甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法

文档序号:9779441阅读:1525来源:国知局
甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及天然产物提取技术领域,特别是涉及一种甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法。
【背景技术】
[0002]甜叶菊别名甜菊、糖草,属菊科,含有14种微量元素、32种营养成分,在体内不代谢、不蓄积、不致癌、无毒性,其安全性已经得到国际FAO和WHO以及美国FAD等组织的认可,因此它既是极好的糖源,又是良好的营养来源。
[0003]甜菊糖苷是甜叶菊中的有效成分,属于天然低热量的高倍甜味剂。它含有多种不同成分的四环二萜单体,这些单体都有相同的苷元一甜菊醇(Stev1l),可根据C13和C19位链接不同的苷元分为甜菊苷(Stev1side)、莱鲍迪苷A(Rebaud1side A)、B(Rebaud1sideB)、C(Rebaud1side C)、D(Rebaud1side D)、E(Rebaud1side E)、杜尔可苷(DulcosideA)、斯替维伯苷(Stev1lb1side)和悬钩子苷(Rubusoside)。在这些单体中,含量最高的为St(Stev1side)、RA(Rebaud1side A)和Rc(Rebaud1side C),分别占叶片干重的5%?9.5%、2%?4.5%和1%?2%,甜度分别为蔗糖的300、450和120倍。由于甜菊糖苷具有上述高甜度、低热量的特性,长期食用不会使人发胖,因此,目前甜菊糖苷已作为一种甜味剂替代蔗糖,它是继蔗糖甜菜糖之外,第三种具有开发价值和健康推崇的天然替代品。我过卫生部自1985年和1990年分别批准甜菊糖苷为不限量使用的天然甜味剂和医药用甜味剂辅料。因此,甜菊糖苷有着广泛的应用范围和宽阔的市场前景。
[0004]然而,传统的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法为将甜叶菊干叶通过浸提、过滤、超滤,然后加硫酸亚铁、石灰乳得上清液,反复通过树脂,最终干燥得甜菊糖苷。步骤较多,整体工艺繁琐,不利于应用。

【发明内容】

[0005]基于此,有必要针对传统的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法中整体工艺繁琐的问题,提供一种工艺简单的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法。
[0006]—种甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法,包括如下步骤:
[0007]将甜叶菊干叶浸提后保留浸提液;
[0008]将所述浸提液上样至已装填有GenerikRP填料的分离柱,用以分离所述浸提液中的目标组分和杂质组分,上样之后的所述Generik RP填料中保留有所述目标组分,随后分别采用预处理洗脱液和目标洗脱液对所述目标组分进行梯度洗脱,分别得到预处理流出液和目标流出液,并保留目标流出液,所述预处理洗脱液为有机溶剂与水的混合液,所述目标洗脱液为有机溶剂与水的混合液或者有机溶剂;以及
[0009]对所述目标流出液进行浓缩干燥,得到甜菊糖苷。
[0010]与传统的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法相比,上述甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法中,只需将浸提液上样至分离柱,然后进行洗脱并保留目标流出液,之后进行浓缩干燥即可得到甜菊糖苷。无需添加硫酸亚铁、石灰乳等,也不需反复通过树脂,因此,步骤较少,整体工艺较简单,有利于应用。
[0011]在其中一个实施例中,所述分离柱为固相萃取柱、快速色谱柱或液相色谱柱。
[0012]在其中一个实施例中,所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮或乙腈。
[0013]在其中一个实施例中,所述预处理洗脱液中,所述有机溶剂与水的体积比为O:1?3:7;
[0014]所述目标洗脱液中,所述有机溶剂与水的体积比为3:7?1:0。
[0015]在其中一个实施例中,所述预处理洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为1:4;
[0016]所述目标洗脱液包括第一目标洗脱液和第二目标洗脱液,所述第一目标洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为2:3,所述第二目标洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为1:1。
[0017]在其中一个实施例中,将所述浸提液上样至已装填有GenerikRP填料的分离柱的操作中,所述浸提液中的溶质与所述Generik RP填料的质量比为1:100?1:10,所述溶质由RA和St组成。
【附图说明】
[0018]图1为一实施方式的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法的流程图;
[0019]图2为实施例1中浸提液的高效液相色谱图;
[0020]图3为实施例1中收集的流出液的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0021]为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合附图对本发明的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
[0022]除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0023]如图1所示的一实施方式的甜叶菊中甜菊糖苷的提取方法,包括如下步骤:
[0024]S10:将甜叶菊干叶浸提后保留浸提液。
[0025]将甜叶菊干叶浸提后保留浸提液的操作为:将甜叶菊干叶与水混合进行浸提,维持浸提温度为80°C?90°C,浸提时间为20min?60min,之后进行固液分离,得到固体和液体,将固体与水混合,并重复至少两次上述浸提操作,保留每次浸提之后的液体,得到浸提液。
[0026]其中,甜叶菊干叶与水的质量比为1:10?1:12。固体与水的质量比为1:10?1:12。选择上述质量比能够将甜叶菊干叶中的有用成分浸提出来。
[0027]浸提液为甜菊糖苷粗品的提取液。
[0028]S20:将步骤SlO的浸提液上样至已装填有Generik RP填料的分离柱,用以分离浸提液中的目标组分和杂质组分,上样之后的Generik RP填料中保留有目标组分,随后分别采用预处理洗脱液和目标洗脱液对目标组分进行梯度洗脱,分别得到预处理流出液和目标流出液,并保留目标流出液,预处理洗脱液与目标洗脱液均为有机溶剂与水的混合液,且预处理洗脱液中有机溶剂与水的比例小于目标洗脱液中有机溶剂与水的比例。
[0029]分离柱为固相萃取柱、快速色谱柱或液相色谱柱。其中,固相萃取柱(英文SolidPhase Extract1n Column,简称 SPE column,或 Sol id Phase extract1n Cartridges,简称SPE cartridges)是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。快速色谱柱又称为Flash柱,一般指可加压快速冲洗的S12柱子。液相色谱柱的发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
[0030]Generik RP填料为改性键合硅胶填料,其键合官能团为C4?C18烷基。Generik RP填料的粒径为I Ομπι?200μηι。
[0031]有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮或乙腈。
[0032]预处理洗脱液中,有机溶剂与水的体积比为0:1?3:7。
[0033]目标洗脱液中,有机溶剂与水的体积比为3:7?1:0。当有机溶剂与水的体积比为1: O时,目标洗脱液为纯有机溶剂。
[0034]在一个优选的实施例中,预处理洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为1:4。目标洗脱液包括第一目标洗脱液和第二目标洗脱液,第一目标洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为2:3,第二目标洗脱液中的有机溶剂与水的体积比为1:1。
[0035]将浸提液上样至已装填有GenerikRP填料的分离柱的操作中,浸提液中的溶质与Generik RP填料的质量比为1:100?1:10,溶质由RA和St组成。
[0036]S30:对步骤S20中的目标流出液进行浓缩干燥,得到甜菊糖苷。
[0037]由于甜菊糖昔中含量最高的为St
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