具有抗肿瘤活性的3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-哌啶酮衍生物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及两种具有抗肿瘤活性的3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬化合物及 其制备方法，属于抗肿瘤药物及其制备方法技术领域。
【背景技术】
[0002] a ,0-不饱和酬结构单元是姜黄素类似物3,5-二芳亚甲基-4-赃晚酬的有效药效 团，是近年来发现的一类有效的细胞毒化合物，对核酸中不存在的琉基基团具有较好的亲 和力，而对存在于核酸中的氨基、径基等基团亲和力较小，表现出明显的亲和选择性，因此 受到学者们的广泛关注Ei, 2^。3,5-二芳亚甲基-4-赃晚酬类化合物的药效团是两个a，e-不饱 和酬单元，可W对琉基形成两次连续的烷基化，是该类衍生物与肿瘤细胞的主要结合位点。 与现用的抗肿瘤药物相比，3,5-二芳亚甲基-4-赃晚酬类化合物具有两大优势:一是可避免 临床许多抗肿瘤化疗药的基因毒性，作用机制可能是激活caspase 3诱导核小体间DNA断裂 而导致细胞调亡或自体吞隧W ;二是连续的化学结合使肿瘤细胞更容易受到伤害，对肿瘤 细胞表现出优先选择性和更大的毒性，而对正常细胞毒性很小或无毒性。Shrikant Anant W证实3,5-二（2-氣苯亚甲基)-4-赃晚酬化尸24)能有效地在体内通过激活。曰3口曰36-3和增 强Bax到Bcl-2、Bd-xL等来抑制HCT-116、HT-29、AGS的增殖，从而达到抑制结肠癌和胃肠癌 的效果。H.OsmanW通过环化反应将心脯氨酸和吗I噪酬衍生到3,5-二芳亚甲基-4-赃晚酬的 N原子上，得到了具有较好活性的胆碱醋酶抑制剂，它们的IC50 = 3.36和3.50yM，抑制活性与 乙酷胆碱醋酶Ache几乎相当，并且能超过下酷胆碱醋酶Bu化E的5倍。另外，Awasthia [5]合成 了一系列下締二酸取代的3,5-二（2-氯苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物，并研究发现能够通过 抑制肺癌H441细胞增殖活性，并且电子显微镜观察显示存在明显的细胞自体吞隧现象。
[0003] 2011年W来，本课题组设计并合成了一系列3,5-二（芳亚甲基)-4-赃晚酬化合物 及其N-取代衍生物，通过评价它们对肿瘤细胞系的细胞毒性及抗肿瘤活性，筛选出了部分 体外抗肿瘤活性好的化合物，部分化合物的ICso值低于扣本发明在前期研究的基础 上，合成氨基取代的3,5-二芳亚甲基-4-赃晚酬化合物，初步研究它们的抗肿瘤活性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于寻找对正常细胞毒性小的新型抗肿瘤药物，提供两个3,5-二 (3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物；同时提供上述两个衍生物的制备方法。
[0005] 本发明是通过W下技术方案实现的：
[0006] 具有抗肿瘤活性的3,5-二（3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物，分别命名为3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬(A)和N-甲基-3,5-二（3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬(B)，特 殊之处在于，其结构式为：
[0007]
[000引具有抗肿瘤活性的3,5-二（3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物的制备方法，其原 理为:首先通过4-赃晚酬与间硝基苯甲醒进行克莱森-施密特缩合反应得到中间体化合物， 再将得到的中间体化合物用还原剂进行还原得到发明产物A和B。
[0009] 具有抗肿瘤活性的3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物的制备方法，特殊 之处在于，它包括如下具体步骤：
[0010] 步骤一 ：3,5-二（3-硝基苯亚甲基）-4-赃晚酬和N-甲基-3,5-二（3-硝基苯亚甲 基)-4-赃晚酬中间体的制备
[0011] W间硝基苯甲醒和4-赃晚酬盐酸盐或N-甲基-4-赃晚酬为原料，在醇水溶液中混 合，添加催化剂，常溫揽拌反应一段时间，沉淀抽滤，得到中间体，直接用于下一步反应；
[001 ^ 步骤二：3，5-二（3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物A和B的制备
[0013] 用氯化亚锡、浓盐酸与步骤一中所得中间体进行还原反应一段时间，调节抑值至 碱性，沉淀抽滤，用醇水溶液重结晶得到发明产物A和B;
[0014] 并通过核磁共振、红外光谱验证其结构的正确性。
[0015] 在步骤一中间体的制备过程中，原料间硝基苯甲醒和4-赃晚酬盐酸盐或N-甲基-4-赃晚酬的摩尔比大于等于2:1;
[0016] 在步骤一中间体的制备过程中，醇水溶液的醇为甲醇、乙醇、异丙醇中的任意一 种；
[0017] 在步骤一中间体的制备过程中，添加催化剂为氨氧化钢溶液或者氨氧化钟溶液， 质量浓度为5 %~40 %之间；
[0018] 在步骤一中间体的制备过程中，一段时间是指4~20小时；
[0019] 在步骤二发明产物A和B的制备过程中，为保证硝基能完全被还原，本发明中氯化 亚锡与步骤一得到的中间体的摩尔比大于3;
[0020] 在步骤二发明产物A和B的制备过程中，一段时间是指6~20小时；
