用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的制作方法

文档序号:9904928阅读:889来源:国知局
用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,适用于多种核酸检测技 术。
【背景技术】
[0002] 近年来,核酸扩增技术作为一种检测方法,被认为具有高敏感性W及高特异性的 优点,广泛应用于食品微生物检测与临床检验中。核酸扩增需要具备W下条件:
[0003] (1)需要被复制的DNA模版;
[0004] (2)针对DNA模版设计的引物;
[0005] (3)用于DNA复制的DNA聚合酶;
[0006] (4)缓冲剂;
[0007] (5)Mg2+;
[000引(6)dNTPs;
[0009] 但W上试剂均需要低溫冷冻保存,尤其是DNA聚合酶,需保存于-20°c,且避免反复 冻融。运就给运输及使用带来极大不便,不仅增加运输成本,且使用时操作复杂,对实验者 技术要求较高,伴随有污染的可能。

【发明内容】

[0010] 本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的 保护剂。
[0011] 本发明的技术方案如下:
[0012] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,其特征是按质量比为(50-100):1的海 藻糖和牛血清白蛋白组成。
[001引本发明的优点:
[0014] (1)添加本发明的保护剂,使核酸扩增试剂冷冻干燥后能在常溫条件下运输,历时 3天,对检测效果没影响,节约运输成本;
[0015] (2)易于保存:冻干体系无需低溫冷冻,可于4°C保存6个月,若于-20°C可保存1年;
[0016] (3)操作容易,检测效果好:将核酸扩增体系与保护剂一起冷冻干燥,使用时仅需 加入缓冲剂复溶,再加入待检测的模版,即可进行检测,且检测灵敏度无损失或损失很小;
[0017] (4)保护剂组分简单,成本低廉:成本较低;
[0018] (5)该组保护剂适用于多种核酸扩增体系的冷冻干燥。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。W下实施例仅用于补充说明本发明而 不用于限制本发明要求保护的范围。W下实施例中的实验条件和方法如无特殊说明,均为 常规条件和方法,实施例中所用试剂、材料如无特殊说明均可通过商业途径获得。W下"%" 均指质量/体积百分比,即g/lOOmLV'均指检测结果为阳性,"一"均指检测结果为阴性。
[0020] 实施例中所用细菌基因组提取试剂盒购买自天根生化科技有限公司。
[0021] 实施例1
[0022] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,按质量比为50:1的海藻糖和牛血清白 蛋白制成。
[0023]制备方法为:
[0024] 将0.5g海藻糖W及lOmg牛血清白蛋白加无菌去离子水至ImL,混匀,溶解。
[0025] 实施例2
[0026] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,按质量比为100:1的海藻糖和牛血清 白蛋白制成。
[0027] 制备方法为:
[002引将Ig海藻糖W及lOmg牛血清白蛋白加无菌去离子水至ImL,混匀,溶解。
[0029] 实施例3
[0030] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,按质量比为60:1的海藻糖和牛血清白 蛋白制成。
[0031]制备方法为:
[0032] 将0.6g海藻糖W及lOmg牛血清白蛋白加无菌去离子水至ImL,混匀,溶解。
[0033] 实施例4
[0034] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0035] 制备冻干试剂
[0036] (1)制备志贺氏菌的PCR扩增反应液,包含时U DNA聚合酶化L、100yM沈Q ID No.l 所示的外引物上游引物O.lyUlOOyM SEQ ID No.2所示的外引物下游引物0.1μL、10mM dNTPs化L、25mM MgCb 2化和2X巧光染料化L,并加入实施例1制备的用于核酸扩增试剂冷 冻干燥的保护剂化L,充分混匀。核巧酸序列见表1。
[0037] (2)将上述体系冷冻干燥。
[003引检测时,用20化复溶剂复溶冻干体系。
[0039] 制备液体试剂
[0040] 用冻干试剂的步骤(1)制备。
[0041] 冻干试剂复溶后与液体试剂,分别加入化L模版,同时进行PCR扩增反应。
[0042] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取108CFU/mL、107C即/mL、10 6C即/ mL、105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL志贺氏菌得到的提取液W及一份阴性对照。
[0043] 检测结果通过巧光检测仪实时监测,其结果见表2。
