动物淋巴细胞分离液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种动物淋巴细胞分离液及其制备方法，属于生物医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 传统的动物淋巴细胞分离液是采用泛影葡胺和聚蔗糖进行配置。其原理是依赖聚 蔗糖在离心的条件下形成浓度梯度，实现对不同细胞的分离，但因聚蔗糖的粘度非常高，不 利于在分离过程中的细胞移动，为改善聚蔗糖的粘度，往往在配方中加入一定量的泛影葡 胺，降低粘度，有利于分离过程中细胞的移动。但泛影葡胺的价格非常昂贵，我们尝试用泛 影酸钠替代泛影葡胺，价格将降低6倍。我们初步试验结果表明，用泛影酸钠替代泛影酸葡 胺，得到了和泛影酸葡胺类似的分离效果，实现了低成本的淋巴细胞分离液的目的。但同时 我们也发现，用泛影酸钠替代影酸葡胺后，在进行淋巴细胞分离时，离心分离时细胞条带的 形成时间（细胞成带）明显延长。
[0003] 为改善这一不利的因素，我们对配方做进一步改进，尝试加入其它的非糖基类亲 水性高分子，和聚蔗糖混合，再加入泛影酸钠，探索是否可以改善上述泛影酸钠配方的不利 之处。
【发明内容】
[0004] 目的：为解决传统淋巴细胞分离成本高的不利之处，用低成本的泛影葡钠替代泛 影葡胺，得到了分离效果类似的低成本配方，但带来的不利之处是造成分离时，淋巴细胞成 带时间较长，本发明上述的低成本配方作进一步改进，得到一种低成本动物淋巴细胞分离 液，分离效果好，血小板污染少。
[0005] 技术方案:为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种动物淋巴细胞分离液，包括以下组分及质量百分比：10%泛影酸钠，5.2-4.4 %的聚鹿糖，0.8-1.6 %的非糖基单元的亲水性高分子聚合物，聚鹿糖与非糖基单元的 亲水性高分子聚合物的浓度之和为6%，余量为无热源的去离子水，总量为100% ;所述动物 淋巴细胞分离液在20°C下比重为1.077 ±0.001g/ml。
[0007] 所述非糖基单元的亲水性高分子聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯 醇。
[0008] 作为优选方案，所述的动物淋巴细胞分离液，包括以下组分及质量百分比：10%泛 影酸钠，5.2-4.4%的聚蔗糖，0.8-1.6%的聚乙烯吡咯烷酮，聚蔗糖合和聚乙烯吡咯烷酮的 浓度之和为6%，余量为无热源的去离子水，总量为100% ;所述动物淋巴细胞分离液在20°C 下比重为 1.077±0.001g/ml。
[0009] 所述的动物淋巴细胞分离液，制备方法包括以下步骤：
[0010] 1)泛影酸钠料液，配置方法为:称取无热源的泛影酸钠溶于无热源的去离子水中， 用氢氧化钠溶液调整pH至6.5-7.5，制成质量分数为20 %的泛影酸钠料液；
[0011] 2)聚蔗糖料液，配置方法为:称取无热源的聚蔗糖加热溶解于无热源的去离子水 中，以无热源的去离子水定容，制成聚蔗糖料液；
[0012] 3)聚乙烯吡咯烷酮料液，配置方法为：称取无热源的聚乙烯吡咯烷酮加热溶解于 无热源的去离子水中，以无热源的去离子水定容，制成聚乙烯吡咯烷酮料液；
[0013] 4)按照配方比例，将聚乙烯吡咯烷酮料液加入等体积聚蔗糖料液中，混合均匀，再 和泛影酸钠料液等体积混合均勾，降温至20°C;比重控制在1.077±0.001g/ml，除菌过滤， 即得。
[0014] 有益效果:本发明提供的动物淋巴细胞分离液中，用低成本泛影酸钠替代价格昂 贵的泛影葡胺，和聚蔗糖进行配伍，制备出低成本细胞回收率高的淋巴细胞分离液配方。用 泛影酸钠替代泛影葡胺，虽然回收的淋巴细胞总数接近，被分离的淋巴细胞成带时间明显 延长，为改善这一缺陷，用非糖基单元的亲水性高分子聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮等，和聚 蔗糖混合，再和泛影酸钠配伍，制备成低成本的淋巴细胞分离液，我们发现通过这一改进， 细胞成带的时间显著性降低，同时还惊奇的发现，所得到的淋巴细胞质量非常好，几乎没有 血小板污染，配方优于泛影葡胺和聚蔗糖的传统配方。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实例对本发明做具体说明：
