一种羊毛甾烷型三萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从商陆的干燥根中分离得到的一种具有治疗 急性T淋巴细胞白血病作用的羊毛留烷型三萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 商陆为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americana L.的干燥根。秋季至次春采挖，除去须根和泥沙，切成块或片，晒干或阴干。作为 传统中药，商陆具有逐水消肿、通利二便、解毒散结的功效;主治水肿胀满、二便不通，外治 痈肿疮毒等。
[0003] 商陆中分离发现的化合物类型包括三萜皂苷类、黄酮类、酚酸类、留醇类以及多糖 类等，其中对三萜皂苷元与三萜皂苷类成分研究得较为深入。20世纪70年代至今，已从商陆 中分离得到21个三萜皂苷元，且均为齐墩果烷型，具体分为5种母核类型：商陆酸、商陆酸 30-甲酯、美商陆皂苷元、加利果酸、商陆酸G。此外，还有42种三萜皂苷配糖体从商陆中分离 得到。商陆中所含的黄酮类成分主要为黄酮醇类和黄酮木脂素类，其中以山柰酚型黄酮醇 为主。
[0004] 现有研究发现商陆的特征性化学成分为三萜皂苷类，其显著的生理活性已成为研 究的热点。现代药理实验发现商陆有显著的利尿、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤活性;临床多 用商陆治疗乙型肝炎、银肩病、白带症、血小板减少性紫癜以及乳腺增生等临床疑难病症。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从商陆的干燥根中分离得到的一种具有治疗急性T淋巴 细胞白血病作用的羊毛留烷型三萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0008]
〇
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将商陆的干燥根粉碎，用80 ~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用80%乙醇洗脱8个柱体积， 收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中80%乙醇洗脱浸膏 用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50 :1、35:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和5: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019 ]图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 经鉴定商陆为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.的干燥根。
[0024]制备方法：（a)将商陆的干燥根(8kg)粉碎，用85 %乙醇热回流提取(25L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(359g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用 80%乙醇洗脱8个柱体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏（138g); (c)步骤(b)中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、35:1 (6个柱体积）、15:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(32g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 25:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(17g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(39mg)。
[0025] 结构确证：白色粉末;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 519 · 2714，结合核磁特征可得 分子式为C3QH4Q〇6，不饱和度为11。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 · 74， m)，H-l(2.99，m)，H-2(2.38，m)，H-2(2.59，m)，H-5(2.38，m)，H-6(2.41，m)，H-6(2.65，m)，H-12(2.74，d，J=16.2)，H-12(2.89，d，J=16.2)，H-15(5.62，m)，H-16(6.25，m)，H-17(1.90， m)，H-18(1.36，s)，H-19(1.23，s)，H-20(1.86，m)，H-21(1.09，d，J=4.2)，H-22(1.75，m)，H-22(1.89，m)，H-23(5.01，s)，H-24(7.35，m)，H-27(2.06，br，s)，H-28(1.01，s)，H-29(0.98， s)，H-30(1 · 32，s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS〇-d6，150MHz):35 ·4(CH2，1-C)，34· 3(CH2， 2-C)，215.5(C，3-C)，47.1(C，4-C)，50.5(CH，5-C)，37.7(CH2,6-C)，203.2(C，7-C)，151.4 (C，8-C)，150.3(C，9-C)，39.6(C，10-C)，202.2(C，11-C)，52.8(CH2，12-C)，46.9(C，13-C)， 54.6(C，14-C)，135.2(CH，15-C)，133.7(CH，16-C)，52.1(CH，17-C)，18.2(CH 3，18-C)，19.1 (CH3，19-C)，34.4(CH，20-C)，20.3(CH 3,21-C)，44.5(CH2,22-C)，67.3(CH，23-C)，145.2(CH， 24-C)，129.1(C，25-C)，170.8(C，26-C)，14.1(CH3,27-C)，20.3(CH 3,28-C)，27.4(CH3,29-C)，24.2(CH3，30-C);碳原子标记参见图1。IR谱表明该化合物含有羟基(3442CHT 1)和α，β-不 饱和羰基（1708CHT1)基团。此外，紫外在252nm处有最大吸收波长，也表明了该化合物含有a， β-不饱和羰基结构。1H M1R谱显示六个单峰甲基信号[δΗ0. 98(H3-29)，1.01 (H3-28)，1.23 (出-19)，1.32(!13-30)，1.36(!13-18)，2.06(!13-27)]，一个双峰甲基信号[5!11.09((1，了 = 4.2取，出-21)]，一个含氧次甲基信号[5!15.01(8，!1-23)]，三个烯属次甲基质子信号[5 !15.62(!1-15)，6.25(!1-16)，7.35(!1-24)]。 130 NMR谱显示30个共振碳信号，七个甲基，五个亚 甲基，七个次甲基(三个烯属次甲基，一个含氧次甲基），十一个季碳（四个羰基碳，三个烯烃 季碳）dHMBC谱中H2-1，H 2-2，H-5，Me-28和Me-29与C-3，Me-28和Me-29与C-3和C-4，以及H-5和 H2-6与C-4的相关性表明C-3为酮羰基，C-4连有两个甲基。13C-DEPT谱中，碳信号6〇203.2(〇 7)，151 · 4(C-8)，150 · 3 (C-9)和202 · 2 (C-l 1)表明该化合物含有一个共辄系统(C-7/C-8/C-9/011)。两个烯属次甲基质子信号[6!15.62(!1-15)和6.25(!1-16)]以及碳信号[6(：133.7((：-16)和135.2(C-15)]表明C-15和C-16之间存在双键。R0ESY谱中，没有观察到H-24与Me-27的 相关性，表明C-24和C-25之间的双键为E构型。此外，含氧碳信号[SC67.3(C-23)]以及氢质 子信号[δΗ5.01(Η-23)]表明C-23位连有一个羟基基团。HMBC谱中Me-27与C-24，C-25和C-26 的相关性表明C-26为羧基基团。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型 核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实 验值基本一致(图2)。
[0026]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0027] 一、材料和仪器
[0028]急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞由暨南大学血液病研究所惠赠;慢性粒细胞白血 病细胞K562细胞由暨南大学由生物化学与分子生物学教研室惠赠。化合物（I)为自制，HPLC 归一化纯度大于98%，用DMS0分析纯溶解配制成5.5yg/mL溶液备用。DMEM/F12培养基粉、羟 乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇蓝试剂（MTT)购于美国Gibeo公司。新生牛血清 (Newborn Calf Serum)购于中国杭州四季青公司。青霉素（Penicillin)、链霉素 (S