与慢性乙型肝炎病毒感染相关的IL-6基因rs2069852位点标志物及其应用

文档序号:9823132阅读:822来源:国知局
与慢性乙型肝炎病毒感染相关的IL-6基因rs2069852位点标志物及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及慢性乙型肝炎病毒化epatitis B virus,皿V)感染者病程进展的个体 易感性。具体地,本发明设及与皿V慢性感染者病程进展相关的易感基因 IL-6的rs2069852 位点标志物在皿V慢性感染者病情转归的预警W及遗传咨询中的应用。
【背景技术】
[0002] 2015年W册更新的数据显示,全球慢性乙型肝炎病毒化BV)感染者约2亿4000万人。 全世界更有每年超过78万的人死于乙型肝炎的各种并发症,包括肝硬化和肝癌。我国是病 毒性肝炎高发区,现有的慢性皿V感染者约9300万人,其中慢性乙型肝炎(C皿)患者约2000 万人。一般慢性乙型肝炎是渐进发展引起并发症,但是部分病人并没有经历明显的慢性乙 型肝炎的过程就突然出现肝硬化的症状和体征,有些患者甚至到了失代偿阶段才被发现。 于是,对慢性乙型肝炎肝硬化科学地预警预测和早期诊断早期干预对于控制病情发展和降 低病死率至关重要。
[0003] IL-6是由184个氨基酸组成的经典的细胞因子,它的基因位于7号染色体上。化-6 有2个受体:化-6受体(化-6R)和即130。化-6R有巧巾形式,膜型化-6R和可溶性化-6R(sIk 6R)。比-6通过膜型比-6R介导的是经典的信号通路,通过S比-6R介导的是反式信号通路。对 于健康人来说,血浆水平的化-6几乎测不至Ij。但是,在慢性炎症性疾病中,比如慢性乙型肝 炎,可W检测到异常分泌的血浆化-6水平。有研究显示,化-6水平在慢性乙型肝炎(CHB)病 人中比在健康人中显著升高,并且相比C皿病人,比-6水平在晚期肝病(肝硬化或者肝癌)病 人中表达的更显著。而该基因的多态性可能改变其表达或者结合活性,从而影响肝损伤和 疾病严重程度。因此,比-6基因多态性分析对于C皿患者病情转归的判断和预警具有重要价 值,特别是对于慢性乙型肝炎进展为肝硬化的预警更有不可替代的意义。

