一株不动杆菌及其在废水除氮磷中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于环境微生物技术领域，具体设及一株异养硝化-好氧反硝化并聚憐的 不动杆菌W及其在去除氮憐污水的氮憐中的应用潜力。
【背景技术】
[0002] 水环境富营养化和藻类的过度生长是引起水质恶化的主要问题之一，P和N是导致 水体富营养化的重要因子，其污染源主要为生活、工业和农业废水，因此废水深度处理的主 要目的就是去除P和N。
[0003] 传统的生物法除氮基于自养硝化-厌氧反硝化的联合，最近Ξ十年内，包括不动杆 菌（HUANG Xiaofei,et al. Bioresource Technology, 2013, 146: 44-45)、施氏假单胞 菌（Z肥NG Maosheng,et al. Bioresource Technology, 2014, 162: 80-88)、枯草芽抱杆 菌（YANG Xinping,et al. Bioresource Technology, 2011, 102: 854-862)等许多异养 硝化-好氧反硝化菌被报道，它们较自养硝化菌有更高的生长速率，可忍受更高的有机负 荷，W及可在同一反应器实现同步硝化和反硝化，为生物脱氮提供了新思路。
[0004] 强化生物憐去除(EBPR)系统已被广泛地应用于废水憐的去除，它基于一类憐积累 微生物(PAOs)。在厌氧阶段，PAOs分解细胞内多聚憐(polyp)和糖原提供能量，吸收挥发性 脂肪酸(VFA)合成细胞内PHAs(聚径链烧酸），同时释放憐;在好氧阶段，PAOs从环境吸收高 于其释放量的溶解憐形成polyP，从而去除废水憐（Mino. T.,et al.Biochemistry (Moscow) ,2000,65:341-348)。纯的PAO菌应用于废水憐去除也有报道，与邸PR比较，其在适 应期缩短等方面表现出优势（S. S. Choi, et al.Biotechnol Lett. ,2000,22:1549- 1552)。最近LI化ifeng等报道从太湖分离到一株能去除废水中^ 1.0 mg/L的低浓度憐的 聚憐细菌Pseudomonas stutzeri YG-24,对废水中低浓度憐的去除有实际应用潜力（LI Haifeng,et al.Desalination,2012,286 :242-247)。
[000引为了实现废水N和P的同步去除，Zeng R.J.等探索同步的硝化-反硝化(SND)与厌 氧-缺氧强化的生物憐去除的联合，发现憐的去除主要通过PAOs利用化作为电子受体氧化 细胞内PHAs而实现，但氧浓度的提高使SND效率降低，在相同条件下难W实现N和P同时的高 去除效率(Zeng R.J.，et al. Biotechnol. Bioeng.，2003,84(2):170-178);且其他类似 的N和P同步去除的研究报道均要通过厌氧好氧两个阶段得W实现（SatosM Tsuneda，et al. Biochemical Engineering Journal, 2006,27 :191-196)。
[0006]从实践观点看，在好氧条件下在同一反应器内实现同步的氮憐去除更加优越。最 近LI化une等报道一株异养硝化-好氧反硝化聚憐菌Pseudomonas stutzeri YG-24，W巧 樣酸为碳源且C/N为別寸，畑4+-N、N03--N和N02--N的去除速率分别为8.75、7.51和7.73 mg/L/ h;W之应用于实际废水样品，在好氧条件下，TN、N也+-N、N03^N、N02^N和P的去除率分别为 85.28%、88.13%、86.15%、70.83%和51.21%化I Qiune'et al.Bioresource Technology, 182:18-25)。
【发明内容】
[0007] 为了解决上述技术问题，本发明提供一株异养硝化-好氧反硝化聚憐菌，其特点为 该菌株为采用常规分离方法从采自浙江溫州西片污水处理厂的活性污泥中分离获得，经 leSrDNA序列测定并将测序结果通过GeenBank Blast进行比对分析，属于Acinetobacter sp.，与溶血不动杆菌（Acinetobacte;rHaemolyticus)的同源性为99.64 %，编为 Acinetobacter sp. WZUF26。
[0008] 本发明提供的一株异养硝化-好氧反硝化并聚憐的不动杆菌，该菌株为不动杆菌 (Acinetobacter sp. )WZUF26,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保 藏中屯、登记入册编号为CGMCC NO.9045。
[0009] 本发明还提供上述的不动杆菌的应用，所述不动杆菌WZUF26用于去除氮憐污水的 氮憐:将不动杆菌WZUF26接种于氮憐污水中W除去氮憐。