[0016] 实施例1:
[0017]传统的淋巴细胞分离液配方为含有10%泛影葡胺、6%的聚蔗糖。再用价格较低的 泛影酸钠替代价格昂贵的泛影葡胺，配置成配方为含有10%泛影酸钠、6%的聚蔗糖的低成 本的淋巴细胞分离液，其分离得到的淋巴细胞总数和和用传统的泛影葡胺配方相近，但细 胞分离过程中细胞形成条带的时间（成带时间）明显延长，见表1。
[0018] 实施例2:
[0019]本发明将配方做改进，泛影酸钠10%的浓度保持不变，用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)替 代部分聚蔗糖配置成新的淋巴细胞分离液，聚蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮的总浓度为6%，进行 淋巴细胞分离。
[0020] 分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，5.2%的聚蔗糖，0.8%的聚乙烯吡咯烷酮， 余量为无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液1。用于淋巴细胞的分离，分离效果见 表2。
[0021] 实施例3:
[0022]分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，5%的聚蔗糖，1.0%的聚乙烯吡咯烷酮，余 量为无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液2。用于淋巴细胞的分离，分离效果见表 2〇
[0023] 实施例4:
[0024]分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，4.8%的聚蔗糖，1.2%的聚乙烯吡咯烷酮， 余量为无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液3。用于淋巴细胞的分离，分离效果见 表2。
[0025] 实施例5:
[0026]分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，4.6%的聚蔗糖，1.4%的聚乙烯吡咯烷酮， 余量为无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液4。用于淋巴细胞的分离，分离效果见 表2。
[0027] 实施例6:
[0028] 分离液的再改进配方为10 %泛影酸钠，4.4 %的聚蔗糖，1.6 %的聚乙烯吡咯烷酮， 余量为无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液5。用于淋巴细胞的分离，分离效果见 表2。
[0029] 实施例7:
[0030] 分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，4.8%的聚蔗糖，1.2%的聚乙烯醇，余量为 无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液6。用于淋巴细胞的分离，分离效果见表2。
[0031] 实施例8:
[0032] 分离液的再改进配方为10%泛影酸钠，4.8%的聚蔗糖，1.2%的聚丙烯醇，余量为 无热源的去离子水，总量为100%，制得分离液7。用于淋巴细胞的分离，分离效果见表2。
[0033] 表 1
[0034]
[0035]注:分离淋巴细胞的离心力为:600g
[0036] 表2
[0037]
[0038]注:分离淋巴细胞的离心力为:600g
[0039]从上述实例的实验可以看出，在保持泛影酸钠浓度为10%的条件下，聚蔗糖和聚 乙烯吡咯的总浓度保持在6%的条件下，随着聚乙烯吡咯烷酮浓度的增加，细胞成带时间逐 步缩短，但我们意外的发现，随着聚乙烯吡咯烷酮的增加，分离得到的淋巴细胞质量得到改 善，血小板的数量逐渐加少，得到的细胞质量明显改善。
[0040] 非糖基单元的亲水性高分子聚合物，聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇三者的 化学结构和作用效果相似，显著性缩短上述低成本配方分离淋巴细胞时的细胞成带时间， 同时获得的淋巴细胞质量显著性改善，几乎没有血小板的污染，获得高质量的淋巴细胞。
