血糖仪在快速检测环境污染物生物毒性中的应用
【专利摘要】本发明公开血糖仪在快速检测环境污染物生物毒性中的应用，其检测方法包括如下步骤：1)制备微生物菌液；2)将微生物菌液、葡萄糖溶液、培养基和待测样本混合并孵育；3)用血糖仪检测待测样本中葡萄糖的浓度；4)评价待测样本的生物毒性。血糖仪用于样品中葡萄糖浓度检测时具有检测时间短、成本低廉、便于操作等特点。因而血糖仪结合微生物用于样本生物毒性的检测，具有省时，经济，易于操作的特点，且为生物毒性检测的提供了新的途径，同时还为污水和污染土壤的治理方案确定提供依据。
【专利说明】
血糖仪在快速检测环境污染物生物毒性中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及急性生物毒性检测领域，尤其是涉及基于微生物对葡萄糖消耗的程 度，利用血糖仪快速检测环境污染物的生物毒性。
【背景技术】
[0002] 随着环境污染问题的日渐突出，生物毒性检测，尤其是生物毒性的快速检测，其重 要性愈发凸显。传统上用鱼和水蚤来检测生物毒性，但往往响应慢、耗时长、费用高。微生 物繁殖速度快，价格低廉，是检测生物毒性的理想材料。
[0003] 目前利用微生物检测环境污染物生物毒性的方法可分为两大类：比色法和电化学 法。
[0004] 顾名思义，比色法根据色度的深浅判断生物毒性的相对大小，最成功的范例是 Microtox?.和 Toxi-Chromo test?。Microtox'利用的是费希尔弧菌（Vibrio fischeri)。 费希尔弧菌是发光细菌的一种，主要生存在海水环境中，能天然发出荧光。当有毒物质存在 时，其所发出的荧光的强度减弱，因而根据荧光的强弱即可判断出某一物质毒性的相对大 小。Toxi-Chromo_test?_;利用诱导过的大肠杆菌。诱导过的大肠杆菌能表达半乳糖苷 酶，该酶对重金属离子有较高的敏感度，并且能水解特定的底物进而产生颜色。当有毒物质 存在时，0 _半乳糖苷酶被抑制，从而被水解的底物量减少，形成的颜色较浅，根据颜色的深 浅即可判断出某一物质生物毒性的相对大小。尽管MicrotOX?和Toxi-Chromo test?.均 已商业化，但仍然只存在很大的限制：首先，需要专门的分光光度计，成本高，不利于广泛应 用；其次，费希尔弧菌菌种稀有，价格昂贵。大肠杆菌的诱导过程复杂，对操作人员也存在潜 在的安全风险。
[0005] 电化学法主要利用苯醌、铁氰化钾等电子介体。电子介体能参与微生物的呼吸作 用被还原，还原态的电子介体在电极表面氧化产生氧化电流。有毒物质的存在会抑制微生 物的呼吸作用，从而被还原的电子介体量减少，导致最终的氧化电流降低。因此，根据氧化 电流的大小可以判断某一物质生物毒性的相对大小。但电化学方法需要电化学工作站等专 业仪器，价格昂贵。同时，电化学法要求操作人员对电化学知识有一定的了解，并且对电化 学工作站有较高的熟练度。这些都限制了电化学方法的应用和推广。
[0006] 因此，需要提供一种成本低廉，易于操作的检测环境污染物急性生物毒性的方法。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种血糖仪在快速检测环境污染物生物毒性中的应用。
[0008] 优选地，血糖仪为便携式血糖仪，更优选为商业化的便携式血糖仪。
[0009] 血糖仪在检测环境污染物生物毒性中的应用，其检测方法包括如下步骤：
[0010] 1)制备微生物菌液；
[0011] 2)将微生物菌液、葡萄糖溶液、培养基和待测样本混合并孵育；
[0012] 3)用血糖仪检测待测样本中葡萄糖的浓度；
[0013] 4)评价待测样本的生物毒性。
[0014] 所述微生物为革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌或真菌；其中所述革兰氏阴性菌为大 肠杆菌、嗜冷杆菌、亚硝化单胞菌，优选为大肠杆菌；所述革兰氏阳性菌为枯草芽孢杆菌、变 形杆菌、放线菌，优选为枯草芽孢杆菌；所述真菌为酵母菌、白色念珠菌、白色隐形菌，优选 为酵母菌。
[0015] 其中制备微生物菌液的方法包括：
[0016] 1)将微生物接种于培养基中培养至对数生长期；
[0017] 2)收集菌体，获得菌体沉淀；
[0018] 3)洗涤菌体沉淀；
[0019] 4)用分散液分散菌体沉淀。
