一种预防与治疗肿瘤的肽聚糖-锌螯合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明是一种新物质的合成，此物质涉及医药、食品及饲料添加、生物化学等领域，特别涉及医药领域。
二、【背景技术】
[0002]现在只有对肽聚糖的制备及其方法，但并未有人进行肽聚糖-锌螯合物的制备。
[0003]肽聚糖对肿瘤的抑制和预防效果有限。肽聚糖的提取工艺耗费时间长，操作繁琐，提取率低，且提取试剂具有危险性。
[0004]现在只有用多肽或者有机酸来改变锌的形态，使无机锌离子转变成有机锌化合物。而本发明首次使用多肽与糖的聚合物来改变锌的形态，在不改变肽聚糖活性的情况下，使功效叠加。
三、
【发明内容】
[0005]本发明合成了一种新的物质，可从各种细菌中提取，由肽聚糖和锌离子螯合而成。此物质对食道癌、结肠癌、膀胱癌、肝癌、肺癌和乳腺癌等具有抑制作用，对头颈部癌症、食道癌及结肠癌等癌症的具有预防作用，能提高身体免疫力。同时，还具有高效补锌的效果。可作为药品、保健品、食品及饲料补锌剂。
[0006]本发明在肽聚糖制备方法的基础上，对制备方法进行了改进制备出一种新型物质(肽聚糖-锌螯合物)。本物质可以从各类细菌细胞壁中提取合成，且对肽聚糖提取工艺进行了改进，缩短了提取时间，增加了操作的简便性、有效性和安全性，增加了防治癌症的疗效。
[0007]本发明首次利用多肽和糖的聚合物来改变锌的形态，将无机锌离子转变成了有机锌化合物，增加了人体吸收的高效性，使肽聚糖与锌的功效得到叠加。
四、【具体实施方式】
[0008]制备方法:
[0009]1、收集菌种:将乳酸菌(双歧杆菌、嗜热链球菌、保加利亚菌等皆可)经扩大培养后，4000r/min，30min离心后，取沉淀温箱65°C，2_3h烘干，以恒重为准。
[0010]2、去除磷壁酸:取乳酸菌样品，按照固体液体比为1:5加入预热至65°〇、10%1^八(三氯乙酸)，65°C抽提lh。离心4000r/min，30min，去上清液，取沉淀用双蒸水彻底洗涤。蒸馏水和乙醇(1:2)清洗5次，每次五分钟，4000r/min离心。
[0011]3、去脂:取沉淀，按固液(1:3)加入甲醇，4000r/min，30min离心。同法甲醇:氯仿(1:1)及氯仿各清洗一次，脱脂后离心，控干氯仿。
[0012]4、水解多余蛋白质并进行螯合:将固体物质转入平皿中，加入10ml提前过滤除菌并预热至37°C的含有胰蛋白酶(lmg/ml)及碱性蛋白酶(0.5mg/ml)、ΡΗ7.2的Tris-HCl缓冲液、400yg/mL ZnCl。将平皿置于空气摇床，37°C振荡孵育24h。孵育结束后，三角瓶中的样品离心(4000r/min，15min)获得沉淀，将沉淀用PH7.2的Tris-HCl的缓冲液振荡摇匀后，离心(4000r/min，30min)，弃上清，如此离心清洗两次。
[0013]5、乳酸菌壁肽聚糖-锌螯合物的分离纯化:向沉淀加入400yg/mL ZnCl溶液，将螯合液连续进行透析，透析后45°C温箱烘干，得到肽聚糖-锌螯合物。
[0014]产品为淡黄色，提取合成率可达12%。
[0015]产品说明:肽聚糖锌螯合物包括完整肽聚糖与锌的螯合物、非完整肽聚糖(即肽聚糖片段)与锌的螯合物。以上提取的大部分是完整肽聚糖与锌的螯合物。细菌中一般都可以提取合成肽聚糖-锌螯合物。
[0016]效果:1、单一的肽聚糖只能做到对结肠癌等肿瘤细胞进行抑制，且防治效果有限。单一的锌以离子形态不易让人体吸收，且有副作用。
[0017]2、肽聚糖-锌螯合物的效果比肽聚糖预防和治疗更加有效，尤其对消化系统癌症，且改变了锌的形态，使人体对锌的吸收更加高效，提高人体免疫力，辅助肽聚糖更加防治癌症。
