一种新的佛木内酯类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从合子草的干燥叶中分离得到的一种具有治 疗前列腺癌作用的佛木内酯类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 合子草(Actinostemma lobatum Maxim.)为萌芦科盒子草属植物，又名天球草、无 白草。一年生攀援草本。叶片狭三角戟形或三角状心形，圆锥花序腋生，花小形单性，雌雄同 株。花冠黄绿色，裂片三角状披针形。蒴果卵圆形，绿色，下垂，有细刺状突起，熟时上半部盖 裂。种子2粒，灰色。花期7~8月。果期9~10月。药用部位为全草、种子及叶，分布于我国南北 各地，朝鲜、日本、苏联、印度、中南半岛也有分布。合子草性寒、味苦，有小毒，具有利尿消 月中、清热解毒、去湿之功效。主治肾炎水肿、腹水肿胀、毒蛇咬伤及疳积初起等病症。
[0003] 合子草中富含皂苷、黄酮、糖类、氨基酸等多种类型的化学成分。皂苷类为合子草 的主要活性成分，含量较大。大环内酯三萜皂苷和达玛烷型三萜类化合物具有显著的抗肿 瘤活性。黄酮主要有山柰酚-3-0-a-L-鼠李糖（1-6 )-?Η)_吡喃葡萄糖苷、芦丁、槲皮苷、山 柰酚和槲皮素。合子草不仅含有较高的三萜皂苷，糖总含量也较高。合子草多糖是由鼠李 糖、木糖、阿拉拍糖、葡萄糖、半乳糖和1个未知单糖组成，游离糖主要为葡萄糖、半乳糖及低 聚糖。
[0004] 现在研究表明合子草具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、抗菌、抑制染色体突变、增强免 疫等药理活性。合子草为我国传统中药，资源丰富，其中的三萜皂苷含量较高，结构新颖复 杂，抗癌活性显著。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从合子草的干燥叶中分离得到的一种具有治疗前列腺 癌作用的佛木内酯类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)合子草的干燥叶粉碎，用80 ~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱物 浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、55:1、35:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为80 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用85%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I)和 药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0020] 图3为不同浓度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0021 ]图4为10.0 mg/L化合物（I)作用不同时间后PC3和DU145存活率。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0025]制备方法：（a)将合子草的干燥叶(8kg)粉碎，用85 %乙醇热回流提取(25L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇（3LX 3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（347g)和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱12个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（131g); (c) 步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(8个柱体积）、55:1 (8个柱体积）、35:1 (6个柱体积）、15:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(29g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 20:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和10:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(llg)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为80 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(233mg)。
[0026] 结构确证:无色晶体（甲醇）；HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 369.1714，结合核磁特 征可得分子式为C2〇H26〇5，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρηι，DMS0_d6，500MHz): H-1 (2.24，dt，J=4.5，10.4)，H-2(1.48，m)，H-2(1.74，m)，H-3(1.53，m)，H-3(1.46，m)，H-4 (1.27，m)，H-9(1.86，dd，J = 2.8,13.7)，H-9(2.31，dd，J = 4.1，13.9)，H-10(2.40，dt，J = 4.4，13.5)，H-13(1.79，s)，H-14(1.17，d，J = 1.2)，H-15(0.78，d，J = 6.4)，H-3'（6.02，qq，J =1 ·0,7·0)，H-4'（1.95，dq，J=1.4,7.3)，H-5'（1.83，br，s);核磁共振碳谱数据5c(ppm， DMS〇-d6,125MHz):42.7(CH，卜C)，25.1(CH2,2-C)，28.9(CH 2,3-C)，39.8(CH，4-C)，63.7(C， 5-C)，204.6(C，6-C)，154.4(C，7-C)，103.2(C，8-C)，33.6(CH2,9-C)，37.8(CH，10-C)，124.7 (C，n-C)，171.3(C，12-C)，8.5(CH3，13-C)，16.3(CH3，14-C)，15.3(CH 3，15-C)，204.6(C，r-C)，127.5(C，2'-C)，138.4(CH，3'-C)，15.8(CH 3,4'-C)，20.6(CH3,5'-C);碳原子标记参见图 1。红外光谱表明该化合物含有α，β-不饱和-γ -内酯和羰基（1760，1650cm-1)。13C匪R谱显 示20个碳信号，包括五个甲基，三个亚甲基，四个次甲基（一个烯属次甲基），以及八个季碳 (三个羰基碳，三个烯烃季碳，一个含氧季碳）。咕和 13C NMR谱显示一个2-甲基-2-烯丁酮基 信号[3!11.83(3!1，1^，8，!1-5'），1.95(3!1，(^，了=1.4,7.3取，!1-4'），6.02(1!1，99，了=1.0， 7.0Hz，H-3'） ；SC204.6(C-1'），127.5(02'），138.4(03'），15.8(04'），20.6(C-5'）]，一个 甲基的取代的 α，β_ 不饱和-γ-R_[1.79(3H，s);SC154.4(C-7)，124.7(C-11)，171.3(C- 12)，8.5(013)]，一个羟基基团[5(：103.2((：-8)]。质子信号为5!11.17(3!1，(1，1=1.2他）和3 HO. 78 (3H，d，J = 6.4Hz)的甲基分别位于C-5和C-4位上。HMBC谱中Me-14与C-10和C-4的相关 性验证了上述推论。N0ESY谱中，Me-14与Me-15，H-10和H-1的相关性表明这些质子为β构型。 综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如图1所示，立体构型进一步通过Ε⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0027]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0028] 一、材料和仪器
[0029] 前列腺癌细胞株PC3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌细胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物⑴自制，HPLC归一化纯度大于98%，用二甲基亚矾(DMS0)配制成浓度为1.0g/L的储存 液备用。CCK-8试剂盒为日本同仁化学研究所产品。RPMI-1640培养基购自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)购自Hyelone公司。青/链霉素为上海先锋药业产品。胰蛋白酶购自华美生物工程 公司。二甲基亚砜(DMS0)购自上海华舜生物工程公司。琼脂(Agarose)、二硫苏糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)为Sigma公司产品。十二烷基磺酸钠(SDs)、三 氯甲基烷基甲烧(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100为?1'0111683公司产品。丙稀酞胺、过硫酸钱 (AP)购于苏州化学试剂厂产品。
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