[0020] 上述方法中，培养微生物的培养基为本领域所公知的适于微生物生长的培养基， 例如大肠杆菌接种的培养基为LB培养基、S0B培养基或S0C培养基等，优选LB培养基；所述 枯草芽孢杆菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基、LBG培养基，优选为牛肉膏蛋白胨培养基； 所述酵母菌的培养基为YH)培养基、YPED培养基、YPEG培养基等，优选YH)培养基。
[0021] 进一步地，培养微生物的条件也是本领域公知的，包括但不限于，大肠杆菌的培养 条件为37°C于LB培养基中培养16h ;枯草芽孢杆菌的培养条件为37°C于牛肉膏蛋白胨培 养基培养24小时；酵母菌的培养条件为30°C于YH)培养基中培养16小时。
[0022] 在上述方法中，优选地，用离心法收集培养的菌体，以获得菌体沉淀。
[0023] 菌体沉淀的洗涤溶液可采用常规的缓冲液，以去除菌体培养中可能影响后续测试 结果的物质。如磷酸缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、HEPEs缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液或氯化钠 溶液。优选地，所述洗涤溶液为〇. 85%的氯化钠溶液、PBS溶液、TBS溶液或TBE溶液。
[0024] 优选地，所述分散液为水溶液、氯化钠溶液或培养基，优选为水溶液。
[0025] 葡萄糖是大部分微生物生长所必需的营养物质。有毒物质的存在会抑制微生物的 生长和繁殖，使得微生物对葡萄糖的消耗量降低。因此，根据葡萄糖消耗量的多少，即可判 断出某一物质毒性的相对大小。血糖仪是目前已大规模生产推广的专门用于人体血液中葡 萄糖含量的便携式设备，能够快速的检测血液中葡萄糖的浓度，因而我们提出利用血糖仪 检测待测样品中的葡萄糖浓度，优选地用商业化的血糖仪检测污染物对菌体的生物毒性。
[0026] 优选地，用抑制率评价待测样本中生物毒性，抑制率的计算公式如下所示：抑制率 (% ) = (Nc-Ne)/NcX100%
[0027] 其中Ne为第一待测样本的葡萄糖浓度，Ne为第二待测样本的葡萄糖浓度。
[0028] 第一待测样本和第二待测样本的孵育时间与孵育温度相同。优选地，检测环境污 染物生物毒性的方法所用的微生物为大肠杆菌或枯草芽孢杆菌时，孵育温度为37°C ;优选 地，检测环境污染物生物毒性的方法所用的微生物为真菌时，孵育温度为30°C。
[0029] 优选地孵育时间为30-90分钟。优选地，微生物为大肠杆菌时，孵育时间为60分 钟；优选地，微生物为枯草芽孢杆菌时，孵育时间为30-90分钟；优选地，微生物为真菌时， 孵育时间为30-90分钟。
[0030] 当第一待测样本和第二待测样本为不同的环境污染物样本时，抑制率表示环境污 染物间生物毒性的相对大小。
[0031] 第一待测样本可为对照样本，所述对照样本是指将微生物菌液、葡萄糖溶液、培养 基和对照溶液混合并孵育，其中对照溶液为水溶液、培养基、氯化钠溶液，优选为水溶液。此 时抑制率表示的是第二待测样本相对于对照样本的生物毒性的大小。
[0032] 另外本方法也可用于检测不同物质的生物毒性，可将待测物质配置成不同浓度 的待测样本，检测不同待测样本的葡萄糖浓度，并计算每个样本的抑制率，绘制葡萄糖 浓度-抑制率的曲线，根据抑制率曲线，可以算出最大半数抑制浓度IC 5。(maximum half inhibition concentration)，即当抑制率为50 %时物质的浓度。IC5。是评价某一物质生物 毒性大小的重要指标。
[0033] 所述环境污染物为有机污染物、无机污染物或二者的混合物；优选地，所述无机污 染物是可溶于水的无机化合物，如重金属盐、无机酸、无机碱等有毒物质；优选地，所述有机 污染物是难溶于水的有机化合物，如苯、苯酚、邻苯基苯酚、二氯苯酚等。
[0034] 另外，本发明还可用于被治理污水的生物毒性的检测，污水中含有多种生物毒性 物质，如重金属、有机污染物等。现在污水的治理包括用水生动物来改善水质，但是当污水 的生物毒性高时，投放水生动物无法存活，不但不能净化污水还会造成经济上的浪费，因而 当污水的生物毒性达到合理的范围时，投放水生动物才能达到进一步改善水质的目的。本 发明的方法能够非常方便快捷的检测污水的生物毒性，为污水治理方案的确定提供支持。