[0041] 可以看出，本发明提供和制备出来的动物淋巴细胞分离液，与普通动物淋巴细胞 分离液相比，具有以下优点：1)本发明的动物淋巴细胞分离液所用的主要原料之一为泛影 酸钠，替代价格昂贵的泛影葡胺，再聚蔗糖混合配伍，制备成低成本高效率的动物淋巴细胞 分离液，分离效果和泛影葡胺配方一致，但生产成本显著性降低。2)本发明在获得低成本高 效率淋巴细胞分离液配方前提下，再对配方进行改进，添加聚乙烯吡咯烷酮，显著性缩短上 述低成本配方分离淋巴细胞时的细胞成带时间，同时获得的淋巴细胞质量显著性改善，几 乎没有血小板的污染，获得高质量的淋巴细胞。
[0042] 本发明提供的动物淋巴细胞分离液，成本低，分离淋巴细胞时的细胞成带时间短， 分离效果好，几乎没有血小板污染，细胞纯度高。
[0043]以上已以较佳实施例公开了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采用等同替换 或者等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种动物淋巴细胞分离液，包括以下组分及质量百分比：10%泛影酸钠，5.2-4.4%的 聚蔗糖，0.8-1.6%的非糖基单元的亲水性高分子聚合物，聚蔗糖与非糖基单元的亲水性高 分子聚合物的浓度之和为6%，余量为无热源的去离子水，总量为100%;所述动物淋巴细胞分 离液在20°C下比重为1.077 ±0.001g/ml。2. 根据权利要求1所述的动物淋巴细胞分离液，其特征在于:所述非糖基单元的亲水性 高分子聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇。3. 根据权利要求1所述的动物淋巴细胞分离液，包括以下组分及质量百分比：10%泛影 酸钠，5.2-4.4%的聚蔗糖，0.8-1.6%的聚乙烯吡咯烷酮，聚蔗糖合和聚乙烯吡咯烷酮的浓度 之和为6%，余量为无热源的去离子水，总量为100%;所述动物淋巴细胞分离液在20°C下比重 为 1.077±0.001g/ml。4. 根据权利要求3所述的动物淋巴细胞分离液，制备方法包括以下步骤： 1) 泛影酸钠料液，配置方法为:称取无热源的泛影酸钠溶于无热源的去离子水中，用氢 氧化钠溶液调整pH至6.5-7.5，制成质量分数为20%的泛影酸钠料液； 2) 聚蔗糖料液，配置方法为:称取无热源的聚蔗糖加热溶解于无热源的去离子水中，以 无热源的去离子水定容，制成聚鹿糖料液； 3) 聚乙烯吡咯烷酮料液，配置方法为：称取无热源的聚乙烯吡咯烷酮加热溶解于无热 源的去离子水中，以无热源的去离子水定容，制成聚乙烯吡咯烷酮料液； 4) 按照配方比例，将聚乙烯吡咯烷酮料液加入等体积聚蔗糖料液中，混合均匀，再和泛 影酸钠料液等体积混合均匀，降温至20°C;比重控制在1.077±0.001g/ml，除菌过滤，即得。
【专利摘要】本发明公开了一种动物淋巴细胞分离液，包括以下组分及质量百分比：10%泛影酸钠，5.2-4.4%的聚蔗糖，0.8-1.6%的非糖基单元的亲水性高分子聚合物，聚蔗糖与非糖基单元的亲水性高分子聚合物的浓度之和为6%，余量为无热源的去离子水，总量为100%；所述动物淋巴细胞分离液在20℃下比重为1.077±0.001g/ml。使用泛影酸钠，替代价格昂贵的泛影葡胺，再和聚蔗糖混合配伍，制备成低成本高效率的动物淋巴细胞分离液，分离效果和泛影葡胺配方一致，生产成本显著性降低；通过添加非糖基单元的亲水性高分子聚合物物质，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇，显著性缩短上述低成本配方分离淋巴细胞时的细胞成带时间，同时获得的淋巴细胞质量显著性改善，几乎没有血小板的污染。
【IPC分类】C12N5/0781, C12N5/0783
【公开号】CN105524881
【申请号】CN201610038667
【发明人】郁庆明, 靖志安, 田莉, 姜强, 徐炜华, 徐念沁
【申请人】南京三生生物技术有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月20日