一种大花黄牡丹中提取的化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于有机化合物技术领域，具体涉及一种大花黄牡丹中提取的化合物及其 制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 西藏大花黄牡丹（Paeonia ludlowi i )为毛茛科（Ranunculacea)，苟药属 (Paeonia)，牡丹组(Sect.Moutan DC.)植物。仅生长在我国西藏的米林、林芝、波密、察隅、 隆子等县的海拔2500~3500m的雅鲁藏布江开阔河谷及山坡林缘灌丛中，数量极少，且呈逐 年减少趋势，属于西藏特有的濒临灭绝的保护植物。据当地地方志记载，藏民早在几百年前 就已经使用西藏大花黄牡丹根皮治疗妇科疾病、心脑血管疾病、皮肤癣菌病等。
[0003] 目前，对大花黄牡丹根皮的药用效果已经有相关研究，但由于大花黄牡丹根皮中 化学成分多种多样，对于其活性成分的研究还未见有相关报道，申请人利用正相硅胶柱色 谱、反相(MCI-Gel)柱色谱、凝胶（Sephadex LH-20)柱色谱、高效液相色谱等技术对大花黄 牡丹根皮的乙酸乙酯提取组分进行分离、纯化，得到单体化合物23个，通过紫外光谱、红外 光谱、质谱、核磁共振谱并结合文献报道确定其结构，其中包括单萜类化合物7个、单萜苷类 化合物3个、酚类化合物8个、酚苷类化合物3个、生物碱类化合物1个、三萜类化合物1个，其 中新化合物4个，已知化合物19个，均首次从西藏大花黄牡丹中分离得到。
【发明内容】
[0004] 本发明通过对大花黄牡丹根皮的深入研究，提供了一种单萜类的新化合物和其制 备方法。
[0005] 本发明具体通过以下技术方案实现：
[0006] -种大花黄牡丹中提取的化合物，其结构式如式I所示：
[0008] 式I所述化合物为无色油状，通过ESI-MS谱（[M+Na]+m/z 291)和HR-ESI-MS谱（[M+ Na] +m/z，291 · 1199calcd for CwfeoOsNa，291 · 1203)，确定该化合物的分子式&4112()〇5，其不 饱和度为5。红外光谱(KBr压片)给出了羟基(3434CHT1)和羰基（1740(^1)信号。紫外光谱显 示该化合物紫外最大吸收在202nm〇
[0009]所述的式I化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0010] 1)取干燥的西藏大花黄牡丹根皮粉碎后，加入95 %乙醇，室温浸提24h，重复抽滤， 50°C减压浓缩，利用乙酸乙酯进萃取，将萃取液在50°C条件下减压浓缩，得到干粉A;
[0011] 2)将干粉A与聚酰胺按质量比1:4~5的比例混合，利用体积浓度为40 %的甲醇水 溶液洗脱得到组分B;
[0012] 3)将组分B用120mL甲醇溶解，硅胶拌样，待溶剂完全挥发，进行硅胶柱色谱，用石 油醚/异丙醇体积比为8:1的混合液洗脱，得到组分C;
[0013] 4)组分C经硅胶柱色谱，用氯仿/丙酮体积比为10:1的混合液洗脱，得到组分D;
[0014] 5)组分D经30%甲醇纯化后得到式I单体化合物。
[0015]本发明制备方法步骤(1)中根皮与95%乙醇的质量体积比为1:10。
[0016] 本发明制备方法步骤(2)中干粉A与聚酰胺优选按质量比1:4.2的比例混合。
[0017] 本发明还提供了式I化合物作为抗真菌药物的应用。
[0018] 所述的药物可以按需要加工成任何医药上可接受的剂型，其中较优选的剂型为片 剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、冻干粉针剂或注射液。其配制可由通常的本领域技术人员所公 知的加工方法制备，即将活性物质式I化合物与液体溶剂或固体载体混合后，再加入填充 剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、溶剂、表明活性剂、香味剂、防腐剂、润滑剂、甜味 剂或色素中的一种或几种。
[0019] 本发明所述的药物可以由使用者在使用前经稀释或直接使用。
[0020] 本发明的有益效果为：本发明从西藏大花黄牡丹根皮中提取分离出一种新化合 物，该提取与分离方法简便、快速，效率高。同时该化合物具有抗真菌的活性作用，相比西藏 大花黄牡丹根皮药理作用更确切，解决了西藏大花黄牡丹根皮中化学成分复杂，质量难以 控制的问题。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0022] 实施例1
[0023] 取干燥的西藏大花黄牡丹根皮，粉碎后准确称取10kg，按照根皮与溶剂1:10(W/V) 的比例加入95%乙醇，室温浸提24h，抽滤，重复三次，50°C减压浓缩，随后将总的提取物用 乙酸乙酯萃取，萃取液在50°C条件下减压浓缩，得到356g的组分干粉A。
[0024]将干粉A称取356g与1.5kg聚酰胺拌样，进行中压液相色谱，反相柱填充材料为 MCI-Gel，利用体积浓度为40%的甲醇水溶液洗脱洗脱得到57g组分B，用适量(请具体限定 用量关系）甲醇溶解，硅胶拌样，待溶剂完全挥发，进行硅胶柱色谱，用石油醚/异丙醇体积 比为8:1的混合液洗脱，得到组分C，将组分C经过硅胶柱色谱，用体积比为10:1的氯仿和丙 酮的混合液洗脱，得到组分D，经HPLC(30%甲醇)纯化后得到6mg式I单体化合物。
[0025] 实施例2单体化合物结构鉴定
[0026] 1)波谱试验
[0027] 分离得到的化合物，经过分析液相色谱进行纯度检测，若无紫外吸收，分析液相色 谱无法检测，进行TLC检测。并根据单体化合物极性选取相应的氘代溶剂溶解，利用NMR检 测，四甲基硅烷(TMS)作为内标。新化合物需KBr压片进行IR鉴定化合物结构中所含的官能 团种类；同时，取适量化合物，用相应极性溶剂溶解进行UV检测，确定化合物结构中具有紫 外吸收的官能团种类。根据ESI-MS推测化合物分子量，再进一步根据HR-ESI-MS确定化合物 的分子量、分子式和不饱和度。
[0028] 2)糖构型的确定
[0029]参照酸水解薄层层析法，称取适量的化合物，甲醇溶解，配制成lmg/mL的溶液，用 毛细管在硅胶板上点样，并投放于装有浓硫酸的密闭展开槽中，60°C水浴30min，结束后取 出用吹风机吹至溶剂挥尽，在硅胶板空白处点上D-葡萄糖、D-芹糖、D-木糖标准品，将氯仿/ 甲醇（7: 3，v/v)的混合溶液用水饱和，取9mL用水饱和后的氯仿/甲醇溶液，再加入lmL的冰 醋酸混合均匀后作为展开剂展开，用邻苯二甲酸苯胺的正丁醇溶液喷雾，于l〇5°C加热 lOmin显色。
[0030] 苯胺-邻苯二甲酸显色剂的配置：准确称取苯胺〇.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于 1 OOmL水饱和的正丁醇。
[0031] 3)结果与分析
[0032] 无色油状。通过ESI-MS谱（[M+Na]+m/z 291)和HR-ESI-MS谱（[M+Na]+m/z， 291.1199calcd for (：1纽2005恥，291.1203)，确定该化合物的分子式(：14!12005，其不饱和 度为5。红外光谱(KBr压片）给出了羟基(3434cm-l)和羰基（1740cm-l)信号。紫外光谱显示 该化合物紫外最大吸收在202nm〇
[0033] ^-NMR 谱