[0035] 不仅如此，本发明还可用于被污染土壤的生物毒性的检测。受污染土壤中含有多 种生物毒性物质，如重金属离子、有机污染物等。目前土壤修复包括植物吸附、微生物修复、 生物联合修复等方法。但这些方法只能在量上告知土壤中污染物的含量修复到了何种程 度，而不能告诉人们土壤修复到不同程度时所对应的毒性。因此，通过土壤的生物毒性，能 进一步指导土壤的修复工作，将土壤的修复程度及其对生物的影响结合起来，为土壤修复 提供更多的参考信息。
[0036] 本发明的有益效果如下：
[0037] 本发明利用了目前已商业化使用的血糖仪对样品中葡萄糖的含量进行检测。血糖 仪用于样品中葡萄糖浓度检测时具有检测时间短、成本低廉、便于操作等特点。因而血糖仪 结合微生物用于样本生物毒性的检测，具有省时，经济，易于操作的特点，且为生物毒性检 测的提供了新的途径，同时还为污水的治理方案确定提供依据。
【附图说明】
[0038] 下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细的说明。
[0039] 图1示出实施例1中基于微生物和商业化便携式血糖仪检测环境污染物生物毒性 的可行性验证。
[0040] 图2示出实施例2中检测不同浓度Cd2+对大肠杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0041] 图3示出实施例3中检测不同浓度As2+对大肠杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0042] 图4示出实施例4中检测不同浓度Pb2+对大肠杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0043] 图5示出实施例5五中检测不同浓度3, 5-二氯苯酚对大肠杆菌生物毒性的抑制 率曲线。
[0044] 图6示出实施例6中检测不同浓度邻苯基苯酚对大肠杆菌生物毒性的抑制率曲 线。
[0045] 图7示出实施例7中检测不同浓度苯酚对大肠杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0046] 图8示出实施例8中检测不同浓度Cd2+对枯草芽孢杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0047] 图9示出实施例9中检测不同浓度Pb2+对枯草芽孢杆菌生物毒性的抑制率曲线。
[0048] 图10示出实施例10中检测不同浓度苯酚对枯草芽孢杆菌生物毒性的抑制率曲 线。
[0049] 图11示出实施例11中检测不同浓度邻苯基苯酚对枯草芽孢杆菌生物毒性的抑制 率曲线。
[0050] 图12示出实施例12中检测不同浓度3, 5-二氯苯酚对酵母菌生物毒性的抑制率 曲线
[0051] 图13示出实施例13中检测不同浓度邻苯基苯酚对酵母菌生物毒性的抑制率曲线
[0052] 图14示出实施例14中检测不同污水样本对大肠杆菌生物毒性的抑制率
[0053] 图15示出实施例15中检测不同土壤样本对大肠杆菌生物毒性的抑制率
【具体实施方式】
[0054] 为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说 明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具 体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
[0055] 实施例1 :大肠杆菌与血糖仪检测Cu2+的生物毒性
[0056] 大肠杆菌（ATCC 25922)在37°C于LB培养基中培养16小时，其中LB培养基的配 置方法如下：取0. 5g牛肉膏、lg蛋白胨和0. 5g氯化钠溶于100mL去离子水中，调节pH至 7. 0-7. 4,于高压蒸汽灭菌中120°C灭菌20min，自然冷却。
[0057] 离心收集大肠杆菌，6000转/分离心6min收集菌体；洗涤收集的大肠杆菌，用 0. 85%氯化钠溶液将菌体重悬进行清洗，再以5000转/分离心5min收集菌体，重复一次 上述的清洗操作；最后将清洗后得到菌体分散于〇. 85%氯化钠溶液中，得到浓度为0D_ = 2. 5的菌液。
[0058] 取5个体积为1. 5ml的离心管，分别编号为1、2、3、4、5。其中1作为对照样本（即 不加任何毒物，但加入与有毒物质相同体积的氯化钠溶液），其余均为测试管。依次向各管 中加入100 y L的LB培养基，10 y L葡萄糖溶液（2% w/V)，80 y L浓度为0D6M= 2. 5大肠杆 菌菌液和10 y L不同浓度的Cu2+溶液。使各离心管中Cu 2+的终浓度依次为0、2、4、6、8mg/ L。将各离心管置于37°C恒温培养箱中60分钟，然后用商业化便携式血糖仪检测各离心管 中葡萄糖的浓度。根据浓度的差异，即可算出不同浓度的Cu 2+对大肠杆菌生长繁殖的抑制 率，进而得知Cu2+生物毒性的相对大小。
