一种柠檬苦素类化合物、制备方法和心肌保护的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从吴茱萸的干燥近成熟果实中分离得到的一 种柠檬苦素类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 吴茱萸为传统中药，始载于《神农本草经》，列为中品。其味辛、苦，性热，有小毒;具 有散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻的功效。主要用于治疗厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气等。 1977-2010版《中国药典》均收载吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa( Juss .) Benth ·，石虎E · Rutaecarpa( Juss ·) Benth · var · Officinal is (Dode)Huang 或疏毛吴茱萸 E .Rutaecarpa(Juss ·)Benth · var .Bodinieri (Dode)Huang的干燥近成熟果实。常绿灌木或 小乔木，主要分布在中国的贵州、四川、湖南、湖北、江西、广西、安徽和浙江省等。
[0003] 吴茱萸主要包括生物碱类、柠檬苦素类、挥发油类、黄酮类等化学成分。生物碱是 吴茱萸成分研究的主流。目前，从该属植物中已经分离鉴定出多种生物碱，主要有吲哚类、 喹诺酮类、呋喃喹啉类和吖喧酮类生物碱，另外，还有其他类型生物碱。柠檬苦素也是吴茱 萸的重要活性成分，主要包括柠檬苦素(C 26H3qO8),吴茱萸苦素，吴茱萸内酯醇，黄柏酮，吴茱 萸苦素乙酸酯，格罗苦素甲等化合物。吴茱萸富含挥发油，主要成分是月桂烯（占挥发油总 量的45.37 % )。此外，还包括萜类，异戊烯黄酮类黄酮化合物，香豆精，留体(β-谷留醇），木 质素，多糖，花色苷，多种氨基酸类化合物及微量元素和脂肪酸类化合物等。
[0004] 现代药理研究表明，吴茱萸具有镇痛作用，体温上升作用，对消化系统具有抗溃 疡、双向调节肠运动和保肝利胆作用，对子宫平滑肌和支气管具有双向调节作用，对心血管 系统具有降低血压，溶栓、增加血流量、扩张血管等作用，其中生物碱、柠檬苦素类化合物为 其主要有效成分。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从吴茱萸的干燥近成熟果实中分离得到的一种柠檬苦 素类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将吴茱萸的干燥近成熟果 实粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备心肌保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备心肌保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算E⑶和实验E⑶图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 经鉴定吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss. )Benth.的干燥近 成熟果实。
[0024]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0025] (a)吴茱萸的干燥近成熟果实（IOkg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(25LX3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(377g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（129g); (c)步骤 (b)中70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个 柱体积）、10:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d)步骤（c)中组分4(24g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1 (10个柱体积)和2:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」3个组分；（e)步骤(d)中组 分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度 洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(242mg)。
[0026] 结构确证:无色晶体（甲醇）；册43頂3显示[1+他]+为111/2 477.1922，结合核磁特 征可得分子式为〇26113()〇7，不饱和度为12。核磁共振氢谱数据51^。111，〇]\^〇-(16,50〇]\0^):!1-1 (6.66，d，J=12.0)，H-2(5.69，d，J=12.0)，H-5(2.48，d，J=13.0)，H-6(1.36，dt，J=13.0， 3.5)，H-6(1.84，t，J=13.0)，H-7(3.41，d，J = 3.5)，H-9(1.75，s)，H-ll(3.21，d，J = 4.5)， H-12(3.11，d，J=4.5)，H-14(2.79，s)，H-17(4.34，s)，H-18(0.61，s)，H-19(1.50，s)，H-21 (7.49，s)，H-22(6.48，s)，H-23(7.49，s)，H-28(1.25，s)，H-29(1.29，s)，H-30(1.15，s)，7-OH(4.79，d，J = 3.5);核磁共振碳谱数据 δ。（ ppm，DMSO-Cl6，125MHz): 159 · 5 (CH，I-C)，120 · 3 (CH，2-C)，166.4(C，3-C)，84.6(C，4-C)，47.0(CH，5-C)，28.2(CH2,6-C)，68.8(CH，7-C)， 39.1(C，8-C)，40.0(CH，9-C)，42.7(C，10-C)，53.8(CH，11-C)，65.7(CH，12-C)，44.5(C，13-C)，57.3(CH，14-C)，201.8(C，15-C)，197.7(C，16-C)，35.2(CH，17-C)，21.1(CH 3，18-C)， 16.9(CH3，19-C)，123.3(C，20-C)，140.1(CH，2hC)，111.2(CH，22-C)，141.8(CH，23-C)， 31.7(〇1 3,28-〇,26.2(〇13,29-〇，19.3(〇13,30-〇;碳原子标记参见图1。红外波谱表明该 化合物含有羟基(3464CHT 1)，羰基（1727CHT1)和烯烃（1681cnf1)等基团；且其在232nm有紫外 吸收，表明含有α，β-不饱和酯羰基部分。1H匪R谱显示五个甲基信号（δΗΙ. 50，1.29，1.25， 1.15,〇.61，各3!1，8)，|3型取代的呋喃环0!17.49,7.49和6.48，各1!1，8)，以及€[，0-不饱和酯 羰基部分[δH6·66(lH，d，J=12·0Hz)和5·69(lH，d，J=12·0Hz)]。 13CNMR、DEPT和HSQC谱中 显示有26个碳信号，包括五甲基，一个亚甲基，十二个次甲基(三个含氧碳和五个烯烃碳）， 以及八个季碳(三个羰基碳，一个含氧碳和一个烯烃碳）。上述数据表示，该化合物为柠檬苦 素类化合物，再结合不饱和数表明该化合物为五环结构。HMBC谱中H-I与C-3，C-5和C-IO; H-2与C-3;Me-28和Me-29与C-4;Me-19与C-I的相关性表明A环为α，β-不饱和七元内酯环。HMBC 谱中，质子(δΗ3.41，d，J = 3.5Hz)与C-7 (δ〇68.8)的相关性表明B环的C-7位连有一个羟基。 此外，两个含氧碳信号[SC53.8(CH，11-C)和65.7(CH，12-C)]以及氢质子信号[3.21(d，J = 4.5抱，!1-11)，3.11((1，1 = 4.5抱，!1-12)]表明(：环存在一个11，12-环氧基团。通过圓8(：谱中 H-17与C-20，C-21和C-22的相关性可知呋喃环位于C-17位上。ROESY谱中，Η-6β与Me-19，Me-19 与 Me-29，Me-19 与 Me-30，Me-30 与 H-7，Me-30 与 H-12 以及 H-12 与 H-17 的相关性表明!1-7，!1-12，H-17，Me-19，Me-29 和 Me-30 为 β 构型。此外，Η-6α 与 H-5，H-5 与 Me-28，H-5 与 H-9，H-9 与 H-14，H-14与7-OH，以及H-14与Me-18的相关性表明它们均为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一 步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0027]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0028] -、材料和仪器
[0029] 新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF级），雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提供 (试验动物生产许可证:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(纯度2 98% )为自制。胎牛血清购于 Hy Clone公司，DMEM培养基购于GIB⑶公