【发明内容】

[0004] 为了解决W上问题,本发明提供了一种与慢性乙型肝炎病情转归,尤其是与乙型 肝炎肝硬化转归相关的IL-6基因 rs2069852位点标志物及其检测试剂和检测方法。
[0005] 与慢性乙型肝炎病情转归相关的IL-6基因 rs2069852位点标志物,化-6基因的 rs2069852位点表现为AG基因型。
[0006] 与乙型肝炎向肝硬化转移相关的IL-6基因 rs2069852位点标志物,化-6基因的 rs2069852位点表现为AG基因型。
[0007] 与乙型肝炎肝硬化相关的IL-6基因 rs2069852位点标志物,比-6基因的rs2069852 位点表现为AG基因型。
[000引一种试剂,用于检测IL-6基因的rs2069852位点标志物的试剂。
[0009] 另外,本发明还提供了一种检测IL-6基因 SNP位点rs2069852标志物的化qman探针 法,包括如下步骤:
[0010] 1)于ABI公司购买用于检测IL-6基因 rs2069852位点的引物和化qman探针,并对样 本基因组DNA在Roche LC480 Π PCR仪上进行特异性PCR扩增,所述化qman探针被两种巧光染 料Vic、Fam双标记,该探针分别是针对双等位SNP的不同基因型,只有完全匹配的探针才能 扩增出各自对应的基因型;
[OOU] 2)按下列条件进行反应:起始95°C预热lOmin,然后95°C变性10s,60°C退火和延伸 30s,循环45次;产物在Roche LC480 Π 型巧光定量PCR仪上扫描读取数据,分析得出研究对 象的基因型。
[0012] 用于检测IL-6基因的rs2069852位点表现为AG基因型的试剂在制备用于皿V慢性 感染者病情转归的诊断试剂盒中的应用。
[0013] 用于检测IL-6基因的rs2069852位点表现为AG基因型的试剂在制备用于乙型肝炎 感染人群疾病向肝硬化发展诊断试剂盒中的应用。
[0014] 用于检测IL-6基因的rs2069852位点表现为AG基因型的试剂在制备用于乙型肝炎 肝硬化的诊断试剂盒中的应用。
[0015] 发明人首先对IL-6基因 SNP位点进行了筛选。先通过查询大量相关文献或记录,筛 选出可能和疾病之间存在关联的SNP位点;然后在第二代化pMap数据库中,WMA於5 %为入 选标准,筛选了 rs2069852位点。因此本发明鉴定了与慢性乙型肝炎病情转归相关的IL-6基 因的SNP位点。
[0016]本发明还提供了 一种检测与慢性乙型肝炎病情转归相关的IL-6基因 SNP位点 rs2069852 的 Taqman 探针法。
[0017] 如上所述,本发明采用了一种检测与慢性乙型肝炎病情转归相关的IL-6基因 SNP 位点的方法,该方法为化qman探针法,具体地说,包括了如下步骤:
[0018] 1.针对IL-6基因 rs2069852位点,于ABI公司购买引物和探针,并对样本基因组DNA 在Roche LC480 Π PCR仪上进行特异性PCR扩增。Taqman探针被进行过双标记,其分别是针 对双等位SNP的不同基因型,只有完全匹配的探针才能扩增出各自对应的基因型;而运两种 探针分别被两种巧光染料Vic, Fam标记。
[0019] 2.按下列条件进行反应:起始95°C预热lOmin,然后95°C变性10s,60°C退火和延伸 30s,循环45次。产物在Roche LC48〇n型巧光定量PCR仪上扫描读取数据,分析得出研究对 象的基因型。
[0020] 另一方面,本发明还提供了与乙型肝炎肝硬化转归相关的IL-6基因的SNP位点,即 IL-6基因 rs2069852位点及其在慢性皿V感染人群预警中的应用。例如,由于本发明证实了 IL-6基因 rs2069852位点AG基因型与乙肝的病程进展存在关联,因此,在皿V慢性感染人群 的预警中,就需要对所咨询的对象进行IL-6基因 rs2069852位点基因型分析,W判断该对象 是否携带易感AG基因型。在总体人群中,与AA、GG基因型乙肝携带者相比,rs2069852位点AG 基因型乙肝携带者病程进展更为迅速,最终更易发生肝硬化。对具有AG基因型乙肝携带者, 则可对之进行科学的干预,例如建议其尽早进行治疗性预防等措施,运样可针对性地降低 运些易感人群发生乙肝肝硬化的风险。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0022] 实施例1
[0023] 该实施例采用了一种检测与慢性乙型肝炎病情转归相关的IL-6基因 SNP位点的方 法。
[0024] 一、基因组DNA的提取
[00巧]采用美国Qiagen公司QIAamp DNA Blood Mini试剂盒,并按说明书方法提取全血 DNA。
[0026] 实验前准备:提前一天将血液样品转移至4°C冰箱,让血液融化。打开金属浴并调 到56°C,准备好离屯、管,口罩,餐巾纸,厨房用纸,酒精喷壶,废纸婆,废液缸等。(参照qiagen 试剂盒)
[0027] 1.向1.5ml离屯、管中加入20ul蛋白酶;如需去除RNA,再向管内加入4ulRNA酶。
[0028] 2.在1.5ml离屯、管中加入200ul样品;吸取血液时请不要碰触管壁,W免污染移液 器。
[0029] 3.加入200ul缓冲液AL,充分颠倒混匀,振荡15s。
[0030] 4. 56°C溫浴化左右。
[0031] 5.加入200ul无水乙醇,充分混匀15s(不可剧烈振荡),此时可能会出现絮状沉淀, 简短离屯、W去除管盖内壁的水珠。
[0032] 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中), 800化pm离屯、Imin,倒掉废液,将吸附柱放入新的收集管中。
[0033] 7 .向吸附柱中加入500
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