[0059] 实施例1的结果显示，随着铜离子浓度的增大，样品中葡萄糖浓度也逐步升高，表 明Cu 2+对大肠杆菌的生长繁殖存在抑制作用，使得其对葡萄糖的消耗量降低，即抑制率在 升高。这也表明基于微生物和商业化便携式血糖仪检测环境污染物的生物毒性是可行的。
[0060] 实施例2 :大肠杆菌与血糖仪检测Cd2+的生物毒性
[0061] 按照实施例1的方法检测Cd2+对大肠杆菌的生物毒性。Cd2+终浓度分别为0、5、10、 15、20、25mg/L时造成的抑制率分别为0、18%、35%、53%、59%、65%，并算得0(1 2+的1(：5。为 14.2mg/L〇
[0062] 实施例3 :大肠杆菌与血糖仪检测As2+的生物毒性
[0063] 按照实施例1的方法检测As2+对大肠杆菌的生物毒性。As 2+终浓度分别为0、1、2、 3、4、5、6、7mg/L 时造成的抑制率分别为 0、10%、15%、30%、40%、50%、60%、83%，并算得 As2+的 1C 5。为 5mg/L。
[0064] 实施例4 :大肠杆菌与血糖仪检测Pb2+的生物毒性
[0065] 按照实施例1的方法检测Pb2+对大肠杆菌的生物毒性。Pb 2+终浓度分别为0、 25、50、75、100、125、150、175mg/L 时造成的抑制率分别为 0、16%，21%、27%、37%、42%、 53%、68%，并算得？132+的1(：5。为14311^/1。
[0066] 实施例5 :大肠杆菌与血糖仪检测3, 5-对氯苯酚的生物毒性
[0067] 按照实施例1的方法检测3, 5-对氯苯酸对大肠杆菌的生物毒性。3, 5-对氯苯酸 终浓度为〇、5、10、15、20mg/L时造成的抑制率分别为0、13. 7%、36.4%、59%、72. 7%，可算 得3, 5-对氯苯酚的IC5。为13mg/L。
[0068] 实施例6 :大肠杆菌与血糖仪检测邻苯基苯酚的生物毒性
[0069] 按照实施例1的方法检测邻苯基苯酸对大肠杆菌的生物毒性。邻苯基苯酸终 浓度分别为0、5、10、15、20、25、30、35、40、45mg/L时造成的抑制率分别为0、5. 9%、12%、 17. 6%、23. 5%、30%、41. 2%、52. 9%、71%、82%，并算得邻苯基苯酚的1(：5。为33.711^/1。
[0070] 实施例7 :大肠杆菌与血糖仪检测苯酚的生物毒性
[0071] 按照实施例1的方法检测苯酚对大肠杆菌的生物毒性。苯酚终浓度分别为0、 10、20、40、60、80、120mg/L 时造成的抑制率分别为 0、4. 2%、16. 7%、33. 3%、41. 7%、50%、 62. 5 %、75 %，并算得苯酚的IC5。为80mg/L。
[0072] 实施例8 :枯草芽孢杆菌与血糖仪检测Cd2+的生物毒性
[0073] 枯草芽孢杆菌（CGMCC 1. 1086)在37°C于牛肉膏蛋白胨培养基中培养24小时， 其中枯草芽孢杆菌培养基的配置方法如下：取lg蛋白胨、〇. 3g牛肉膏和0. 5g氯化钠溶于 100ml去离子水中，调节pH至7. 0-7. 4,于高压蒸汽灭菌中120°C灭菌20min，自然冷却。
[0074] 离心收集枯草芽孢杆菌，6000转/分离心6min收集菌体；洗涤收集的枯草芽孢杆 菌，用PBS溶液将菌体重悬进行清洗，再以5000转/分离心5min收集菌体，重复一次上述 的清洗操作；最后将清洗后得到菌体分散于〇. 85%氯化钠溶液中，得到浓度为0D_= 2. 5 的菌液。
[0075] 检测Cd2+对枯草芽孢杆菌的生物毒性。取7个体积为1. 5mL的离心管，分别编号 为1、2、3、4、5、6、7,其中1作为对照样本（即不加任何毒物，，但加入与有毒物质相同体积的 水），其余均为测试组。依次向各个离心管中加入100 y L的培养液，10 y L葡萄糖溶液（2% W/V)，80 y L浓度为0D_= 2. 5的枯草芽孢杆菌菌液和10 y L不同浓度的Cd 2+溶液。使最 终各离心管中Cd2+的终浓度依次为0、5、10、15、20、25、30mg/L。将各离心管置于37°C恒温 培养箱中60分钟，然后用商业化便携式血糖仪检测各离心管中葡萄糖的浓度，根据浓度的 差异，即可算出不同浓度的Cd 2+对大肠杆菌生长繁殖的抑制率，上述不同的Cd2+算得的抑制 率分别为 〇、9. 3%、10%、14%、16. 3%、18. 6%、21%。
