一种阿魏内酯及其提取纯化的方法
【专利摘要】本发明公开了一种阿魏内酯的提取精制方法。通过研究发现，提取精制工艺为阿魏根茎粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽滤后浓缩滤液，浓缩液依次用石油醚（沸点30-60℃）、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分别萃取3次,每层萃取液合并浓缩制成浸膏。将所得的乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮溶剂系统进行洗脱，体积比为100:11的溶剂系统洗脱得馏分，合并后再经硅胶柱色谱分离，氯仿/丙酮系统进行梯度洗脱，得到阿魏内酯混合物。阿魏内酯粗品用适量甲醇溶解，用开口的ODS反相柱以甲醇：水（60:40）洗脱溶液以30ml/h流速洗脱，所得馏分合并挥干后，用甲醇溶解，经凝胶柱除色素后，即得阿魏内酯。此方法操作简便，仪器设备简单，且所用溶剂污染小、生产成本较低。
【专利说明】
一种阿魏内酯及其提取纯化的方法
技术领域
[0001]本发明属于医药领域，涉及一种从民族药阿魏药材中提取和精制阿魏内酯工艺。
【背景技术】
[0002]阿魏(Ferula)隶属伞形科(Umbelliferae)又称大茴香，因其具有难闻的臭味，有“魔鬼的粪便”之称。世界上约有150种，现主要分布于地中海地区、非洲北部以及中亚及其邻近地区。我国有26种I变种，分布在我国东北、山西、西藏、云南、江苏和新疆等地，其中，产于新疆的有20种，主要分布在伊宁、阜康、托里、塔城、乌恰等地。该属有许多药用种类，有着悠久的使用历史，早在古波斯就已经将阿魏属植物作为药用，由新疆传入中原，并为我国民族所接纳融汇，汉、维、哈萨克、藏、蒙、泰等民族医中都有应用的习惯与历史。其树脂入药，具有消积，杀虫，治疗疟疾，痢疾等功效。《中国药典》收载的是新疆阿魏Ferulasingkiangensis K.M.shen 和阜康阿魏 F.fukangensiaK.M.shen 的树脂。
[0003]研究表明倍半萜、香豆素是阿魏属植物的特征化学成分，已有文献报道从该植物中分离鉴定了 12个倍半萜、香豆素类化合物。对阿魏的研究国内外有大量的报道，近年来由于发现其中具有植物雌激素活性成分和抗癌性物质而倍受人们关注。
[0004]目前提取分离阿魏内酯的方法缺乏相关资料及报道。
【发明内容】
[0005]本发明的第一个目的在于提供一种工艺简单、成本低、效率高、适用于工业化生产的提取分离阿魏内酯的方法。通过从阿魏中提取、柱色谱分离，精致得到阿魏内酯。
[0006]本发明的第一个目的由如下技术方案实施:
一种阿魏内酯的提取和精制工艺，其包括如下步骤(I)提取工序、(2)分离工序和(3)精制工序，即制得成品，其中:
(I)提取工序:将阿魏根茎粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽滤后浓缩滤液，浓缩液依次用石油醚(沸点30-60°C )、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分别萃取3次，每层萃取液合并浓缩制成浸膏。
[0007](2)分离工序:将所得的乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮溶剂系统进行洗脱，体积比为100:11的溶剂系统洗脱得馏分，合并后再经硅胶柱色谱分离，氯仿/丙酮系统进行梯度洗脱，得到阿魏内酯粗品
(3)精制工序:阿魏内酯粗品用适量甲醇溶解，用开口的ODS反相柱以甲醇:水(60:40)洗脱溶液以30ml/h流速洗脱，所得馏分合并挥干后，用甲醇溶解，经凝胶柱除色素后，即得阿魏内酯。
[0008]一种提取纯化阿魏内酯的方法，所述提取方法可以采用回流提取法、超声波提取法、热水提取法、冷浸法或微波采取法的任何一种。
[0009]一种提取纯化阿魏内酯的方法，所述提取方法采用乙醇回流提取法，S卩加入所述阿魏根茎粉末重量10?30倍量的30?95%浓度乙醇，加热回流提取I?6次，每次提取所用时间为I?3小时，趁热抽滤，合并滤液，回收滤液至无醇,水溶液浓缩。
[0010]一种提取纯化阿魏内酯的方法，所述乙醇回流提取法采用加入所述阿魏根茎粉末重量30倍量的70%乙醇，加热回流提取3次，每次提取时间为2小时，趁热过滤，合并滤液，回收滤液至无醇，水溶液浓缩。
[0011]一种提取纯化阿魏内酯的方法，将浓缩液依次用石油醚(沸点30-60°C)、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分别萃取3次，每层萃取液合并浓缩制成浸膏。
[0012]一种提取纯化阿魏内酯的方法，将乙酸乙酯层浸膏用适量甲醇溶解上样，选用石油醚-丙酮溶剂系统(体积比为100:11)在硅胶柱进行洗脱，合并所得馏分，浓缩得到阿魏内酯混合物。
[0013]一种提取纯化阿魏内酯的方法，将阿魏内酯混合物用适量甲醇溶解在ODS反相柱上样，选用甲醇:水(60:40)洗脱溶液以30ml/h的流速洗脱，合并所得馏分合，采用减压蒸馏回收甲醇，得阿魏内酯粗品。
[0014]一种提取纯化阿魏内酯的方法，将阿魏内酯粗品用适量甲醇溶解在凝胶柱上样，选用甲醇以5ml/h的流速洗脱，合并所得馏分合，采用减压蒸馏回收甲醇，得阿魏内酯。
