新化合物、其制造方法及其用图
【专利说明】新化合物、其制造方法及其用途 【技术领域】
[0001] 本发明设及新化合物、其制造方法及其用途。更具体地说，本发明提供在高分子载 体上负载有次横酷基化晚结构的化合物、该化合物的制造方法W及使用了该化合物的新的 肤合成方法等。 【【背景技术】】
[0002] W往，在蛋白质、肤或核酸等生物体分子的分析和检测等中，使用与该生物体分子 结合的标记物质来制成标记体的技术在生物学、分子生物学等领域中得到大量应用。作为 分子标记的具体例，有生物素标记。在各种检测系统或生理活性物质的提纯中，为了提高其 灵敏度，开发出了利用亲和素与生物素的强力亲和性的系统。而且，生物素标记物质在该系 统中是必须的(非专利文献1)。
[0003] 含有生物素标记的标记分子的导入通常使用对生理活性物质中的数种官能团具 有反应性的标记试剂来进行。作为该官能团的示例，可W举出氨基、径基、咪挫基、W及硫醇 基等。或者，还有能够选择性地标记任意一个官能团的试剂。例如可W举出选择性地标记SH 基的试剂。关于选择性地标记甜基，在肤或蛋白质的情况下，是指选择性地标记半脫氨酸残 基。已知半脫氨酸所具有的SH基或由半脫氨酸形成的二硫化物对于蛋白质的立体结构、蛋 白质的酶活性具有很大影响，对其位置进行鉴定在分析蛋白质的结构或活性时是很重要 的。实际上，已知有使用与SH基结合的巧光物质对蛋白质中的SH基进行标记来鉴定其在蛋 白质中的所在的方法。
[0004] 另外，不限于对半脫氨酸或其衍生物的应用，作为对甜基进行标记的示例，还已知 有对周期蛋白依赖性激酶下称为CDK)的活性进行测定的方法(专利文献1)。在该测定方 法中，首先使用CDK和腺巧5 ' -0-(3-硫代Ξ憐酸醋），在CDK的底物中导入SH基。接着，利用与 SH基选择性地结合的标记物质对导入至底物中的甜基进行标记。然后，测定被标记的底物， 由此完成CDK的活性测定。
[000引运些用于选择性地标记細基的试剂需要具有如下所述的性质。第一，仅对細基进 行标记，而不会对其它官能团带来影响。第二，能够仅分离、提纯标记的分子，从标记到提纯 可通过简便的操作来进行。若不仅在甜基上进行标记、而且还作用于其它官能团或结构，贝U 会损害作为本来目的的活性测定或部位鉴定的准确性。最近也报告了多例W针对SH基的选 择性标记为特征的试剂(专利文献2和3)。
[0006] 但是，在利用运些试剂进行的标记操作中，多使用过量的标记试剂，在大多数情况 下会残留未反应的试剂或试剂的分解物。因此，通常在标记反应后需要进行除去过量的标 记试剂和副产物的操作。
[0007] 在标记对象为蛋白质、抗体运样的高分子的情况下，为了除去过量投入的标记试 剂，可W使用利用分子量差的凝胶过滤、利用膜滤器的（离屯、）超滤。但是，在标记低分子化 合物的情况下，运些方法无法应用，为了除去具有相似分子量的试剂残渣，需要利用更为复 杂的层析法等进行提纯。
[0008] 因此，在需要对低分子有机化合物进行标记的筛选中，期望更为简便的标记方法。
[0009] 如此，在用于选择性标记SH基的现有试剂中，存在各种问题。
[0010] 鉴于该现有技术的问题，本发明人将现有的分子标记的方法与固相化学的方法组 合使用，将与游离SH基选择性地形成非对称二硫键的2-二硫基化晚骨架负载至固相载体 上，创制出了能够有效地导入标记物质的化合物(专利文献4、非专利文献2)。并且发现，通 过将该化合物作为用于利用标记物质对具有SH基的化合物进行标记的SH选择性标记试剂 来使用，能够建立即使对低分子化合物也可进行标记而无需经过复杂提纯手段的方法。
[0011] 【现有技术文献】
[0012] 【专利文献】
[0013] 专利文献1:日本特开2002-335997号公报
[0014] 专利文献2:日本特开2004-530885号公报
[0015] 专利文献3:日本特开2010-51289号公报
[0016] 专利文献4:日本特开2012-117981号公报
[0017] 【非专利文献】
[001引非专利文献1:"化学大辞典Γ共立(昭和42年9月10日）
[0019] 非专利文南犬2 :Development of a solid-supported biotinylation reagent for efficient biotin labeling of SH groups on small molecules K.Fukumoto, A.Kajiyama,Y.Hayashi,et al.Tetrahedron Lett.,53,(5),535-538(2012). 【
【发明内容】
】