[0076] 实施例9 :枯草芽孢杆菌与血糖仪检测Pb2+的生物毒性
[0077] 按照实施例8的方法检测Pb2+对枯草芽孢杆菌的生物毒性。Pb 2+的终浓度分别 为0、30、60、90、120、150、18011^/1时造成的抑制率分别为0、11.6%、14%、25.6%、34.9%、 48. 9 %、53. 5 %，并算得 Pb2+的 1C 5。为 157mg/L。
[0078] 实施例10 :枯草芽孢杆菌与血糖仪检测苯酚的生物毒性
[0079] 按照实施例8的方法检测苯酚对枯草芽孢杆菌的生物毒性。苯酚的终浓度分别 为0、10、20、40、60、80、100、12011^/1时造成的抑制率分别为0,6.4%、8.5%、12.8%、17%、 19. 1%、20%、21. 3%〇
[0080] 实施例11 :枯草芽孢杆菌与血糖仪检测邻苯基苯酚的生物毒性
[0081] 按照实施例8的方法检测邻苯基苯酚对枯草芽孢杆菌的生物毒性。邻苯基苯酚 的终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60mg/L时造成的抑制率分别为0、10.6%、15%、17%、 19. 1%、21. 3%、23. 4%〇
[0082] 实施例12 :酵母与血糖仪检测3, 5-二氯苯酚的生物毒性
[0083] 酵母（S288C)在30°C于YH)培养基中培养16小时，其中YH)培养基的配置方法 如下：分别将含2%葡萄糖溶液和含1 %酵母提取物溶液于高压蒸汽灭菌锅中120°C灭菌 20min，自然冷却，然后将二者在无菌条件下混合。
[0084] 离心收集酵母，6000转/分离心6min收集菌体；洗涤收集的酵母菌，用TBS溶液 将菌体重悬进行清洗，再以5000转/分离心5min收集菌体，重复一次上述的清洗操作；最 后将清洗后得到菌体分散于〇. 85%氯化钠溶液中，得到浓度为0D_= 2. 5的菌液。
[0085] 检测3, 5-二氯苯酚对酵母菌的生物毒性。取7个体积为1. 5mL的离心管，分别编 号为1、2、3、4、5。其中1作为对照样本（即不加任何毒物，但加入与有毒物质相同体积的 水），其余均为测试管。依次向各个离心管中加入100 yL的培养液，10 yL葡萄糖溶液（2% W/V)，80 y L浓度为0D_= 2. 5的酵母菌菌液和10 y L不同浓度的3, 5-二氯苯酚溶液。使 各离心管中3, 5-二氯苯酸的最终浓度依次为0、5、10、15、20mg/L。将各离心管置于30°C 恒温培养箱中16小时，上述不同3, 5-二氯苯酚的浓度造成的抑制率分别为0、26%、39%、 52 %、78 %，并算得 3, 5-二氯苯酚的 IC5。为 14. 2mg/L。
[0086] 实施例13 :酵母与血糖仪检测邻苯基苯酚的生物毒性
[0087] 按照实施例12的方法检测邻苯基苯酸对酵母菌的生物毒性。邻苯基苯酸的浓度 分别为 〇、10、20、30、40、50、60mg/L 时造成的抑制率分别为 0、17. 4 %、26 %、30 %、39. 1 %、 43. 5 %、52. 1 %，并可算得邻苯基苯酚的IC5。为57. 6mg/L。
[0088] 由上述实施例可见，大肠杆菌、枯草杆菌和酵母可与血糖仪联用来检测重金属和 有机化合物的生物毒性。
[0089] 实施例14 :环境污染物的检测（污水）
[0090] 大肠杆菌的菌液制备如实施例1。
[0091] 从垃圾填埋场、化学实验室无机废液桶、电镀厂分别取得污水10mL。取6个样品 管，分别标记为1、2、3、4，1号为对照管，2-4号管为污水待测样本管，依次向各管中加入 100 y L的LB培养基，10 y L葡萄糖溶液（2% w/V)，80 y L浓度为0D600 = 2. 5的大肠杆菌 菌液，在1号管中加入10 y L蒸馏水，在2-4号管中依次加入10 y L从垃圾填埋场、化学实 验室无机废液桶、电镀厂取得的污水。将各离心管置于37°C恒温培养箱中60分钟，然后用 商业化便携式血糖仪检测各离心管中葡萄糖的浓度。根据浓度的差异，即可算出不同污水 样本对大肠杆菌生长繁殖的抑制率，分别为20%、32%和60%，进而得知不同污水样本的 生物毒性，同时通过对比不同污水样本中葡萄糖浓度，可以比较不同污水样本生物毒性的 尚低。