[0018]3、肽聚糖-锌螯合物的提取合成工艺更比单一肽聚糖的提取更加简便、安全，缩短了提取时间，提高了提取效率。
【主权项】
1.肽聚糖-锌螯合物，其特征为由肽聚糖与锌螯合而成，可从细菌中提取。2.—种肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，包括(I)收集菌种并用65°C烘箱烘干；(2)用65°C的TCA(三氯乙酸)去除磷壁酸并经双蒸水、蒸馏水、乙醇洗涤沉淀；(3)加入甲醇去脂；(4)水解多余蛋白质并加入400yg/mL ZnCl进行螯合；(5)向沉淀中加入400yg/mLZnCl溶液，将乳酸菌壁肽聚糖-锌螯合物进行连续透析，分离纯化，然后烘干。3.根据权利要求1所述的肽聚糖-锌螯合物，其特征是，由锌离子与完整肽聚糖或非完整肽聚糖(肽聚糖片段)螯合而成。4.根据权利要求1所述的的肽聚糖-锌螯合物，其特征是，以多肽与糖的聚合物将锌离子转变成有机锌化合物。5.根据权利要求1所述的肽聚糖-锌螯合物，其特征是，可以从各种细菌中提取合成。6.根据权利要求2所述的肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，在收集菌种时沉淀用温箱65°C，2-3h烘干，以恒重为准。7.根据权利要求2所述的肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，在去除磷壁酸沉淀时加入65°C的TCA(三氯乙酸)，先用双蒸水洗涤，然后用蒸馏水和乙醇(1: 2)清洗5次，每次五分钟。8.根据权利要求2所述的肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，在去脂时按固液(1:3)向沉淀中加入甲醇。9.根据权利要求2所述的肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，在水解多余蛋白质并进行锌螯合时用平皿加入37°C的含有胰蛋白酶(lmg/ml)及碱性蛋白酶(0.5mg/ml)、PH7.2的Tris-HCl缓冲液、400yg/mL ZnCl进行孵育螯合。10.根据权利要求2所述的肽聚糖-锌螯合物的制备方法，其特征是，在乳酸菌壁肽聚糖-锌螯合物分离纯化时向沉淀中加入400yg/mL ZnCl溶液，将螯合液连续进行透析，透析后45°C温箱烘干，得到肽聚糖-锌螯合物。
【专利摘要】本发明是一种预防与治疗肿瘤的肽聚糖-锌螯合物，此物质涉及医药、食品及饲料添加、生物化学等领域，特别涉及医药领域。单一的肽聚糖对肿瘤的防治效果有限，且肽聚糖的提取工艺繁琐，耗时长，危险性大。肽聚糖-锌螯合物的效果比肽聚糖防治肿瘤更加有效，尤其对消化系统癌症，肽聚糖-锌螯合物的提取合成工艺更比单一肽聚糖的提取更加简便、高效、安全。单一的锌离子不易让人吸收，且有副作用。本发明首次利用多肽和糖的聚合物来改变锌的形态，将无机锌离子转变成有机锌化合物物，使人体对锌的吸收更加高效，提高人体免疫力，更能辅助肽聚糖的防治癌症功效。此物质对多种癌症具有抑制和预防作用，能提高身体免疫力，还具有高效补锌的效果。
【IPC分类】A61P35/00, A61K38/16, C08B37/00
【公开号】CN105504084
【申请号】CN201610085401
【发明人】许玉灿
【申请人】许玉灿
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2016年2月2日