[0020] 【发明所要解决的课题】
[0021] 本发明的目的在于提供与W往完全不同的、具有无需进行提纯运样的特点的新的 肤合成方法，并且提供能够进行新的人工功能蛋白质的合成/创制、新的功能肤的合成/创 制的新化合物、W及不拘于肤的有机化合物、其制造方法。
[0022] 【用于解决课题的手段】
[0023] 专利文献4中公开的化合物作为SH选择性标记试剂是有用的，但并未将其本身作 为新肤的合成方法使用。
[0024] 本发明人进一步进行了研究，着眼于具有S-S键形成能力的3-硝基-2-氯次横酷基 化晚，创制出了在树脂上负载有氯次横酷基化晚结构的化合物，结果令人吃惊地发现，通过 使用该化合物，能够在不经过提纯过程的情况下利用非常简单的方法将不同的肤片段依次 多个连接，从而达成了本发明。
[0025] 目P，本发明提供下述方案：
[0026] [1]-种下述式(I)所表示的化合物或其盐。
[0027] 【化1】
[002引
[0029](式中，
[0030] W与其它环原子一起形成选自化晚、化嗦、咪挫、嗯挫、嚷挫、哇嘟、异哇嘟、哇喔嘟、 菲咯嘟、蝶晚或叮辛因的含氮杂环；
[0031] X表示选自氣、氯、漠或舰的面原子；
[0032] Y表示在上述含氮杂环上存在的氨原子或吸电子性取代基；
[0033] R表示高分子载体；
[0034] L<\Li可W各自独立地存在，在存在的情况下表示具有化学上稳定的结构的连接基 团；
[003引A3、Ab可W各自独立地存在，在存在的情况下分别表示连接lD-l1、l1-R的官能团；
[0036] η表示0~10的整数）
[0037] [2巧日[1]所述的化合物或其盐，其中，A3、Ab在存在的情况下各自独立地选自由締 控、烘、幾基、醋、酸、氧化締控、酷胺、脈、阱、Ξ挫、讽、亚讽、横酸醋、横酷胺、亚横酸醋、亚横 酷胺、赃晚W及二氧六环组成的组；
[0038] [3巧日[1 ]所述的化合物或其盐，其中，上述化合物由下述式(II)所表示，上述含氮 杂环为化晚环，Li不存在，A3为酷胺基，Ab不存在，η为1。
[0039] 【化2】
[0040]
[0041] (式中，X、Y、R、L^日式(I)中所定义）
[0042] [4巧日[1]所述的化合物或其盐，其中，上述化合物由下述式（Il-a)所表示，上述含 氮杂环为化晚环，A3为酷胺基，Ab为酷胺基，η为!~5。
[004引【化3】
[0044]
[004引（式中，X、Y、R、L*\l1如式(I)中所定义）
[0046] [5]如[1]~[4]中任一项所述的化合物或其盐，其中，上述吸电子性取代基为硝 基、Ξ氣甲基或面素。
[0047] [6巧日[1]~[5]中任一项所述的化合物或其盐，其中，L呀日Li在存在的情况下各自 独立地选自由直链或支链的C1~C20亚烷基、C2~C20亚締基、C2~C20亚烘基、具有3~20个 碳原子的环亚烷基、具有3~20个碳原子的环亚締基、亚芳基、单环式杂亚芳基、杂环、胺、酷 胺、酸、醋、硫化物、酬、聚乙二醇链和下述式(a)所表示的基团组成的组，运些亚烷基、亚締 基、亚烘基、环亚烷基、环亚締基、亚芳基和单环式杂亚芳基具有或不具有取代基。
[0048] 【化4】
[0049]
[0050] (式中，R3表示具有或不具有取代基的Cl~C15亚烷基）
[0051] [7巧日[1]~[6]中任一项所述的化合物或其盐，其中，R为固相合成法中使用的高 分子载体。
[0052] [引如[7]所述的化合物或其盐，其中，R选自由聚苯乙締、聚丙締、聚乙締、聚酸、聚 氯乙締、葡聚糖、丙締酷胺、聚乙二醇、它们的共聚物和交联物、磁珠、W及运些物质的组合 组成的组。
[0053] [9]一种細基选择性反应性固相负载型试剂，其含有[1]~[引中任一项所述的化 合物或其盐。
[0054] [10] -种制造下述式（IV)所表示的化合物的方法，使下述式（I)所表示的化合物 与式(III)所表示的化合物反应来制造式(IV)所表示的化合物。
[005引【化5】
[0056] )
[0057] (式中，W与其它环原子一起形成选自化晚、化嗦、咪挫、嗯挫、嚷挫、哇嘟、异哇嘟、 哇喔嘟、菲咯嘟、蝶晚或叮辛因的含氮杂环；
[0058] X表示选自氣、氯、漠或舰的面原子；
[0059] Y表示氨原子或吸电子性取代基；
[0060] R表示高分子载体；
[0061 ] L<\Li在存在的情况下表示具有化学上稳定的结构的连接基团；
[006引 A3、Ab在存在的情况下分别表示连接护L1、L1-R的官能团；
[0063] η表示0~10的整数）
[0064] 【化6】
[0065]
[0066] (式中，
[0067] Qi表示有机化合物；
