一株嗜氢菌及其在小麦白粉病防治中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及微生物及其微生物应用领域。具体设及一株对小麦白粉病菌有括抗作 用的嗜氨菌，发酵液中含有抗菌活性物质，可用于小麦白粉病的防治。
【背景技术】
[0002] 小麦白粉病菌引起的小麦白粉病严重影响世界各个小麦产区中小麦的质量与产 量。在小麦生长的整个生育期内均可染病，小麦白粉病菌为专性活体寄生真菌，主要感染于 小麦叶銷、茎与穗中。20世纪70年代W来，随着各产区小麦品种的快速交流、耕作制度的不 断改善与趋同，使得小麦白粉病分布越来越广泛、越来越严重，对小麦的减产严重时可达 10%~30%，小麦白粉病成为小麦主要病害之一。在我国已有20多个省市发生小麦白粉病 且病情逐年加重，在中国西南各省、河南、山东、湖北、江苏和安徽等小麦产区发病较为严 重，而西北与东北麦区也日益严重。
[0003] 在对小麦白粉病的防治过程中，我国主要采用单一的Ξ挫酬类化学药剂，运对专 性活体寄生的小麦白粉病菌有严重地后果，在长期的使用运类化学药剂的过程中，由于病 菌变异速度较快、抗病品种相对缺乏，使得容易产生对其的严重抗药性，且抗药性逐年递 增;在长期、大面积地使用化学药剂的同时也严重破坏±壤±质、间接影响周围物种的正常 生长;加之长久使用化学药剂易导致多种的食品安全问题，近年来人们对食品安全空前重 视，人们对长期使用化学药剂的小麦食品感到担忧。因此研究一种安全可靠的生防菌种是 非常急需也非常重要的。
[0004] 微生物防治是利用有利可靠的微生物，通过生物间的竞争、抗生、寄生、溶菌及诱 导抗性等影响某些病原菌的活动甚至存活。微生物防治具有大量优点，由于自然界中微生 物含量极其巨大使得微生防治具有最为得天独厚的优势，且相比化学药剂微生物防治对环 境产生的破坏相对小很多，利于和谐发展。当今世界对微生物防治的热口研究更加刺激使 其成本得到大幅降低，科学技术的发展使得微生物防治变得更加普遍、高效。
[0005] ±壤中具有非常丰富的微生物资源，有资料显示，每一克±壤中就包含l〇w个微生 物个体，而其中有大量可供开发利用的有益菌种。在小麦白粉病的生物防治过程中，利用植 株上附生的细菌或±壤中的括抗细菌进行控制小麦白粉病的发病为常用手段，而从±壤中 筛选生防细菌为最具有发展潜力的的防治方法之一。
【发明内容】
[0006] 本发明目的在于提供一株从±壤中分离得到的对小麦白粉病菌具有括抗作用的 嗜氨菌化y化ogenophaga sp. )BB-E，该菌株能括抗小麦白粉病菌。
[0007] 本发明的技术方案为：嗜氨菌化ydrogenophaga sp.)BB-E，保藏编号为CGMCC ^.9374。2014年6月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、(〔61〇：)进行 保藏。
[000引一种微生物制剂，活性成分为嗜氨菌BB-E或嗜氨菌BB-E的代谢产物。
[0009] 嗜氨菌BB-E或上述微生物制剂在小麦白粉病防治中的应用。
[0010] 本发明嗜氨菌BB-E能产生蛋白酶、几下质酶，纤维素酶和生物表面活性素，可W为 生防菌剂的开发奠定基础。
[0011] 本发明菌株BB-B能括抗小麦白粉病菌，通过检测分析发现其能产生蛋白酶、几下 质酶，纤维素酶和生物表面活性素。小麦离体叶段防效实验表明，50.0%浓度发酵液处理 后，小麦白粉病的病情指数为23.4 %，与对照组的病情指数95.1 %相比，防病效果达 75.4%。有较好的防治效果，能增强小麦的白粉病抗性。
[0012]保藏信息
[0013] 嗜氨菌(Hy化ogenophaga sp. )BB-E，已于2014年6月23日在中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中屯、(CGMCC)进行保藏，保藏编号为CGMCC NO.9374。地址:北京市朝 阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。
【附图说明】
[0014] 图1括抗细菌BB-E对小麦白粉病菌的抱子萌发抑制效果，A为对照组，B为BB-E发酵 液处理组；
[0015] 图2扩增出的括抗细菌BB-E的16S rDNA片段，M:DNA Marker,箭头指示目的条带；
[0016] 图3括抗细菌BB-E的系统进化树；
[0017]图4嗜氨菌BB-E蛋白酶检测结果；
[0018] 图5几下质酶检测结果；
[0019] 图6标准葡萄糖标准曲线。
【具体实施方式】
[0020] 实施例1嗜氨菌BB-E的筛选
[0021] 采用五点取样法在郑州西郊小麦种植区中取适量±样，装入无菌聚乙締塑料袋， 封口。采用稀释平板分离法分离纯化菌株，将细菌发酵液与融化状态的3%琼脂糖混合（1: 1)未凝固前滴加于凹型载玻片上，制备成发酵液混合培养基，W未加发酵液的1.5%琼脂培 养基作对照，取新鲜小麦白粉病菌抱子抖落于培养基中，培养4她，镜检、统计小麦白粉病菌 抱子萌发率，计算抱子萌发抑制率。
[0022] 实施例2嗜氨菌BB-E的形态分析和生理生化鉴定
[0023] 显微镜观察发现，细菌BB-E菌落分布均匀，隆起低，边缘光滑，淡黄色，质地光滑， 湿润，半透明。
[0024] 对菌株进行生理生化鉴定，结果见表1。
[0025] 表1括抗细菌BB-E的生理生化鉴定结果
[0026]
[0027] 注：V'表示阳性；表示阴性。
[0028] 根据细菌的生理生化鉴定结果，结合《伯杰细菌鉴定手册》，其中关于隧氨菌特征 的描述与细菌BB-E比较符合，初步鉴定BB-E为隧氨菌。
[00巧]实施例3嗜氨菌BB-E的16rDNA序列鉴定
[0030] 提取基因组DNA，采用16S rDNA序列通用引物进PCR扩增，用1.0%浓度的琼脂糖凝 胶电泳检测发现一个长度约1500bp长度的扩增片段即为括抗细菌BB-E的16S rDNA序列（图 2)。
[0031] 将目的DNA片段进行回收、纯化、克隆、测序后得到1490bp大小的序列，运用生物信 息数据库NCBI中的BLAST工具对所得序列进行捜索比对，结果见图3。从BLAST比对结果中选 取高度相似、种属地位地位确定的菌株，获得其16S rDNA序列，采用DNAMAN软件构建系统进 化树(图3)。
[0032] 根据运11个菌株建立系统进化树，如图3所示，菌株间种属地位接近，在运11个菌 株中生防细菌BB-E的相似度至少高于96%，基