一种用于肺腺癌诊疗的分子标记物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及一种用于肺腺癌诊疗的分子标记物，所述分子标 记物为UPK3B。
【背景技术】
[0002] 癌症是影响社会经济发展和人民生活水平的重大疾病之一，随着全球工业化和环 境污染的加重，肺癌已跃居全世界癌症发病率和死亡率的首位，每年全球肺癌死亡人数超 过100万。肺癌氛围非小细胞肺癌和小细胞肺癌。非小细胞肺癌占85 %，小细胞肺癌占15 %。 非小细胞肺癌包括腺癌、鳞癌、大细胞癌及腺鳞癌等，其中腺癌的比例最高，约占全部肺癌 的50%。肺腺癌大多起源于较小的支气管粘膜分泌液的上皮细胞，大多数腺癌位于肺组织 的周围，呈球形肿块，靠近胸膜部位。在周围型肺癌中，肺腺癌的发病率居肺癌各组织学类 型之首，且其发病率呈明显升高趋势。肺腺癌患者中女性病人较多，发病年龄也较小。
[0003] 肺腺癌早期临床症状隐匿，不易发现，大多患者在就诊时已到中晚期，失去了最佳 手术时机，即使手术，多数患者仍会死于肺腺癌复发的侵袭或转移。有报道表明，早期肺腺 癌患者术后5年生存率约为90%，1-11期患者5年生存率低于70%，而晚期患者仅为1%。因 此，早发现、早治疗是降低肺腺癌患者高死亡率、改善预后的关键。临床上肺腺癌早期诊断 主要依赖于X线检查、支气管镜检查、放射性核素检查、细胞学检查、剖胸探查、ECT检查、纵 隔镜检查等。利用现有的检查手段来区别肺腺癌与肺其他类型的肿瘤以及胸膜间皮瘤，具 有较大的困难。
[0004] 近年来，随着分子生物学的不断发展，一些新的生物标志物已经出现，不仅对肺腺 癌的病理诊断提供了很大的帮助，并为其预后判断、治疗方案的选择提供了更全面的依据， 在一定程度上发挥了独特的作用。进一步寻找肺腺癌早期诊断和复发转移的分子标志物， 是提高肿瘤患者治愈率与生存率的有效手段，并对肺腺癌的诊断和治疗具有重要的理论意 义和临床应用价值。
【发明内容】
[0005] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于肺腺癌诊疗的分子 标记物-UPK3B基因。相比传统的肺腺癌的诊断和治疗方法，使用基因标志物来诊断和治疗 肺腺癌具有敏感性、特异性和无创性。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] 本发明提供了UPK3B基因及其表达产物在制备诊断肺腺癌的产品中的应用。
[0008] 进一步，所述产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检 测UPK3B基因及其表达产物的表达水平以诊断肺腺癌的产品。
[0009] 进一步，所述用RT-PCR诊断肺腺癌的产品至少包括一对特异扩增UPK3B基因的引 物;所述用实时定量PCR诊断肺腺癌的产品至少包括一对特异扩增UPK3B基因的引物;所述 用免疫检测诊断肺腺癌的产品包括:与UPK3B蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂交诊断 肺腺癌的产品包括:与UPK3B基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片诊断肺腺癌的产品包 括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括与UPK3B蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包 括与UPK3B基因的核酸序列杂交的探针。
[0010]进一步，所述基因芯片可用于检测包括UPK3B基因在内的多个基因（例如，与肺腺 癌相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括UPK3B蛋白在内的多个蛋 白质（例如与肺腺癌相关的多个蛋白质）的表达水平。通过同时检测多个肺腺癌的标志物， 可大大提高肺腺癌诊断的准确率。
[0011] 本发明提供了一种诊断肺腺癌的产品，所述产品能够通过检测肺组织中UPK3B基 因的表达水平来诊断肺腺癌。
[0012] 进一步，所述产品包括芯片、或试剂盒；其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯 片;所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白免疫检测试剂盒。
[0013]进一步，所述基因检测试剂盒可用于检测包括UPK3B基因在内的多个基因（例如， 与肺腺癌相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白免疫检测试剂盒可用于检测包括UPK3B蛋 白在内的多个蛋白质(例如与肺腺癌相关的多个蛋白质）的表达水平。将肺腺癌的多个标志 物同时进行检测，可大大提高肺腺癌诊断的准确率。
[0014] 本发明提供了 UPK3B基因及其表达产物在制备治疗肺腺癌的药物组合物中的应 用。
[0015] 进一步，所述药物组合物包括增加 UPK3B基因表达、增强UPK3B表达功能、和/或增 强UPK3B表达产物活性的试剂。
[0016] 进一步，所述试剂包括:含有能编码功能性UPK3B蛋白的核酸的试剂、UPK3B蛋白的 激活剂、含有UPK3B蛋白质的试剂。
[0017] 其中，所述含有能编码功能性UPK3B蛋白的核酸的试剂可以是在有利条件下翻译 成活性形式的UPK3B蛋白的单链核酸(如mRNA)或双链核酸(如DNA)，所述的核酸可以连接在 表达载体上或重组到宿主细胞里，只要能编码成活性UPK3B蛋白，任何一种UPK3B基因的携 带方式均可。所述的UPK3B蛋白激活剂是指刺激UPK3B蛋白活性、增加 UPK3B蛋白活性、促进 UPK3B蛋白活性、增强UPK3B蛋白激活、使UPK3B蛋白活性敏感化或上调UPK3B蛋白活性的试 剂，如去甲基化试剂、UPK3B启动子和/或增强子特异性的转录激活剂、UPK3B蛋白的激动剂 (如激活抗体)等。