[0068] L2在存在的情况下表示具有化学上稳定的结构的连接基团；
[0069] 心在存在的情况下表示具有S-PG的官能团；
[0070] PG表示甜基的保护基团或氨原子）
[0071] 【化7】
[0072]
[007引（式中，胖、￥、3心心、43、4%如式(1)中所定义，91心、心如式(111)中所定义）
[0074] [11巧日[10]所述的方法，其中，L2选自由直链或支链的C1~CIO亚烷基、C2~CIO亚 締基、C2~CIO亚烘基、具有3~10个碳原子的环亚烷基、具有3~10个碳原子的环亚締基、亚 芳基、单环式杂亚芳基、杂环、胺、酷胺、酸、醋、硫化物、酬、聚乙二醇链、聚酷胺和下述式(a) 所表示的基团组成的组，运些亚烷基、亚締基、亚烘基、环亚烷基、环亚締基、亚芳基和单环 式杂亚芳基具有或不具有取代基。
[007引【化8】
[0076]
[OOW](式中，R3表示具有或不具有取代基的Cl~C15亚烷基）
[0078] [12]如[10]或[11]所述的方法，其中，Qi选自由下述物质组成的组:选自氨基酸、 肤、蛋白质、抗体、核酸碱基、核巧酸或核巧的生物体来源有机化合物、高分子化合物、低分 子化合物、巧光标记物质、酶标记物质、生物素、馨合剂W及它们的包含同位素的衍生物。 [0079] [13]如[10]~[12忡任一项所述的方法，其中，上述甜基的保护基团选自叔T基、 Ξ苯甲基、二苯甲基、苄基、甲基苄基、二甲基苄基、Ξ甲基苄基、甲氧基苄基、二甲氧基节 基、Ξ甲氧基苄基、硝基苄基、乙酷胺甲基、9-巧基甲基、幾基节氧基、二苯基苄基、乙基氨基 甲酯基、化晚甲基、横酷基或其盐。
[0080] [14] -种制造下述式(VI)所表示的化合物的方法，使式（IV)所表示的化合物与式 (V)所表示的化合物反应来制造式(VI)所表示的化合物。
[0081 ]【化9】
[0082]
[0083] (式中，
[0084] W与其它环原子一起形成选自化晚、化嗦、咪挫、嗯挫、嚷挫、哇嘟、异哇嘟、哇喔嘟、 菲咯嘟、蝶晚或叮辛因的含氮杂环；
[0085] Y表示氨原子或吸电子性取代基；
[0086] R表示高分子载体；
[0087] ιΛιΛ。在存在的情况下表示具有化学上稳定的结构的连接基团；
[008引A3、Ab在存在的情况下分别表示连接LD-l1、l1-R的官能团；
[0089] 心在存在的情况下表示具有S-PG的官能团；
[0090] Qi表示有机化合物；
[0091] η表示0~10的整数）
[0092] 【化10】
[0093]
[0094] (式中，
[0095] Q2表示有机化合物；
[0096] L3在存在的情况下表示具有化学上稳定的结构的连接基团;A2在存在的情况下表 示具有S-PG的官能团;PG表示SH基的保护基团或氨原子）
[0097] 【化11】
[009引
[0099] 试中，〇1、〇2心心、41、人2如上述所定义）
[0100] [1引如[14]所述的方法，其中，上述吸电子性取代基为硝基、Ξ氣甲基或面素。
[0101] [16巧日[14]或[15]所述的方法，其中，L2、L3各自独立地选自由直链或支链的C1~ CIO亚烷基、C2~CIO亚締基、C2~CIO亚烘基、具有3~10个碳原子的环亚烷基、具有3~10个 碳原子的环亚締基、亚芳基、单环式杂亚芳基、杂环、胺、酷胺、酸、醋、硫化物、酬、聚乙二醇 链、聚酷胺和下述式(a)所表示的基团组成的组，运些亚烷基、亚締基、亚烘基、环亚烷基、环 亚締基、亚芳基和单环式杂亚芳基具有或不具有取代基。
[0102] 【化12】
[0103]
[0104] (式中，R3表示具有或不具有取代基的C1~C15亚烷基）
[0105] [17巧日[14]~[16]中任一项所述的方法，其中，Qi、Q2各自独立地选自由下述物质 组成的组:选自氨基酸、肤、蛋白质、抗体、核酸碱基、核巧酸或核巧的生物体来源有机化合 物、高分子化合物、低分子化合物、巧光标记物质、酶标记物质、馨合剂、生物素 W及包含稳 定同位素的它们的衍生物。
[0106] [1引一种制造式(II)所表示的化合物的方法，其包括下述工序(a)~工序(f):
[0107] (a)使式（1)所表示的化合物与亚硫酷氯、草酷氯、二氯烷基乙内酷脈、Ξ氯氧憐或 五氯化憐反应来制备式(2)所表示的化合物的工序；
[0108] 【化13】
[0109]
[0110] (Y表示氨原子或吸电子性取代基，^存在的情况下表示化学上稳定的连接基 团）
[0川]【化14】
[0112]
[0113] (b)使式(2)所表示的化合物与R'0H(R'表示C1~CIO烷基)反应来制备式(3)所表 示的化合物