一组结核分枝杆菌蛋白及其编码基因与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一组蛋白及其编码基因与应用；特别涉及一组结核分枝杆菌蛋白及其 编码基因与应用，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 多个世纪以来，结核病持续在全球成为一个不容忽视的公共卫生问题。目前全球 已有三分之一的人口携带结核分枝杆菌，仅2010年一年就新增结核病病例880万，死亡145 万，平均不到22秒即有一人死于肺结核病，结核病高居传染病死亡人数之首。而我国是全 球22个结核病高负担国家之一，结核病患者人数高居全球第二位，受感染人数超过5亿，仅 2010年一年就有新发病例90~120万，占据了全球总新增病例的约12%，如不及时采取有 效措施，在未来十年内可能有3000万人发病，将会导致严重的公共卫生问题和社会问题， 所以从国家战略层面必需尽快实现对肺结核的有效控制。
[0003] 科学表明由于活动性肺结核的极易传播性，对活动性肺结核的诊断及尽快消除传 染源，结核病的治疗效果评估及控制结核病流行有非常重大的意义。然而肺结核的根治目 前还不能完全做到，据研究表明活动性结核病患者经不同的短程化疗治愈后，有1% -9% 的患者将会复发，而在一些特殊人群中，高达20% (Hong Kong Chest Service/British Medical Research Council.Am Rev Respir Dis, 1991，143:700-706)，而且耐药性结核病 进一步传播与复发未及时诊断的结核患者有很大的关系。所以关于结核治愈患者的活动性 肺结核诊断对于防治结核的整体战略具有很大的意义。另外，从临床治疗角度看，结核病的 常规治疗方案一般需要6个月的时间，而常规结核病的治疗药物有一定的毒副作用，病人 的依从性并不好。由于个体间的差异，理论上不同病人实际需要的用药时间可能会有很大 的不同，但对于如何细分病人，目前仍缺乏客观的判断指标。通过系统地比较活动性结核病 病人和结核康复人群的血清，有可能发现一批可以准确区分这两类人群的生物标识物，这 些标识物将可用于康复过程的监控，从而有可能指导活动性结核病病人的个体化用药，缩 短用药周期，提高病人对治疗的依从性，降低治疗费用，提高最终的治疗效果。
[0004] 目前活动性判断应综合临床、X线表现和痰菌决定，而主要依据是痰菌和X线。痰 涂片检查简便易行，准确性较高，是活动性肺结核确诊的金标准，但某些研究中其检出率甚 至低于10%。基于核酸扩增的诊断方法，如实时定量PCR以及DNA芯片的优点是灵敏度高 且耗时短，其问题在于特异性较难保证，容易导致假阳性结果。而基于抗原抗体反应的血清 学诊断，由于其简便性、快速性，日益成为重要的活动性肺结核临床辅助性诊断手段，并且 能满足区分结核康复人群与活动性肺结核的要求。因此，从长远角度综合来看，应致力于发 现敏感性和特异性均较好的结核标志物。
[0005] 理想的结核诊断标志物应符合以下条件：（1)敏感性高；（2)特异性高；（3)存在 于体液，特别是血液中，易于检测。但是目前肺结核分枝杆菌血清学诊断所针对的抗原如抗 原5、38KD抗原、30/31KD抗原以及抗原60等，均存在阳性检出率低，与其它分支杆菌的交 叉免疫性等问题，虽然在疗效监测、提示复发、判断预后和高危人群的普查中具有一定的价 值，但目前仍不能用于活动性肺结核的确诊及对病人康复过程的监控。为了实现对活动性 肺结核的高灵敏性，高特异性的诊断，及对康复过程的有效监控，急需在分子水平上寻找到 更敏感、更特异的活动性肺结核生物标志物。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一组结核分枝杆菌蛋白及其编码基因与应用。
[0007] 本发明提供一组蛋白，由如下（1)-(7)所示的蛋白组成：
[0008] (l)SEQ ID No. 1 所示的蛋白；
[0009] (2) SEQ ID No. 3 所示的蛋白；
[0010] (3) SEQ ID No. 5 所示的蛋白；
[0011] (4) SEQ ID No. 7 所示的蛋白；
[0012] (5) SEQ ID No. 9 所示的蛋白；
[0013] (6) SEQ ID No. 11 所示的蛋白；
[0014] (7) SEQ ID No. 13 所示的蛋白。
[0015] 上述蛋白是用于诊断或辅助诊断活动性肺结核的一组蛋白。
[0016] 上述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。
[0017] 上述编码基因中，所述编码基因为如下（1)-(7)所示的DNA分子：
[0018] (l)DNA 分子 1:
[0019] 1) SEQ ID No. 2 所示的 DNA 分子；
[0020] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 1所示 的蛋白的DNA分子；
[0021] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 1所示的蛋白的DNA分子；
[0022] (2) DNA 分子 2 :
[0023] 1) SEQ ID No. 4 所示的 DNA 分子；
[0024] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 3所示 的蛋白的DNA分子；
[0025] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 3所示的蛋白的DNA分子；