[0044] 各实施例中使用的复溶剂:每20化复溶剂由2.扣L P化DNA聚合酶缓冲液与17.5μ L无菌去离子水组成。
[0045] 表 1
[0046]
[0049] 实施例5
[0050] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0051] 制备冻干试剂
[0化2] (1)配制志贺氏菌的LAMP扩增反应液,包含:Bst DNA聚合酶lyUlO化Μ SEQ ID No. 1所示的外引物上游引物0.05化、100μΜ SEQ ID No.2所示的外引物下游引物0.05化、 1004]?569 10齡.3所示的内引物上游引物0.441^、1004]\1569 10齡.4所示的内引物下游 引物0.化L、100μMSEQIDNo.5所示的环引物上游引物0.2化、100μMSEQIDNo.6所示的 环引物下游引物0.化L、10mM dNTPs 3化、0.5M MgCb 0.1扣L、5M甜菜碱化LW及2X巧光染 料化L等,并加入实施例2制备的用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂1.化L,充分混匀。
[0053] 核巧酸序列见表1。
[0054] (2)将上述体系冷冻干燥。
[0055] 检测时,用SOliL复溶剂复溶冻干体系。
[0056] 制备液体试剂
[0057] 为冻干试剂的步骤(1)制备。
[005引冻干试剂复溶后与液体试剂,分别加入化L模版,同时进行LAMP扩增反应。
[0059] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取105CFU/mL、104C即/mL、10化即/ mL、102CFU/mL、1 〇iCFU/mL、1 O^FU/mL志贺氏菌的提取液W及一份阴性对照。
[0060] 检测结果通过巧光检测仪实时监测,其结果见表3。
[0061] 表 3
[0062]
[0063] 实施例6
[0064] -种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0065] (1)制备志贺氏菌LAMP扩增反应液,包含:Bst DNA聚合酶化L、100yM沈Q ID No.l 所示的外引物上游引物0.05化、100μΜ SEQ ID齡.2所示的外引物下游引物0.05化、10041 SEQ ID No.3所示的内引物上游引物0.4化、100μΜ SEQ ID No.4所示的内引物下游引物0.4 化、1004]?沈9 10齡.5所示的环引物上游引物0.化1^、1004]\1569 10齡.6所示的环引物下 游引物0.化L、10mM dNTPs 3化、0.51 MgCb 0.1扣L、5M甜菜碱化1^及2X巧光染料化L等, 并加入实施例2制备的用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂1.化L,充分混匀。
[0066] 核巧酸序列见表1。
[0067] W上体系为实验组1;
[0068] 将实验组1试剂冷冻干燥后,用SOliL复溶剂复溶冻干体系复溶为实验组2;
[0069] 将实验组1试剂冷冻干燥后,在常溫放置3天,再于4°C放置6个月,用20化复溶剂复 溶冻干体系复溶为实验组3;
[0070] 实验组1、2、3分别加入化L模版后,进行LAMP扩增反应。
[0071] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取105CFU/mL、104CFU/mL、10^W/ mL、102CFU/mL、1 〇iCFU/mL、1 O^FU/mL志贺氏菌的提取液W及一份阴性对照。
[0072] 检测结果通过巧光检测仪实时监测,其结果见表4。
[007;3]表 4
[0074]
【主权项】
1.一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,其特征是按质量比为(50-100): 1的海藻 糖和牛血清白蛋白组成。
【专利摘要】本发明公开了一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂,按质量比为(50-100):1的海藻糖和牛血清白蛋白组成。添加本发明的保护剂,使核酸扩增试剂冷冻干燥后能在常温条件下运输,历时3天,对检测效果没影响,节约运输成本;易于保存:冻干体系无需低温冷冻,可于4℃保存6个月,若于-20℃可保存1年;操作容易,检测效果好:将核酸扩增体系与保护剂一起冷冻干燥,使用时仅需加入缓冲剂复溶,再加入待检测的模版,即可进行检测,且检测灵敏度无损失或损失很小;保护剂组分简单,成本低廉:成本较低;该组保护剂适用于多种核酸扩增体系的冷冻干燥。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105671171
【申请号】CN201610139403
【发明人】赵化冰, 张宁, 李宏伟
【申请人】中国人民武装警察部队后勤学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月11日
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1