[0021] 在步骤二发明产物A和B的制备过程中，调节pH值至碱性，pH应大于12,目的是溶解 锡盐；
[0022] 在步骤二发明产物A和B的制备过程中，用醇水溶液重结晶是指选用乙醇/水或甲 醇/水，体积比大于等于1:1，进行重结晶。
[0023] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物在制 备新型抗肿瘤药物中的应用。
[0024] 本发明的具有抗肿瘤活性的3,5-二（3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物A和B，抗 肿瘤活性好，可避免现在使用的抗肿瘤药的基因毒性，对正常细胞的毒性小。所述衍生物A 和B的制备方法操作简便，反应条件溫和，合成产率高，利于其在抗肿瘤领域的广泛推广。
【具体实施方式】
[0025] W下给出本发明的【具体实施方式】，用来对本发明进行进一步说明。
[00%] 实施例1
[0027] 3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬(A)的合成
[002引将O.Olmol的4-赃晚酬盐酸盐与0.022mol的间硝基苯甲醒混合于25mL乙醇和水的 溶液中，室溫下滴加20mL20%氨氧化钢溶液，常溫揽拌反应化，通过薄层色谱法(TLC)薄层 分析确定反应终点。反应完毕后抽滤，所得沉淀用适量乙酸洗涂，干燥得中间体为浅黄色粉 末。将中间体和0.06mol氯化亚锡加入到20mL浓盐酸中揽拌反应15h，通过薄层色谱法(TLC) 分析确定反应终点，沉淀抽滤，10%碳酸钢溶液洗剂，20mL乙醇/水(体积比1:1)重结晶得到 黄色粉末，即3，5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬(A)，2.38g，收率为78%。
[00 巧]IR(CHfi):3408(w),3301(W)，3185(w)，2918(w)，2815(w)，1659(m)，1595(s)，1577 (s),1493(w),1442(w),1317(m),1238(s),1204(w),1170(w),1078(m),991,937(w),868 (m)，784(m)，686(s)，661(s)，601(w)，544(m)，430(m).iH 醒R(400MHz，DMS0,25°C，TMS, wm):S7.37(s，2H，metMneH)，7.03(t，J = Wz，2H)，6.62(s，2H)，6.57(d，J = Wz，4H)， 5.19(s，4H)，3.91(s，4H).Elemen^lanalysis(%)caled.forCwHi9N3〇:C 74.73，H6.27, N13.76Jound:C 74.75，H6.31，N13.78.
[0030] 实施例2
[0031] N-甲基-3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬(B)的合成
[0032] 将0.0 lmol的N-甲基赃晚酬与0.024mol的间硝基苯甲醒混合于20mL甲醇和水的溶 液中，室溫下加入25mL10%的氨氧化钢溶液，常溫揽拌反应12h，通过薄层色谱法(TLC)薄层 分析确定反应终点。沉淀抽滤得浅黄色粉末。将浅黄色粉末和〇.〇66mol氯化亚锡加入到 25mL浓盐酸中揽拌反应化，通过薄层色谱法(TLC)分析确定反应终点，沉淀抽滤，10 %碳酸 钢溶液洗剂，25血乙醇/水(体积比1.5:1)重结晶得到黄色粉末，即N-甲基-3,5-二（3-氨基 苯亚甲基)-4-赃晚酬(B) ,2.17g，收率为68%。
[0033] IR(CHfi) :3355(w)，3：M7(w)，3222(w)，1600(s)，1583(s)，1452(s)，1316(s)，1259 (s)，1171(s)，1095(s)，1051(s)，991(s)，915(s)，862(m)，780(s)，688(s).iH NMR(400MHz， CDCl3,25°C，TMS，ppm):S7.74(s，2H)，7.22(t J =細z，2H)，6.86-6.79(m，2H)，6.76-6.68 (m，4H) ,3.76 (d，J = 4Hz,細），2.47( S，3H) .13c 匪 R(100MHz，CDCl3) :8187.00,146.45, 137.76,136.27,132.97,129.38,120.71,116.68,115.85,57.07,45.75.Elemental analysis(%)caled.for C2地21 化0:C 75.21，H 6.63，N 13.16;Found:C 75.25，H 6.67，N 13.20.
[0034] 实施例3
[0035] 具有抗肿瘤活性的3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬的制备方法
[0036] 步骤一:3，5-二(3-硝基苯亚甲基)-4-赃晚酬中间体的制备
[0037] W间硝基苯甲醒和4-赃晚酬盐酸盐为原料，在醇水溶液中混合，添加催化剂，常溫 揽拌反应4小时，沉淀抽滤，得到中间体，直接用于下一步反应；
[0038] 所述间硝基苯甲醒和4-赃晚酬盐酸盐的摩尔比大于等于2:1;所述醇水溶液的醇 为异丙醇;所述催化剂为氨氧化钟溶液，质量浓度为8% ;
[0039] 步骤二:3,5-二(3-氨基苯亚甲基)-4-赃晚酬衍生物A的制备
[0040] 用氯化亚锡、浓盐酸与步骤一中所得中间体进行还原反应18小时，调节抑值大于 12,沉淀抽滤，用醇水溶液重结晶得到发明产物A;并通过核磁共振、红外光谱验证其结构的 正确性；
[0041] 所述氯化亚锡与步骤