[0026] (3) DNA 分子 3 :
[0027] 1) SEQ ID No. 6 所示的 DNA 分子；
[0028] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 5所示 的蛋白的DNA分子；
[0029] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 5所示的蛋白的DNA分子；
[0030] (4) DNA 分子 4 :
[0031] 1) SEQ ID No. 8 所示的 DNA 分子；
[0032] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 7所示 的蛋白的DNA分子；
[0033] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 7所示的蛋白的DNA分子；
[0034] (5) DNA 分子 5 :
[0035] 1) SEQ ID No. 10 所示的 DNA 分子；
[0036] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 9所示 的蛋白的DNA分子；
[0037] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 9所示的蛋白的DNA分子；
[0038] (6) DNA 分子 6 :
[0039] 1) SEQ ID No. 12 所示的 DNA 分子；
[0040] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 11所示 的蛋白的DNA分子；
[0041] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 11所示的蛋白的DNA分子；
[0042] (7) DNA 分子 7 :
[0043] 1) SEQ ID No. 14 所示的 DNA 分子；
[0044] 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码上述蛋白中SEQ ID No. 13所示 的蛋白的DNA分子；
[0045] 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码上述蛋白中SEQ ID No. 13所示的蛋白的DNA分子；
[0046] 含有上述任一所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也属于 本发明的保护范围。
[0047] -种蛋白质芯片也属于本发明的保护范围，包括基片和与其连接的上述的蛋白 质；且每种蛋白单独成立一个检测点；
[0048] 所述蛋白质芯片上，每种蛋白点样形成的检测点的数量> 2。
[0049] 上述蛋白质芯片中，所述基片为载体玻片；
[0050] 所述蛋白质芯片是分别将所述的蛋白质点样于所述载体玻片上制成的；
[0051] 所述蛋白质芯片还包括IgG标准品或Cy5标记羊抗人抗体二抗形成的检测点作为 阳性对照；
[0052] 所述IgG标准品具体购自YEASEN，产品目录号为36110ES10 ;
[0053] 所述Cy5标记羊抗人抗体二抗具体购自lifeholder，产品目录号为LH-G11345。
[0054] 含有上述蛋白的试剂盒也属于本发明的保护范围。
[0055] 含有上述任一所述的蛋白质芯片的试剂盒也属于本发明的保护范围。
[0056] 上述试剂盒中，所述试剂盒还包含使用说明书，说明书中记载内容如下：
[0057] 1)将待检血清点样于上述任一所述的蛋白质芯片进行检测，并用Cy5标记的抗人 二抗进行显色，将蛋白质芯片在Cy5荧光的发射波长下进行检测，得到各检测点的信噪比， 记作SNR ; .SB
[0058] 所述SNR的计算公式为S.NR =- σ
[0059] 所述公式中，S和B分别为蛋白质芯片中检测点的原始的信号值和背景值，〇代表 检测点的原始信号的标准差；
[0060] 所述原始的信号值为芯片扫描仪直接显示的数值；
[0061] 所述背景值为蛋白质芯片上非样品点制区域的信号值；
[0062] 所述标准差所对应的实验次数具体为3次；
[0063] 2)如果待检血清点样于所述蛋白质芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 1所示 的蛋白的所有检测点的SNR > 8. 32且彡10. 21，则待检血清候选判定为上述蛋白中所述的 SEQ ID No. 1所示的蛋白的抗体阳性，如果SNR彡6. 94且彡8. 27,则待检血清候选判定为 上述蛋白中所述的SEQ ID No. 1所示的蛋白的抗体阴性；
[0064] 如果待检血清点样于所述蛋白质芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的 蛋白的所有检测点的SNR > 7. 68且< 9. 95,则待检血清候选判定为上述蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的蛋白的抗体阳性，如果SNR彡6. 31且彡7. 55,则待检血清候选判定为上述 蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的蛋白的抗体阴性；
[0065] 如果待检血清点样于所述蛋白质芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 5所示的 蛋白的所有检测点的SNR > 7. 16且彡9. 75,则待检血清候选判定为