[0018] 进一步，上述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体可以是一种也可 以是多种，所述载体包括但不限于稀释剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合剂 如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、鹿糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、 乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤 维素和羟丙基甲基纤维素等;表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸 钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等;致湿剂如甘油、淀粉等;吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、 硅胶、高岭土和皂粘土等；润滑剂如硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸 钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗 糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等;填充剂如甘露醇(粒状或粉状）、 木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀 粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠等；崩解剂如交联乙烯吡咯烷 酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。
[0019] 所述的药物组合物可以使用不同的添加剂进行制备，例如稳定剂、杀菌剂、缓冲 剂、等渗剂、螯合剂、pH控制剂及表面活性剂。
[0020] 稳定剂包括人类血清蛋白、L-氨基酸、糖及纤维素衍生物。L-氨基酸还可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖 等;糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等;二糖，例如蔗糖、麦芽糖、乳糖等;多聚糖，例如葡 聚糖、羟丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤维 素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素及羟甲基纤维素钠。
[0021] 表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖单 酰基酯、脂肪酸甘油酯。
[0022] 添加剂缓冲剂可以包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、谷氨酸及相应的盐(它们的碱金 属或碱性稀土金属盐，例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐）。等渗剂包括氯化钾、氯化钠、糖及甘 油。螯合剂包括乙二胺四乙酸钠及柠檬酸。
[0023]本发明还提供了一种治疗肺腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括增加 UPK3B 基因表达、增强UPK3B表达功能、和/或增强UPK3B表达产物活性的试剂。
[0024]本发明的药物可以用于补充内源性的UPK3B蛋白的缺失或不足，通过提高UPK3B蛋 白的表达，从而治疗因 UPK3B蛋白减少导致的肺腺癌。
[0025]本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、 粘粒、噬菌体、病毒等。
[0026]进一步，本发明中UPK3B蛋白或编码UPK3B蛋白的核酸可以通过脂质体给予，所述 脂质体的作用是将药物靶向于特定的组织，以及增加药物的半衰期。脂质体包括乳化剂、起 泡剂、液态脂质、固态脂质、不溶性单层、磷脂分散剂、表面活性剂等。所述的脂质体中还可 以包括能与靶向的细胞中的受体分子结合或其他治疗性或免疫原性组合物。
[0027] 本发明的药物组合物可以被配制成任何的给药类型，例如，利用注射器或其它装 置的皮内注射、皮下注射、静脉内注射、腹膜内注射、胸膜内注射、膀胱内注射、冠状动脉内 或肿瘤内注射、口服给药、直肠给药。
[0028] 本发明的药物导入组织或者细胞的方式可以分为体外或者体内的方式。体外方式 包括将含有UPK3B基因的药物或者含有UPK3B蛋白质的药物导入细胞中，再将细胞移植或回 输到体内。体内方式包括直接将含有UPK3B基因的药物或者含有UPK3B蛋白质的药物注入体 内组织中。
[0029] 本发明的药物还可与其他治疗肺腺癌的药物联用，其他治疗性化合物可以与主要 的活性成分(例如，UPK3B蛋白或编码所述蛋白的核酸）同时给药，甚至在同一组合物中同时 给药。还可以以单独的组合物或与主要的活性成分不同的剂量形式单独给予其它治疗性化 合物。主要成分(如UPK3B蛋白或编码所述蛋白的核酸）的部分剂量可以与其它治疗性化合 物同时给药，而其它剂量可以单独给药。
[0030] 可以在治疗过程中，根据症状的严重程度、复发的频率和治疗方案的生理应答，调 整本发明药物组合物的剂量。
[0031] 在本发明中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。
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