[0092] 实施例15 :环境污染物的检测
[0093] 大肠杆菌的菌液制备如实施例1。
[0094] 从北京北四环某加油站、北京某试验田、海南某矿区附近分别取得污染土壤 5g(分别编号为样品1、样品2、样品3)，将其分别加入1、2、3号10ml的容量瓶，加入蒸 馏水定容至l〇ml，颠倒混匀以充分溶解土壤中的污染物质；然后将溶液转移至离心管， 12000rpm离心5分钟，将上清转移至新的离心管中，作为污染土壤待测样本。取1、2、3、4个 样品管，依次向各管中加入100 y L的LB培养基，10 y L葡萄糖溶液（2% w/V)，80 y L浓度 为0D600 = 2. 5的大肠杆菌菌液，在1号管中加入10 y L蒸馏水，在2-4号管中依次加入取 自北京北四环某加油站、北京某试验田、海南某矿区附近的污染土壤待测样本l〇yL。将各 离心管置于37°C恒温培养箱中60分钟，然后用商业化便携式血糖仪检测各离心管中葡萄 糖的浓度。根据浓度的差异，即可算出该三种不同污染土壤样本对大肠杆菌生长繁殖的抑 制率，分别为23. 8%、4. 8%、16. 7%，进而得知不同污染土壤样本的生物毒性，同时通过对 比不同土壤样本中葡萄糖浓度，可以比较不同污染土壤样本生物毒性的高低。
[0095] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对 本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可 以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发 明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
【主权项】
1. 血糖仪在快速检测环境污染物生物毒性中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测方法如下： 1) 制备微生物菌液； 2) 将微生物菌液、葡萄糖溶液、培养基和待测样本混合并孵育30-60min ; 3) 用市售的便携式血糖仪检测待测样本中葡萄糖的浓度； 4) 评价待测样本的生物毒性。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述制备微生物菌液的方法包括： 1) 将微生物接种于培养基中培养至对数生长期； 2) 收集菌体，获得菌体沉淀； 3) 洗涤菌体沉淀； 4) 用分散液分散菌体沉淀，制成微生物菌液。4. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述微生物为革兰氏阴性菌、革兰氏阳性 菌或真菌。5. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌、嗜冷杆菌 或亚硝化单胞菌，优选为大肠杆菌。6. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为枯草芽孢杆菌、变形 杆菌或放线菌，优选为枯草芽孢杆菌。7. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述真菌为酵母菌、白色念珠菌或白色隐 形菌，优选为酵母菌。8. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤2)中洗涤菌体沉淀的溶液为0. 85% 的氯化钠溶液、PBS溶液、TBS溶液或TBE溶液。9. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤4)中用抑制率评价待测样本的生物 毒性，所述抑制率的计算公式为抑制率（％ ) = (Nc-Ne)/NcX100% 其中Ne为第一待测样本的葡萄糖浓度，Ne为对第二待测样本的葡萄糖浓度。10. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，于步骤4)中分散液为水溶液、培养基或 氯化钠溶液。
【文档编号】C12R1/125GK105821111SQ201510012584
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年1月9日
【发明人】只金芳, 方德煜, 高冠岳
【申请人】中国科学院理化技术研究所