从细杆菌属hy-17菌株生产的新的耐碱性糖苷水解酶第10家族木聚糖酶的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本发明设及一种从细杆菌属(Micobacterium sp. )ΗΥ-17菌株分离的属于糖巧水 解酶第10家族(glycoside hy化olase family 10，GH10)的新的具有耐碱性质的木聚糖酶。
【背景技术】
[0002] 为了把多样的碳源用作原料而进行着大量研究。运种原料中包含的淀粉系 (Starch)多糖(polysaccharides)容易加水分解，主要在食品产业利用。因此，为了在多样 的产业群中把碳源用作原料，非淀粉系多糖(Non starch polysaccharides)的必要性正在 抬头。
[0003] 木聚糖(Xylan)作为非淀粉系多糖，存在于木质、植物W及谷物副产物中。非淀粉 系多糖可W分为纤维素 Cellulose)和半纤维素化emicellulose)，半纤维素的重要成分为 木聚糖(xylan)。木聚糖酶是把运种木聚糖(xylan)加水分解成木糖、木二糖等的酶。
[0004] 木聚糖酶在食品产业中能够用于改善高粘度多糖体（high viscous polysaccharide)的物性和色度，并且在低聚木糖制造工序中使用。另外，使饲料的加水分 解效率增大，通过改善动物的肠内流动性与增大消化效率，能够把多样的谷物或谷物副产 物用作饲料原料。
[000引最近，在工业用酶相关部分，W绿色技术为基础，正在逐渐从化学(chemical)使用 环境向生物学(biological)使用环境变化。工业用木聚糖酶在从木浆(pulp)中去除了半纤 维素的木质素-多糖复合体（lignin polysaccharide complex)的漂白（bleaching)工序中 使用。就木浆的漂白工序而言，为有效去除木质素，传统上利用有机溶剂，但运种工序对环 境有害。另外，在生物能源产业中，从利用甘薦或玉米的第一代生物能源，到利用诸如非木 质或木质的难分解性半纤维素的第二代生物能源，必不可少的木聚糖酶的利用价值正在增 大。因此，可W利用木聚糖酶，开发有效的环保工序。
[0006] 木聚糖(xylan)作为植物系生物量的主要成分，可W利用木聚糖酶(xylanase)将 其加水分解。对We-l ,4-木糖结构结合的木聚糖进行加水分解的糖巧水解酶(glycoside hy化olase family,GH family)已知有5、8、10、ll、30W及43共6种化ttp://www.cazy.org, Luo等人，2010)。其中，木聚糖酶的代表性家族为糖巧水解酶(GH family)第10和11家族。
[0007] 与碳水化合物聚合物（carbohy化ate polymer)的解聚（depolymerization)相关 的β-1，4-木聚糖酶W-l，4-xylanase)，为了根据各个产业性利用价值而利用，生物化学特 性极为重要。特别是酶的使用量根据工序中的抑而增减，因而在多样的抑区域需要稳定的 酶。
[0008]因此，本发明人确认了细杆菌属(Micobacterium sp.化Y-17菌株来源的属于糖巧 水解酶-lO(GH-lOdomain)的耐碱性的新内切-β-1,4-木聚糖酶(endo-β-1,4-巧lanase)，分 析了其基因序列和氨基酸序列。另外，分析了关于所述木聚糖酶基质的特性及溫度和关于 抑的特性，确认了在工业上有用，从而完成了本发明。
【发明内容】
[0009](要解决的技术问题）
[0010]本发明的目的是提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属(Micobacterium sp. )HY-17 菌株化 CTC 12338BP)。
[0011] 本发明的又一目的是提供一种从所述菌株生产的具有记载为序列号7的氨基酸序 列的木聚糖酶（xylanase)。
[0012] 本发明的又一目的是提供一种木聚糖酶生产方法，包括：
[0013] 步骤i)，把包含了具有记载为对所述木聚糖酶进行编码的序列号8的碱基序列的 多核巧酸的重组表达载体导入宿主细胞，培养转化株后，进行离屯、分离而收得粗酶液;及
[0014] 步骤ii)，在所述步骤i)收得的粗酶液中，对木聚糖酶进行精制。
[0015] 本发明的又一目的是提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的饲料添加剂。
[0016] 本发明的又一目的是提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的食品添加剂。
[0017] 本发明的又一目的是提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的造纸工序用组合物。
