一种具有医药用途的黄酮类化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物领域，具体设及从马鞭草的干燥地上部分中分离得到的一种新的 黄酬类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 马鞭草，又名铁马鞭、野荆芥、紫顶龙芽草，始载于《名医别录》，为马鞭草科植物马 鞭草(Verbena officinaliS L.)的干燥地上部分。马鞭草味苦性凉，归肝、脾经，具有活血 散疲、利水退黄、解毒、截追的功效，主治瘤瘤积聚、痛经经闭、喉搏、痴肿、水肿、黄痘、追疾。 马鞭草原产于热带美洲，为多年收草本，常生于路边、山坡、溪边或林旁，国内广泛分布于中 南、西南及山西、陕西、甘肃、新疆、江苏、安徽、浙江、江西等地，主产湖北、江苏、广西、贵州。 花期6~8月，果期7~11月，通常采收季节为6~8月开花时，炮制过程仅去残根及杂质，洗 净，稍润，切断，晒干即可。
[0003] 目前已从马鞭草中分离鉴定出百余种化学成分，包括环締酸祗糖巧类、苯丙素糖 巧类、=祗类、黄酬类、酱醇类、挥发油类、有机酸类等。
[0004] 现代医学研究表明马鞭草具有抗肿瘤、抗菌、抗早孕、消炎止痛、止血、小剂量兴 奋、大剂量抑制交感神经末梢、促进乳汁分泌、拟副交感等作用。临床用于治疗外感发热，湿 热黄痘，急性扁桃体炎、小儿急性肾炎、急性乳腺炎、流行性感冒、功能性子宫出血、牙周炎、 霉菌性阴道炎、细菌性频疾等病症。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种从马鞭草的干燥地上部分中分离得到的一种新的黄 酬类化合物；
[0006] 本发明的另一目的在于提供该新化合物的制备方法；
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[000引一种黄酬类化合物，具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将马鞭草的干燥地上部分 粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和 水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱10个柱体积，再用75%乙醇洗脱 12个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤(b)中75%乙 醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烧-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25: 1、20:1和10:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9~13个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。
[0013] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0014] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0015] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0016] 本发明提供的上述黄酬类化合物，在实验中证实A&-40的毒性损害神经细胞，引起 PC12大量调亡，细胞活性下降，上述黄酬类化合物（I)干预后调亡情况得到改善，因此，上述 黄酬类化合物(I)具有医药用途，尤其是在制备保护神经的药物中。
【附图说明】
[0017] 图1为化合物(I)结构式；
[001引图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0020] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0021] 药材和试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海 凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。马鞭草的干燥地 上部分购于安徽毫州中药材市场，产地广东。
[0022] 制备方法：（a)将马鞭草的干燥地上部分(8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(2化 X3次），合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次）和 水饱和的正下醇(化X3次）萃取，浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（315g)和 正下醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙醋萃取物用纯净水溶解至化，医用脱脂棉过滤，滤液用 AB-8型大孔树脂（1.5kg)分离，依次用10%乙醇（1化)和75% (1化)乙醇洗脱，收集75%乙醇 洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（155g); (C)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200- 300目正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (10个柱体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体 积）、10:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤 (C)中组分3(36g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(8个柱体积）、 20:1(8个柱体积)和10:1(5个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d) 中组分2 (12g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶ODS-C18分离，用体积百分浓度为70 %的甲 醇水溶液等度洗脱，收集9~13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (25mg)。
[0023] 结构确证:HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 401.1006,结合核磁特征可得分子式为 C22Hi8〇6，不饱和度为 14。核磁共振氨谱数据Sh(邮m，DMSO-ds，400MHz): H-5 (7.99，d，J = 8.7)，H-6(6.65，d，J = 8.5)，H-2'，6'（7.31，m)，H-3'，5'（7.27，m)，H-4'（7.31，m)，H-5" (8.01，3)，2"-16(1.31，3)，2"-16(1.31，3)，7-016(3.89,3);核磁共振碳谱数据扣（口口111， DMS0-d6，100MHz):131.8(C，2-C)，193.7(C，3-C)，190.3(C，4-C)，113.1(C，4a-C),126.9 (CH，5-C)，104.7(CH，6-C)，163.7(C，7-C)，105.6(C，8-C)，158.1(C，8a-C)，136.3(C，r-C)， 127.8(CH，2'，6'-C)，127.3(CH，3'，5'-C)，127.5(CH，4'-C)，101.8(C，2"-C)，91.7(CH，3"-C)，110.9(C，r-C)，142.7(CH，5"-C)，21.8(CH3,2"-Me)，21.8(CH3,2"-Me)，55.2(C 出，7-OMe);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有芳香碳(2964nm，1695nm和1591nm) 。1化NMR光谱显示22个碳信号，包含S个甲基（SC21.8，2" -Me; 21.8，2"-Me和55.2，7-OMe)， 九个次甲基（此126.9,5-。104.7,6-。127.8,2'，6'-。127.3,3'，5'-。127.5,4'-。91.7， 沪-。142.7,5"-〇，十个季碳（5(：131.8,2-。193.7,3-。190.3,4-。113.1，4曰-。163.7,7-C; 105.6，8-C; 158.1，8a-C; 136.3，r-C; 101.8，2"-C; 110.9，r-C)。核磁数据表明该化合物 为黄酬类化合物。NOESY谱中，H-6(姐6.65，(1^ = 8.5化）与甲氧基质子（姐3.89,3)的相关 性，W及H-5(如7.99，d，J = 8.7Hz)和H-6的相关性，表明C-7(SC163.7)位连有一个甲氧基。 综合氨谱、碳谱、HMB幻普和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如图1所示，立体构型进一步通过EC的式验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0024] 实施例2:化合物(I)药理作用试验 [00巧]一、材料和仪器
[0026] PC12细胞株，安徽中医学院实验中屯、赠与。A&