[0015]下面将通过动物药效学实验，说明本发明涉及的阿魏内酯对耐药金黄色葡萄球菌的治疗作用。
[0016](I)药效学研究
阿魏内酯对耐药金黄色葡萄球菌致小鼠死亡的保护作用
取纯系昆明种小鼠20只，随机分成细菌感染对照组、阿魏内酯组，共2组，每组10只，雌雄各半。用含有5%的胃膜素稀释耐药金黄色葡萄球菌为1.0X 109，每只鼠腹腔注射菌液
0.5ml,同时，治疗组按442mg/kg的剂量灌胃给药，12小时后第二次灌胃给药。观察并记录感染后72h小鼠的死亡数，小鼠感染耐药金黄色葡萄球菌后，24小时内动物9只死亡。给药组48小时内未见有小鼠死亡，超过48小时死亡3只，提示阿魏内酯可抑制耐药金黄色葡萄球菌所致小鼠的死亡，实验证明阿魏内酯在体内有抗菌作用。
[0017](2)急性毒性试验结果
选择昆明种体重20?22g清洁级小鼠24只，随机分为4组，每组6只，雌雄各半。分别为阿魏内酯100%、20%和2%3个浓度及对照组。禁食12小时，对各组小鼠按0.5ml/20g(体重)，24小时内分多次灌胃给药。给药后观察试验动物中毒表现和死亡情况，连续观察14天。无一死亡，存活小鼠解剖未发现异常情况。
[0018](3)长期毒性试验研究
挑选大鼠80只，雌雄各半，长期毒性试验分高，中，低三个剂量组和空白对照组(Iml蒸馏水)灌胃，每天给药一次，连续给药90天，给药期间注意观察大鼠的活动、毛色、进食、体重情况，给药90天后停药，进行病理检验，给药高、中、低剂量组与空白对照组比较未发现显著性差异，30天后，重复上述检查，亦未发现毒副作用，表明阿魏内酯毒性较小。
【主权项】
1.一种阿魏内酯的提取和精制工艺，其包括如下步骤(I)提取工序、(2)分离工序和(3)精制工序，即制得成品，其中: (1)提取工序:将阿魏根茎粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽滤后浓缩滤液，浓缩液依次用石油醚(沸点30-60°C )、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分别萃取3次，每层萃取液合并浓缩制成浸膏； (2)分离工序:将所得的乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮溶剂系统进行洗脱，体积比为100:11的溶剂系统洗脱得馏分，合并后再经硅胶柱色谱分离，氯仿/丙酮系统进行梯度洗脱，得到阿魏内酯混合物； (3)精制工序:阿魏内酯粗品用适量甲醇溶解，用开口的ODS反相柱以甲醇:水(60:40)洗脱溶液以30ml/h流速洗脱，所得馏分合并挥干后，用甲醇溶解，经凝胶柱除色素后，即得阿魏内酯。2.根据权利要求1所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:所述提取方法可以采用回流提取法、超声波提取法、热水提取法、冷浸法或微波采取法的任何一种。3.根据权利要求1所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:所述提取方法采用乙醇回流提取法，即加入所述阿魏根茎粉末重量10?30倍量的30?95%浓度乙醇，加热回流提取I?6次，每次提取所用时间为I?3小时，趁热抽滤，合并滤液，回收滤液至无醇，水溶液浓缩。4.根据权利要求3所述的一种提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:所述乙醇回流提取法采用加入所述阿魏根茎粉末重量30倍量的70%乙醇，加热回流提取3次，每次提取时间为2小时，趁热过滤，合并滤液，回收滤液至无醇,水溶液浓缩。5.根据权利要求3所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:将浓缩液依次用石油醚(沸点30-60°C)、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分别萃取3次，每层萃取液合并浓缩制成浸膏。6.根据权利要求1所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:将乙酸乙酯层浸膏用适量甲醇溶解上样，选用石油醚-丙酮溶剂系统(体积比为100:11)在硅胶柱进行洗脱，合并所得馏分，浓缩得到阿魏内酯混合物。7.根据权利要求1所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:将阿魏内酯混合物用适量甲醇溶解在ODS反相柱上样，选用甲醇:水(60:40)洗脱溶液以30ml/h的流速洗脱，合并所得馏分合，采用减压蒸馏回收甲醇，得阿魏内酯粗品。8.根据权利要求1所述的提取纯化阿魏内酯的方法，其特征在于:将阿魏内酯粗品用适量甲醇溶解在凝胶柱上样，选用甲醇以5ml/h的流速洗脱，合并所得馏分合，采用减压蒸馏回收甲醇，得阿魏内酯。9.根据权利要求1?8所述的任一种提取纯化阿魏内酯的方法制备阿魏内酯。
【文档编号】C07D311/16GK105820146SQ201510007764
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年1月8日
【发明人】于航, 胡跃, 施法
【申请人】辽宁医联新药研究所