一种植酸酶耐温能力的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植酸酶性能检测技术领域，特别涉及一种植酸酶耐温能力测定方法。
【背景技术】
[0002] 植酸酶是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯 水解酶。植酸酶具有特殊的空间结构，能够依次分离植酸分子中的磷，将植酸(盐)降解为肌 醇和无机磷，同时释放出与植酸(盐）结合的其它营养物质。植酸酶在饲料中的运用非常广 泛，几乎所有的饲料中均添加了植酸酶。以全年饲料总产量为1. 2亿吨计算，植酸酶的用量 至少达1. 2万吨。但是植酸酶的应用也存在一些问题： 1) 由于植酸酶在饲料中的添加量较小（每吨饲料添加100克左右），经高温制粒后植 酸酶的损失或残留无法准确衡量； 2) 绝大部分植酸酶生产厂家都宣称自己的植酸酶能耐受高温，但均不能提供有力证据 和有效方法来验证植酸酶的耐温能力。
[0003] 因此，植酸酶的耐温能力的评定成为一项非常重要的工作。
[0004] 中国专利CN101493418公开了一种添加在饲料中植酸酶的微量测定方法，可以对 饲料中的植酸酶的含量进行较为准确和微量的测定，但是其存在以下缺点：1)该方法测定 的是饲料中的植酸酶含量，但是其无法直接衡量植酸酶的耐温能力；2)检测设备要求高，检 测过程复杂，不易操作。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种植酸酶耐温能力的测定方法，可以直接对植酸酶的耐温 能力高低作出判断，且简单易操作。
[0006] 本发明采用的技术方案如下： 一种植酸酶耐温能力的测定方法，在同一饲料中，添加相同活性的不同植酸酶，在同样 的条件下进行高温制粒，然后进行发酵，测定发酵前后饲料中的无机磷含量差，无机磷含量 差的高低对应于相应植酸酶耐温能力的高低。
[0007] 优选的，所述的发酵温度为20-45°C。
[0008] 优选的，发酵的PH值为2-8。
[0009] 优选的，发酵时在饲料中加入一定量的水，饲料与水的质量比例为1 :1-1. 1。
[0010] 优选的，发酵时间为3-5h。
[0011] 具体的，测定步骤如下： 1) 在相同饲料配方中加入同样活性的不同植酸酶进行高温制粒，得到含不同植酸酶的 若干饲料样本； 2) 对每一饲料样本取样品两份X和Y ; 3) 用常规检测方法测定每一饲料样本的X样品的无机磷含量； 4) 对每一饲料样本的Y样品进行发酵，条件如下：在37°C，PH值为5. 0,含水量50%条 件下发酵3-5个小时； 5) 测定发酵后Y样品中的无机磷含量； 6) 比较每一饲料样本的样品X和Y的无机磷含量差；两个样品无机磷含量差值越大， 则该样品对应的饲料样本中相应填加的植酸酶耐温能力越好。
[0012] 当然，样品X和样品Y的取样量和取样规则都要保持一致。
[0013] 优选的，添加植酸酶时可按照10-1000克/吨全价料进行添加；所述的饲料高温制 粒的温度范围一般在60-120°C。
[0014] 本发明提供了一种简易的判定植酸酶耐温能力高低的方法。由于植酸酶的基本作 用是把饲料中的有机磷转化为无机磷，因此本发明利用这一点，将添加相同活性的植酸酶 经高温制粒后的饲料经体外发酵（模拟消化）后，测饲料发酵后的无机磷含量的方式，含量 越高说明植酸酶的耐温能力越强。
[0015] 与【背景技术】中提到的专利CN101493418相比，本申请有以下区别和优势： 1) 本质不同：本申请本质是测定经高温制粒后植酸酶对有机磷的降解能力，直接反应 出植酸酶的耐高温能力，这样可以判断出植酸酶在经高温制粒后在饲料中的残留量，起到 对植酸酶添加时选择的一个指导，从而减少高温制粒后植酸酶的损失；而对比专利只是起 到测定饲料中植酸酶的含量的作用，与本申请要解决的问题并不相同； 2) 可操作性不同：本申请对于一般的饲料企业都是非常方便操作的，而对比专利对检 测设备的要求高，制备标准溶液的过程复杂，增加了检测的成本和不便； 3) 准确性不同：本申请对植酸酶耐温能力的衡量直接、准确，而对比专利由于受饲料中 磷的影响、浓缩设备、测定结果间接反映耐温能力等因素的影响而导致结果的准确性较差。
【具体实施方式】