[0010] 所述不动杆菌WZUF26用于去除氮憐污水的氮憐的方法，包括如下步骤： 1) 保藏菌株不动杆菌WZUF26接种于活化培养基中，培养，离屯、，得菌体，菌体用无菌水 洗涂后制成〇〇68日为0.900~1.000的菌悬液； 2) 将步骤1)所得菌悬液接种于氮憐污水中培养W除氮憐； 其中，所述氮憐污水为含有NH/-N(锭态氮）、N03^(硝酸态氮）、N02^(亚硝酸态氮)和 憐的一种或其组合的污水。
[0011] 优选地，步骤1)所述活化培养基组成为：（NH4 )2S〇4 Ig，巧樣酸钢5g，K2HP化 0.5g，MgS〇4 *7此0 0.10g，CaCl2.2此0 0.10 邑，FeS〇4 0.02 g，营养液 1 血，出0 1000 mL， Imol/L NaOH水溶液和/或Imol/L肥1调抑为7.0; 所述营养液组成为：邸TA 0.35g，ZnS〇4.7此0 0.20 g，CuS〇4.5此0 0.10 g，MnS〇4.7此0 0.20 g，Co(N〇3)2.6出0 0.09 g，出B03 0.10 g，Na2Mo〇4 0.10 g，出0 1000 血； 步骤1)的培养时间为18~24h，溫度为25~30°C，在转速150~160 r/min下培养。
[0012] 优选地，步骤2)为将步骤1)所得菌悬液接种于氮憐污水中，并加入碳源，碳源中所 含的碳与氮憐污水中所含的氮的质量比为5: ^ 15:1。
[001引优选地，氮憐污水中仅含NH4+-N时，将步骤1)所得菌悬液接种于氮憐污水中，并加 入碳源，碳源中所含的碳与氮憐污水中所含的氮的质量比为10:1~15:1;氮憐污水中仅含 NCV-N或N02^-N时，将步骤1)所得菌悬液接种于氮憐污水中，并加入碳源，碳源中所含的碳 与氮憐污水中所含的氮的质量比5:1~10:1;氮憐污水中仅含氮和憐时，将步骤1)所得菌悬 液接种于氮憐污水中，并加入碳源，使得加入碳源所含的碳与氮憐污水所含的氮的质量比 为10:1~15:1。
[0014] 优选地，所述碳源为巧樣酸钢、醋酸钢、下二酸钢和酒石酸钟钢的其中一种或其任 意组合。
[0015] 优选地，所述氮憐污水中含憐时，所述碳源含有醋酸钢。
[0016] 优选地，所述氮憐污水中含氮和憐时，所述碳源含有醋酸钢，醋酸钢所含的碳与总 憐的质量比大于等于25:1。
[0017] 优选地，步骤2)中去除氮憐污水的氮憐的培养溫度为15~30°C，W化0H或肥1调抑 为6~9。
[0018]优选地，步骤2)中，将步骤1)所得菌悬液接种于氮憐污水中在转速100~200 r/min 下培养W除氮憐。
[0019 ]本发明能够达到W下技术效果： 1、本发明提供的异养硝化-好氧反硝化并聚憐的不动杆菌（Acinetobacter sp .) WZUF26为国内首次报道。
[0020] 2、本发明提供的异养硝化-好氧反硝化并聚憐的不动杆菌(Acinetobacter sp.) WZUF26去除氮憐污水的氮憐的适宜溫度为15~30°C，有比较广的溫度适应范围。
[0021 ] 3、本发明提供的异养硝化-好氧反硝化并聚憐的不动杆菌(Acinetobacter sp.) WZUF26，在适宜条件下，对人工氮憐污水的NH4+-N、N(V-N、N02^N和P的去除速率分别为8.16 111邑/化'}1)、6.02 mg/化·1ι)、10.76 mg/a'h)和0.39 mg/化'h)，具有较高的去除速率。
[0022] 4、本发明提供的异养硝化-好氧反硝化并聚憐的不动杆菌(Acinetobacter sp.) WZUF26,可在好氧条件下的同一反应器中同步去除氮憐，在实际废水的氮憐去除中具有很 大的应用潜力。
【附图说明】
[0023] 图1是不动杆菌(Acinetobacter sp. )WZUF26的革兰氏染色。
[0024] 图2是采用MEGA4.1软件，邻位连接法显示菌株WZUF26与相关种的16S rDNA序列系 统发育树，进行1000次的相似度重复计算，图中发育树节点只显示Bootstrap值大于50 %数 值。
[002引图3是不动杆菌WZUF26除人工NH4+-N污水的NH4+-N的进程。
[0026] 图4是不动杆菌WZUF26除人工NO3--N污水的NO3--N的进程。
[0027] 图5是不动杆菌WZUF26除人工N02--N污水的N02--N的进程。
[0028] 图6是不动杆菌WZUF26除人工憐污水的憐的进程。
[0029] 图7是不动杆菌WZUF26除添加巧樣酸钢和醋酸钢的厌氧处理后畜禽废水TN、NH4+- N和生长的进程。
[0030] 图8是不动杆菌WZUF26除添加巧樣酸钢和醋酸钢的厌氧处理后畜禽废水N03^N、 N02--N、TP 和 COD 进程。
[0031] 菌株保藏 本发明的不动杆菌(Acinetobacter sp. )WZUF26，已保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中屯、，保藏地址: