一种高效降低水体cod沼泽红假单胞菌的培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物技术领域，具体地，设及一种高效降低水体COD沼泽红假单胞菌 的培养基。
【背景技术】
[0002] 当前我国水产业迅猛发展，但由于长期养殖方式不当，导致池塘老化，水质恶化， 有机物严重污染，COD(化学需氧量)大幅度升高，致病微生物大量繁殖，形成大量的鱼邮病 害。因此寻求一种新型水质改良剂已是当务之急。
[0003] 沼泽红假单胞菌是广泛存在于自然界的微生物，是一类W光为能源，利用自然界 中的有机物、硫化物等为营养体，并能进行光合作用的生物。它不仅能净化水质，而且含有 丰富的营养，可作为鱼邮的巧料添加剂，同时能促进水产品的繁殖，提高解化率。沼泽红假 单胞菌的多种良好性能已引起国内外广大学者的关注。但由于沼泽红假单胞菌在培养过程 中易老化，需要不断更新发酵菌种，而从邮塘的污泥分离菌种是主要的方法。目前，分离培 养用常规的培养基平板分离法，由于存在氧压力且普通培养基不易分离到COD降解能力强 的高效沼泽红假单胞菌，往往得到的菌株对养殖池塘的有机物降解能力不强，导致沼泽红 假单胞菌在养殖池塘的使用量要加倍，增加养殖成本，成为制约沼泽红假单胞菌生产的一 个瓶颈。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型高效降低水体COD沼泽红假单胞菌 的培养基，利用特殊的微量元素促生物母液，获得高效降低水体COD(化学需氧量)的沼泽红 假单胞菌，从而达到降低养殖池塘的使用量，进而改善养殖环境，降低养殖成本的目的。
[000引本发明的上述目的是通过W下技术方案予W实现的。
[0006] -种高效降低水体COD沼泽红假单胞菌的培养基，所述培养基中添加了按如下组 分配制而成的微量元素促生物母液：Na2EDTA 500~503mg，FeS〇4.7H2〇 200~203mg， ZnS〇4.7H2〇 10~13mg，MnS〇4.4也0 2~2.3mg，出B03 50~53mg，CoCl2.2H2〇 20~23mg， NiCl2.6H2〇 7~7.3mg，CuCl2.6H2〇 0.5~0.8mg，化2M0O4.2H2O 4~4.3mg，CaCl2 200~ 203mg，水lL，pH4.4~4.7。
[0007] 该微量元素促生物母液添加 Ni和化元素，能有效激活沼泽红假单胞菌内降解有机 污染物的酶，从而提高沼泽红假单胞菌的降低水体COD的能力。
[000引优选地，所述培养基为富集培养基，所述富集培养基的配方为:N也S04 1~1.5g， MgCh 0.2~0.5g，Na肥O35~5.3g，K2HP04 0.5~0.8g，化Cl 2~2.3g，酵母膏0.8~l.lg，微 量元素促生物母液40~43ml，水lL，pH 7.1~7.3。
[0009]优选地，所述培养基为分离培养基，所述分离培养基的配方为:N也S〇4 1~1.3g， MgCh 0.2~0.5g，乙酸钢 3~3.3g，化肥O32.8~3g，K2HP〇4 0.5~0.8g，化Cl 1.9~2.2g， 酵母膏0.4~0.7g，微量元素促生物母液19~22ml，琼脂19~22g，水lL，pH7.1~7.3。
[0010] -种利用上述培养基分离沼泽红假单胞菌的方法，包括如下步骤： 51. 富集培养:将邮塘黑色底泥或/和邮塘水与所述富集培养基混合，于27~30°C、40W 白识灯光照培养，培养物与光源距离15~18cm，^天后观察到光照的一侧呈现微红培养物， 吸取该微红培养物与新鲜的富集培养基混合，培养70~7化； 52. 分离培养:将所述的分离培养基制成平板，干燥条件下在平板底部添加焦性没食 子酸和碳酸钢，排空充氮气，取S1得到的呈栋红色的菌液于所述平板上穿刺培养，27~30°C、 40W白识灯光照培养96~lOOh，培养物与光源距离15~18cm，得到菌落呈圆形，栋红色，直径为 ^4mm，作为纯菌种。
[0011] 与现有技术相比，本发明有益效果在于:本发明提供了一种沼泽红假单胞菌的培 养基，利用特殊的微量元素促生物母液，获得高效降低水体COD(化学需氧量)的沼泽红假单 胞菌，从而达到降低养殖池塘的使用量，进而改善养殖环境，降低养殖成本的目的。经本发 明培养基分离的菌种作用，水体COD的降低率可达到70.41%。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但实施例并不对本发明做任何 形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法 和设备。
[0013] 实施例1 富集培养基：NH4SO4 lg，MgCl2 0.2g，化HC〇3 5g，K2HP〇4 0.5g，化C1 2g，酵母膏 0.8邑， 微量元素促生物母液40ml，水1升，pH 7.1。
[0014] 分离培养基：NH4SO4 lg，MgCl2 0.2g，乙酸钢 3g，化肥〇3 2.8g，K2HP〇4 0.5g，NaCl 1.9g，酵母膏0.4g，微量元素促生物母液19ml，水1升，pH 7.1;分离培养基的配方中加 入19克琼脂。
[0015] 其中，微量元素促生物母液:化2邸TA 500mg，FeS〇4.7出0 200mg，ZnS〇4.7出0 lOmg， MnS〇4.4出0 2mg，H3B〇3 50mg，CoCl2.2出0 20mg，NiCl2.6出0 7mg，CuCl2.6出0 0.5mg， Na2Mo04.2出0 4mg，CaCl2 200mg，将所有成份溶解在1000ml水中，pH4.4，过滤除菌。
[0016] 利用上述培养基分离沼泽红假单胞菌： S1.沼泽红假单胞菌的富集培养:将邮塘黑色底泥20g和邮塘水30ml放入50ml的磨口玻 璃瓶中，黑色底泥放底层，加入富集培养基，于27°C，40W白识灯，培养物与灯距15CM光照培 养，在Ξ天内可见到液体培养基里和渺泥曝光的一侧呈现微红生长物，吸取1 ml微红培养 物接种于第二瓶富集培养基中，培养70h。
[0017] S2.沼泽红假单胞菌的分离培养:用平板倾注法厌氧分离;将所述的分离培养基制 成平板放入干燥器中，在平板底部添加焦性没食子酸和碳酸钢混合物250克，用真空累排除 空气，再充入氮气，取S1得到的呈栋红色的菌液于所述平板上穿刺培养，27°C、40W白识灯光 照培养96h，培养物与光源距离15cm，得到菌落呈圆形，栋红色，直径约为1mm，作为纯菌种。 [001引 实施例2 富集培养基:NH4SO4 l.lg，MgCl2 0.3g，Na肥03 5.1g，K2HP04 0.6g，化C1 2.1g，酵母膏 0.9g，微量元素促生物母液41ml，水1升，pH 7.2。
[0019]分离培养基：NH4SO4 l.lg，MgCl2 0.3g，乙酸钢 3.1g，化肥〇3 2.9g，K2HPO4 0.6g， 化Cl 2.Og，酵母膏0.5g，微量元素促生物母液20ml，水1升，pH 7.23;分离培养基的配 方中加入20克琼脂。
[0020] 其中，微量元素促生物母液:化2邸TA 501mg，FeS〇4.7出0 201mg，ZnS〇4.7出0 llmg， MnS〇4.4此0 2.1mg，曲B03 51mg，CoCl2.2出0 21mg，NiCl2.6出0 7.13mg，CuCl2.6出0 0.68mg， 船2]?〇04.2出0 4.13111邑，〔曰(：12 201111邑，将所有成份溶解在10001111水中，口!14.5，过滤除菌。
[0021 ]利用上述培养基分离沼泽红假单胞菌： S1.沼泽红假单胞菌的富集培养:将邮塘黑色底泥21g和邮塘水31ml放入50ml的磨口玻 璃瓶中，黑色底泥放底层，加入富集培养基，于28°C，40W白识灯，培养物与灯距16 cm光照培 养，在Ξ天内可见到液体培养基里和渺泥曝光的一侧呈现微红生长物，吸取1.1 ml微红培 养物接种于第二瓶富集培养基中，培养7化。
[0022] S2.沼泽红假单胞菌的分离培养:用平板倾注法厌氧分离;将所述的分离培养基制 成平板放入干燥器中，在平板底部添加焦性没食子酸和碳酸钢混合物251.3克，用真空累排 除空气，再充入氮气，取S1得到的呈栋红色的菌液于所述平板上穿刺培养，28°C、40W白识灯 光照培养97h，培养物与光源距离16cm，得到菌落呈圆形，栋红色，直径约为2mm，作为纯菌 种。
[0023] 实施例3 富集培养基:畑45〇4 1.45邑，]\%(：12〇.35邑，化肥〇 3 5.25邑，1(2册〇4〇.7邑，船(：12.2邑，酵 母膏l.Og，微量元素促生物母液42ml，水1升，pH 7.21。
[0024] 分离培养基：NH4SO4 1.2g，MgCl2 0.4g，乙酸钢 3.2g，化HC03 2.9g，K2HP〇4 0.7g， 化Cl 2.Ig，酵母膏0.6g，微量元素促生物母液21ml，水1升，pH 7.25;分离培养基的配 方中加入21