一株高产鼠李糖脂的铜绿假单胞菌db及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于微生物生物技术和环境生物技术领域，具体涉及一株高产鼠李糖脂的假单胞菌Pseudomonas aeruginosa.DB及其应用。
技术背景
[0002]在能源日趋紧张的情况下，提高石油采收率已成为石油开采研究的焦点，近年来三次采油技术日益得到广泛重视和现场应用，因此，三次采油驱油剂的研发也越来越引起科研工作者的关注，现在常用的驱油剂主要以化学表面活性剂，如:石油磺酸盐、烷基苯磺酸盐和石油羧酸盐等。目前，石油开采中驱油剂以化学表面活性剂为主，但由于化学表面活性剂耐温耐盐性能与油藏适应性差，产量降低，生产成本较高，环境污染，表/界面活性较差等问题，因此在一定程度上限制了其在现场应用，生物表面活性剂不但具有相容性好，无毒，能被微生物降解，而且具有较低的临界胶团浓度、较高的表界面活性，良好的乳化性能以及耐温耐盐等特性，因此具备高效、环保的特性，并且不以石油为原料，在石油开采、环境治理等领域应用越来越广泛，特别是在石油开采过程中可以直接利用微生物发酵液，省去分离纯化过程，因而可大幅度降低成本。
[0003]鼠李糖脂作为生物表面活性剂具有绿色环保和良好的表界面活性和乳化功能，在油田驱油中表现出巨大的应用潜力，但受到菌种性能和发酵工艺制约使鼠李糖脂产率低导致产品成本较高，很难实现其大规模工业化应用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一株高产鼠李糖脂的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DB及其在微生物采油中的应用。
[0005]本发明提供的高产鼠李糖脂的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DB菌株，以下简称DB，于2015年3月12日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”(北京市海淀区中关村北一条13号中国科学院微生物研究所)，其保藏编号为“CGMCCN0.10618”，分类命名中文名称为“铜绿假单胞菌”，拉丁文名称为“Pseudomonasaeruginosa”。
[0006]本发明提供的铜绿假单胞菌DBCGMMCC N0.10618菌株，是从胜利油田油水井样品中通过血平板和扩油圈方法筛选得到，并通过耐温耐盐性能考察反复筛选传代获得。
[0007]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的形态学特性:在好氧固体培养基下培养I?2天出现大小一般为1.0?5.0mm乳白色菌落，细胞形态为短杆状，大小1-5μηι X 0.5?1.Ομπι。
[0008]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的生理生化特性:好氧，生长温度30?60°C，最佳生长温度30?45°C，生长pH值范围4?9，最佳生长pH范围7.0?7.5，NaCl的耐受性O?
[0009]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的种子液培养基为:葡萄糖10.0g/L、酵母粉3.0g/L、KH2P04 1.0g/L^Na2HPO4 1.0g/L^MgS04.7H20 0.5g/L。
[0010]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的发酵培养基:糖蜜70g/L，废油脂120g/L，pH值为7.0?7.5。
[0011]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618发酵条件:接种量8 %，接种龄1h，初始pH7.5，温度40°C，搅拌速度200rpm，pH=7，体积1m3，通气量:1.5L/min。
[0012]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618在常温常压、上述营养培养基和发酵条件下产量为 55g/L ?80g/L。
[0013]铜绿假单胞菌DBCGMMCC N0.10618发酵液的性能评价参数:耐温性、耐盐性、乳化性能、表面张力、物理模拟实验提高采收率值。
[0014]铜绿假单胞菌DBCGMMCC N0.10618发酵生产的鼠李糖脂发酵液性能参数评价方法:
[0015](I)耐温性能测定
[0016]取已经配制好的不同浓度鼠李糖脂发酵液，在恒温器中加热到150°C维持两个小时后，在室温或60°C下测其表面张力。
[0017](2)耐盐性能测定
[0018]分别用不同浓度的NaCl溶液配制鼠李糖脂发酵液，配制后观察是否有浑浊和沉淀产生。
[0019](3)乳化性能测定
[0020]以石蜡做模型油相，配制不同浓度的鼠李糖脂发酵液，分别将25mL的鼠李糖脂发酵液与25mL油相加入到50mL的比色管中，然后在震荡器上充分混合3min后，在60°C下静止，记录乳化情况。
[0021](4)表面张力测定
[0022]用蒸馏水将液体样品配制成质量分数为1%的溶液，固体样品配制成质量分数为
0.3 %的溶液，按GB/T 5549的规定用挂片法测定。
[0023](5)物理模拟实验提高采收率值测定
[0024]①填装模拟岩心；
[0025]②抽真空、饱和地层水，测定岩心PV(孔隙体积)；
[0026]③饱和原油，岩心老化7天；
[0027]④一次水驱，水驱至采出水含水98%以上，计算一次水驱采收率；
[0028]⑤注入该菌发酵生产的鼠李糖脂发酵液0.2PV?0.3PV；
[0029]⑥二次水驱，水驱至含水100%以上，计算鼠李糖脂发酵液提高采收率值。
[0030]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618发酵生产的鼠李糖脂发酵液性能:耐温150°C，耐盐12 X 104mg/L，乳化指数大于90 %，表面张力最低25mN/m，物理模拟实验提高采收率值大于13%。
[0031]铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618发酵生产鼠李糖脂的发酵液现场应用工艺是直接利用发酵液与油田注入水混合注入油藏中进行驱油，具体方法为:将鼠李糖脂发酵液与油田注入水按照体积比为1:1000?2000比例混合后注入油藏，混合液注入总量为油藏孔隙体积的25%?30%，注入速度为100m3/d?150m3/d，注入方式为段塞式。
[0032]本发明与现有技术相比具有如下优点和积极效果:
[0033](I)本发明的菌种可以利用糖蜜和废油脂廉价底物发酵生产鼠李糖脂，发酵工艺简单、成本低；
[0034](2)本发明提供的铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618发酵生产的鼠李糖脂最高耐温150°(3，耐盐12 X 104mg/L，乳化指数大于90%，表面张力最低25mN/m，物理模拟实验提高采收率值大于13%，现场试验提高采收率大于8%。
【附图说明】
[0035]附图1为DB菌株的形态结构电镜图；
[0036]附图2为DB分子生物学鉴定系统发育树。
【具体实施方式】
[0037]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
[0038]实施例1
[0039]本发明提供的铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的形态特征和生理生化特征以及假单胞菌DB菌株分子生物学鉴定。
[0040]如图1所示，本发明提供的铜绿假单胞菌DB CGMMCC N0.10618的形态学特性:在好氧固体培养基下培养I?2天出现大小一般为1.0?5.0mm乳白色菌落，细胞形态为短杆状，大小1-5μπιX 0.5?1.Ομπι。铜绿假单胞菌D