一种苯丙素类化合物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，更具体地，设及一种苯丙素类化合物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 从天然药物中提取分离得到的成分结构多样、活性显著，对其进行分离纯化、结构 修饰、改造和全合成，一直是新药研发的一个主要思路。
[0003] TNF-a:是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子，是迄 今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一，然而其毒副作用也非常严 重。
[0004] IL-10:在局部低浓度时协同刺激APC和T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体，进 行免疫调节。大量产生时有内分泌效应:诱导肝脏急性期蛋白合成，引起发热和恶病质。
[0005] 比-6:人类化-6基因位于第7号染色体上；比-6分子量在21~30KD之间。主要由单 核巨隧细胞、Th2细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞产生。能够刺激活化B细胞增殖，分泌抗 体;刺激T细胞增殖及CTL活化;刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反应;促进血细胞发 育。
[0006] IL-6可由多种细胞合成，包括活化的T细胞和B细胞、单核一巨隧细胞、内皮细胞、 上皮细胞W及成纤维细胞等。化-6作用的祀细胞很多，包括巨隧细胞、肝细胞、静止的T细 胞、活化的B细胞和浆细胞等;其生物效应也十分复杂。
[0007] 巨隧细胞能产生多种炎症介质参与炎症反应，其中，NO为重要的细胞炎症因子，NO 参与多种生理病理过程，过量NO会促进炎症性疾病的发生与发展，并且还能诱导其他炎症 因子。
[000引因此，寻求一种新的制备方法，从天然植物中分离出新的化合物，W抑制细胞炎症 因子NO的含量，应用于炎症性疾病的治疗，是非常有必要的。
[0009] 千斤拔药材为豆科(Xeguminosae)千斤拔属(Flemingl .Roxb.或Mo曲ania)植物大 叶千斤拔(Mo曲aniamac;ro地ylla(Willd.)O.Kuntze)的干燥根，在我国主要分布于东南部 地区。该植物在中国植物志（1995,41:313)、台湾植物志（1977,3:258)、海南植物志（1965， 2:311)、《中国高等植物图鉴》（1972,2:510)、中国主要植物图说（1955，口口707)和广州植物 志（1956，pp361)中均有收录。千斤拔药材为广西地区的道地药材，史载于《植物名实图考》， 有着广泛的民间用药基础。其性味甘，微涩，平，具有清热除湿等功效，主要用于治疗风湿骨 痛、跌打损伤、慢性肾炎、痛经和白带多等妇科疾病。该药材目前已收载入2005年版《中国药 典》附录。
[0010] 大叶千斤拔已报道的成分主要有黄酬类、酱类、祗类、蔥酿类、挥发油类成分，均具 有一定的药理活性。
[0011] 大叶千斤拔药理活性多样，报道较多的有神经保护作用，抗炎、抗氧化作用，对病 原微生物的驱虫作用、类激素作用、细胞毒作用，抗菌作用W及免疫增强作用、抗疲劳作用。
[0012] 千斤拔目前广泛应用于妇科、风湿搏痛等类型的中成药生产，如妇科千金片、妇科 千金胶囊、金鸡冲剂、金鸡胶囊等，此类中成药主要用于妇科病(痛经、子宫寒冷不孕、子宫 下垂、盆腔炎、乳腺炎、白带多、产后血虚、关节痛、产后腰膝痛、缺乳和乳疮等），虚弱贫血 (妇女贫血，气血虚弱和病后气虚等）。近年来，临床报道较多的是妇科千金片在治疗妇科炎 症方面的作用。
[0013] 目前，在千斤拔的文献中，报道苯丙素类化合物的文献极少，寻找一种新的制备方 法，从天然植物中分离出有效的苯丙素类新化合物，对其进行分离纯化、结构修饰和合成， 开发新药，应用于炎症性疾病的治疗，意义重大。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的在于提供一种从大叶千斤拔的干燥根中分离得到的一种苯丙素类 化合物的制备方法，通过该制备方法提取分离得到的化合物可W抑制细胞炎症因子NO的含 量，进而通过抑制NO途径实现抗炎活性，有益于各种炎症性疾病的治疗，可W将该化合物开 发成新药。
[0015] 具体地，本发明所述苯丙素类化合物的制备方法包括如下步骤：
[0016] SI.取大叶千斤拔的根部为原料，干燥，切块，经乙醇溶液提取，将提取液合并，浓 缩至无醇味，得浸膏备用；
[0017] S2.将步骤Sl中所得浸膏加水溶解，采用大孔吸附树脂柱对其进行洗脱，洗脱剂为 乙醇-水系统，收集前3个柱体积的洗脱液，命名为MM-I，备用；
[0018] S3 .将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相材料ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲 醇-水系统，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6个流分， 分别命名为MM-Il，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15,11-16,备用；
[0019] S4.将步骤S3中收集到的流分MM-12用制备液相分离，流动相为甲醇-水-乙酸系 统，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为匪-121，匪-122，匪-123，匪-124， MM-125 ,MM-126,11-127,备用；
[0020] S5.将步骤S4中收集到的流分MM-124用制备液相纯化，流动相为甲醇-水-乙酸系 统，收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。所述苯丙素类化合物纯度为99.31 %。 所述苯巧素类化合物的结构式化式（I)所示：
[0021]
12 优选地，步骤Sl中，乙醇的浓度为50~80体积％，进一步优选为乙醇浓度为60体 积％。 2 优选地，步骤Sl中，乙醇的提取次数为2~4次，每次提取1~3小时，进一步优选为 乙醇的提取次数为3次，每次2小时。
[0024]优选地，步骤S2中，大孔吸附树脂采用DlOl大孔吸附树脂。
[002引优选地，步骤S2中，乙醇与水的体积比为0:100~15:85。
[00%] 优选地，步骤S3中，甲醇与水的体积比为20:80~30:70，进一步优选为25:75。
[0027] 优选地，步骤S4中，甲醇-水-乙酸的体积比为10:90:0.0 l~35:65:0.0 l，进一步优 选为 15:85:0.01。
[002引优选地，步骤S4中，制备液相色谱柱为YMC，20mm*250mm，流动相流速为5~IOmL/ min，优选为流速5mL/min。
[0029] 优选地，步骤S5中，甲醇-水-乙酸的体积比为15:85:0.0 l。
[0030] 优选地，步骤S5中，制备液相色谱柱为YMC，20mm*250mm，流动相流速为5mL/min。 [0031 ]本发明提供所述制备方法制备得到的苯丙素类化合物。
[0032] W及W所述苯丙素类化合物为原料经化学合成方法制备得到的苯丙素类化合物 ±h rm. O
[0033] 优选地，所述苯丙素类化合物盐为式（I)所示的化合物与无机酸形成的无机酸盐， 或与横酸形成的横酸盐，或与碱金属氨氧化物形成的碱金属盐，或与锭形成的锭盐。
[0034] 优选地，所述无机酸盐为盐酸盐、氨漠酸盐、氨氣酸盐、氨舰酸盐、硫酸盐、硝酸盐、 簇酸盐、憐酸盐或乳酸盐;所述碱金属盐为钟盐、钢盐、巧盐、儀盐或裡盐。
[0035] 本发明的有益效果：
[0036] 本发明为新的苯丙素类化合物及其药学上可接受的盐提供了一种制备方法，首次 从大叶千斤拔的干燥根中分离得到的一种新苯丙素类化合物，制得的化合物可W抑制细胞 炎症因子NO的含量，进而通过抑制NO途径实现抗炎活性，可W用作如宫颈炎、子宫内膜炎、 盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节炎等炎症性疾病的治疗药物。
[0037] 本发明的目的是从传统的中药处方中，通过从妇科千金片及妇科千金胶囊的处方 中，通过溶剂提取、柱层析分离、制备液相分离、纯化制得一种新化合物，并通过实验证实， 其可W应用于炎症性疾病，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节炎等 疾病的治疗。
[0038] 具体地，发明人通过从妇科千金片、妇科千金胶囊的处方中，科学选取大叶千斤拔 的干燥根，通过溶剂提取、柱层析分离、制备液相分离、纯化，得到本发明所述苯丙素类化合 物，然后对该化合物进行细胞试验，测定其对细胞炎症因子NO的抑制程度，实验表明，该化 合物在浓度(4.87-14.624邑/111山范围内对LP巧旭的NO含量升高有明显的抑制作用，并且表 现出明显的剂量依赖关系。
【附图说明】
[0039] 图1为本发明所述苯丙素类化合物的核磁共振氨谱图。
[0040] 图2为本发明所述苯丙素类化合物的核磁共振碳谱图。
[0041 ]图3为本发明所述苯丙素类化合物对细胞活性的影响图。
[0042] 图4为本发明所述苯丙素类化合物对NO的抑制作用图。
[0043] 图5为本发明所述苯丙素类化合物对TNF-a的抑制作用图。
[0044] 图6为本发明所述苯丙素类化合物对IL-10的抑制作用图。
[0045] 图7为本发明所述苯丙素类化合物对IL-6的抑制作用图。
[0046] 图8为本发明所述苯丙素类化合物对0哺勺抑制作用图。
【具体实施方式】
[0047] W下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明 做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试 剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本技术领域常规市购的原 料和设备。
[0048] 本发明的化合物是所述式（I)所示的苯丙素类化合物及该化合物药学上可接受的 盐。该化合物可W采用本发明提供的W大叶千斤拔为原料提取的方法制备得到，也可W根 据本发明提供的结构式结合采用本领域的化学合成等方法制备得到。
[0049] 作为本发明所述苯丙素类化合物的盐，只要是药学上可接受的盐即可，可列举为 与盐酸、氨漠酸、氨氣酸、氨舰酸、硫酸、硝酸、簇酸、憐酸、乳酸等无机酸形成的无机酸盐;与 横酸形成的横酸盐;与钟、钢、巧、儀、裡等碱金属的氨氧化物形成的碱金属盐，与锭形成的 锭盐等。