效、便捷、准确的物种鉴定。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一组用于鉴定仓储书虱的引物及其应用。
[0006] 本发明提供一组引物，由如下（1)-(8)所示的引物对中的至少一对组成：
[0007] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子组成的引物对；
[0008] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子组成的引物对；
[0009] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子组成的引物对；
[0010] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子组成的引物对；
[0011] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子组成的引物对；
[0012] (6)SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子组成的引物对；
[0013] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子组成的引物对；
[0014] (8)SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子组成的引物对。
[0015] 上述引物中，所述引物由如下（1)-(8)所示的引物对组成：
[0016] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子组成的引物对；
[0017] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子组成的引物对；
[0018] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子组成的引物对；
[0019] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子组成的引物对；
[0020] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子组成的引物对；
[0021] (6) SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子组成的引物对；
[0022] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子组成的引物对；
[0023] (8) SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子组成的引物对。
[0024] -种鉴定或辅助鉴定仓储书虱的试剂盒也属于本发明的保护范围，该试剂盒包含 上述任一所述的引物；
[0025] 所述仓储书風为嗜虫书風、无色书風、啮书風、暗褐书風、虚伪书風、皮氏书風、二 色书虱和红书虱。
[0026] -种鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法也属于本发明的保护范围，包括如下步骤： 以待鉴定的仓储书虱的基因组DNA为模板，分别以如下（1)-⑶任意所示的引物对为引物， 进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；如果以如下（1)所示的引物对为引物得到的PCR扩增产 物为369bp，则待鉴定的仓储书虱候选为嗜虫书虱，如果以如下（2)所示的引物对为引物得 到的PCR扩增产物为300bp，则待鉴定的仓储书虱候选为无色书虱，如果以如下（3)所示的 引物对为引物得到的PCR扩增产物为200bp，则待鉴定的仓储书虱候选为啮书虱，如果以如 下（4)所示的引物对为引物得到的PCR扩增产物为450bp，则待鉴定的仓储书虱候选为暗褐 书虱，如果以如下（5)所示的引物对为引物得到的PCR扩增产物为506bp，则待鉴定的仓储 书虱候选为虚伪书虱，如果以如下（6)所示的引物对为引物得到的PCR扩增产物为293bp， 则待鉴定的仓储书虱候选为皮氏书虱，如果以如下（7)所示的引物对为引物得到的PCR扩 增产物为257bp，则待鉴定的仓储书虱候选为三色书虱，如果以如下（8)所示的引物对为引 物得到的PCR扩增产物为335bp，则待鉴定的仓储书虱候选为红书虱 ：
[0027] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子组成的引物对；
[0028] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子组成的引物对；
[0029] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子组成的引物对；
[0030] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子组成的引物对；
[0031] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子组成的引物对；
[0032] (6) SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子组成的引物对；
[0033] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子组成的引物对；
[0034] (8)SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子组成的引物对。
[0035] 上述方法中，所述PCR扩增的体系中引物的浓度比均为1:1 ;
[0036] 所述PCR扩增的程序中退火温度均为50°C ;
[0037] 所述PCR扩增的体系均具体如下：2XPCR扩增缓冲液12. 5μ L，ddH2。9. 5μ L，模 板1 μ L，浓度为10 μ Μ的引物各1 μ L ;
[0038] 所述2XPCR扩增缓冲液的商品名称具体为2XTaq PCR MasterMix，购自生工生物 工程（上海）股份有限公司；
[0039] 所述PCR扩增的程序均具体如下：94°C预变性3min ;94°C变性30s，50°C退火30s， 72°C延伸30s，30个循环；72°C延伸5min。
[0040] 上述任一所述的方法中，所述PCR扩增的体系中模板的质量> 5ng。
[0041] 上述任一所述的引物在制备鉴定或辅助鉴定仓储书虱的产品中的应用也属于本 发明的保护范围。
[0042] 上述试剂盒在制备鉴定或辅助鉴定仓储书虱的产品中的应用也属于本发明的保 护范围。
[0043] 上述任一所述的应用中，所述仓储书虱为嗜虫书虱、无色书虱、啮书虱、暗褐书虱、 虚伪书風、皮氏书風、二色书風和/或红书風。
[0044] 本发明的特点如下：
[0045] (1)采用本发明提供的引物对仓储书虱进行种类鉴定快速高效，鉴定结果准确可 靠、检测灵敏度高，且可以实现高通量检测。
[0046] (2)与传统形态鉴定方法相比，本发明的鉴定对象不受种类性别、发育阶段和形态 鉴定特征完整程度的影响。传统形态鉴定方法一般只针对雌虫成虫的形态特征，需要玻片 标本制作技能，对样品完整性等要求高。
[0047] (3)鉴定过程操作简便，经济易行，可标准化，操作简便且所需费用较低，便于无专 业分类学知识背景的工作人员操作与运用。
【附图说明】
[0048] 图1为用于鉴定嗜虫书虱的引物对entoF3和entoR2的特异性检测结果。
[0049] 图2为用于鉴定无色书虱的引物对decF2和decR4的特异性检测结果。
[0050] 图3为用于鉴定啮书虱的引物对LcF2和LcR3的特异性检测结果。
[0051] 图4为用于鉴定暗褐书虱的引物对bruFl和bruR2的特异性检测结果。
[0052] 图5为用于鉴定虚伪书虱的引物对mendFl和mendR2的特异性检测结果。
[0053] 图6为用于鉴定皮氏书虱的引物对pearFl和pearR2的特异性检测结果。
[0054] 图7为用于鉴定三色书虱的引物对triFl和triR2的特异性检测结果。
[0055] 图8为用于鉴定红书虱的引物对rufaFl和rufaRl的特异性检测结果。
[0056] 图9为用于鉴定嗜虫书虱的引物对entoF3和entoR2的灵敏性检测结果。
[0057] 图10为用于鉴定无色书虱的引物对decF2和decR4的灵敏性检测结果。
[0058] 图11为