[0016] 以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此： 一种植酸酶耐温能力的测定方法，测定步骤如下： 1) 在相同饲料配方中加入同样活性的不同植酸酶进行高温制粒，得到含不同植酸酶的 若干饲料样本； 2) 对每一饲料样本取样品两份X和Y ; 3) 用常规检测方法测定每一饲料样本的X样品的无机磷含量； 4) 对每一饲料样本的Y样品进行发酵，条件如下：在37°C，PH值为5. 0,含水量50%条 件下发酵4个小时； 5) 测定发酵后Y样品中的无机磷含量； 6) 比较每一饲料样本的样品X和Y的无机磷含量差；两个样品无机磷含量差值越大， 则该样品对应的饲料样本中相应填加的植酸酶耐温能力越好。
[0017] 采用上述方法评定下述A. B. C. D四个植酸酶样品的耐温能力。
[0018] 其中，所采用的饲料为肉小鸭料，A.B.C.D四种植酸酶的酶活分别为5518U/ 克.5437U/克.6018U/克.5872U/克，植酸酶的添加量均为100克/吨饲料。样品X和Y 的量为100克，制粒温度为87°C。
[0019] 本发明中无机磷的测定方法无特别指定，在本实施例中采用的是先将饲料样品用 盐酸和硝酸处理，使无机磷浸提出来，再对滤液进行测定获得无机磷含量的方法。具体可参 考"饲料中无机磷和有机磷的测定方法"（钟国清，《饲料工业》03年第24卷第7期)。
[0020] 根据本发明方法，据无机磷差值进行比较，耐温能力的大小分别为： 植酸酶B组〉植酸酶D组〉植酸酶C组〉植酸酶A组。
[0021] 验证： 将A. B. C. D四种植酸酶按100克/吨饲料分别添加在实施例中相同饲料中在相同条件 下进行高温制粒，制粒后用"饲料中植酸酶的微量测定"（即专利CN101493418的方法)方法 测定其颗粒饲料中植酸酶的酶活，根据测定值判断这四种植酸酶的耐温性能与本专利的方 法相比较。
[0022] 根据酶活保留率，可判断出这四种植酸酶的耐温能力的大小为： 植酸酶B组〉植酸酶D组〉植酸酶C组〉植酸酶A组。
[0023] 结论与本发明一致，但是本发明方法简单易测，结论直接、准确。
【主权项】
1. 一种植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，在同一饲料中，添加相同活性的不 同植酸酶，在同样的条件下进行高温制粒，然后进行发酵，测定发酵前后饲料中的无机磷含 量差，无机磷含量差的高低对应于相应植酸酶耐温能力的高低。2. 如权利要求1所述的植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，所述的发酵温度为 20-45。。。3. 如权利要求2所述的植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，发酵的PH值为 2· 0_8· 0〇4. 如权利要求3所述的植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，发酵时在饲料中加 入一定量的水，饲料与水的质量比例为1 :1-1. 1。5. 如权利要求4所述的植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，发酵时间为3-5h。6. 如权利要求1-5任一所述的植酸酶耐温能力的测定方法，其特征在于，测定步骤如 下： 1) 在相同饲料配方中加入同样活性的不同植酸酶进行高温制粒，得到含不同植酸酶的 若干饲料样本； 2) 对每一饲料样本取样品两份X和Y ; 3) 用常规检测方法测定每一饲料样本的X样品的无机磷含量； 4) 对每一饲料样本的Y样品进行发酵，条件如下：在37°C，PH值为5. 0,含水量50%条 件下发酵3-5个小时； 5) 测定发酵后Y样品中的无机磷含量； 6) 比较每一饲料样本的样品X和Y的无机磷含量差；两个样品无机磷含量差值越大， 则该样品对应的饲料样本中相应填加的植酸酶耐温能力越好。
【专利摘要】本发明属于植酸酶性能检测技术领域，特别涉及一种植酸酶耐温能力测定方法。在同一饲料中，添加相同活性的不同植酸酶，在同样的条件下进行高温制粒，然后进行发酵，测定发酵前后饲料中的无机磷含量差，无机磷含量差的高低对应于相应植酸酶耐温能力的高低。本发明方法可以直接对植酸酶的耐温能力高低作出准确判断，简单易操作。
【IPC分类】C12Q1/44
【公开号】CN105567785
【申请号】CN201410523673
【发明人】颜鹏飞
【申请人】颜鹏飞
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月8日