[0018] 本发明的又一目的是提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属HY-17菌株（KCTC 12338BP)的用途。
[0019] 本发明的又一目的是提供一种从细杆菌属HY-17菌株化CTC 12338BP)生产的具有 记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖酶(xylanase)的用途。
[0020] 本发明的又一目的是提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖 酶用作饲料添加剂的有效成分的用途。
[0021] 本发明的又一目的是提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖 酶用作食品添加剂的有效成分的用途。
[0022] 本发明的又一目的是提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖 酶用作造纸工序用组合物的用途。
[0023] (解决问题的手段）
[0024] 为了解决所述课题，本发明提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属(Micobacterium sp.)HY-17 菌株化 CTC 12338BP)。
[0025] 另外，本发明提供一种从所述菌株生产的具有记载为序列号7的氨基酸序列的木 聚糖酶（xylanase)。
[0026] 优选所述木聚糖酶具有记载为序列号8的碱基序列，但不限定于此。
[0027 ]另外，本发明提供一种木聚糖酶生产方法，包括：
[0028] 步骤i)，把包含了具有记载为对所述木聚糖酶进行编码的序列号8的碱基序列的 多核巧酸的重组表达载体导入宿主细胞，培养转化株后，进行离屯、分离而收得粗酶液;及
[0029] 步骤ii)，在所述步骤i)收得的粗酶液中，对木聚糖酶进行精制。
[0030] 另外，本发明提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的饲料添加剂。
[0031] 另外，本发明提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的食品添加剂。
[0032] 另外，本发明提供一种包含木聚糖酶作为有效成分的造纸工序用组合物。
[0033] 另外，本发明提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属HY-17菌株化CTC 12338BP)的用 途。
[0034] 另外，本发明提供一种从细杆菌属HY-17菌株化CTC 12338BP)生产的具有记载为 序列号7的氨基酸序列的木聚糖酶(xylanase)的用途。
[0035] 另外，本发明提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖酶用作 饲料添加剂的有效成分的用途。
[0036] 另外，本发明提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖酶用作 食品添加剂的有效成分的用途。
[0037] 另外，本发明提供一种用于把具有记载为序列号7的氨基酸序列的木聚糖酶用作 造纸工序用组合物的用途。
[0038] (发明的效果）
[0039] 本发明作为与从细杆菌属(Micobacterium sp.)HY-17菌株分离的属于糖巧水解 酶第10家族(glycoside hy化olase family 10,GH10)的酶具有同源性的新的木聚糖酶，具 体而言，所述木聚糖酶是在碱性环境下具有稳定性、对多样的木聚糖有效进行加水分解、对 0葡聚糖进行加水分解、对纤维二糖进行分解的新的酶。因此，本发明的木聚糖酶可W用作 食品产业用酶、饲料用酶、生物量预处理酶、木浆工序用等在多样的产业群中有用的酶。
【附图说明】
[0040] 图1是显示本发明中分离的新木聚糖酶(XylH)的基因序列的图。
[0041] 图2是显示本发明中分离的新木聚糖酶(XylH)的氨基酸序列的图。
[0042] 图3是为了调查本发明的木聚糖酶（XylH)的最佳反应条件而W枠木木聚糖 (birchwood巧Ian)为基质，显示对反应抑与溫度的影响的图。
【具体实施方式】
[0043] 下面详细说明本发明。
[0044] 本发明提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属（Micobacterium sp . )HY-17 (Micobacterium sp.HY-17)菌株化CTC 12338BP)。
[0045] 另外，本发明提供一种从所述菌株生产的具有记载为序列号7的氨基酸序列的木 聚糖酶（xylanase)。
[0046] 另外，本发明提供一种生产木聚糖酶的细杆菌属HY-17菌株化CTC 12338BP)的用 途。
[0047] 另外，本发明提供一种从细