一种甾体类化合物及其应用

一种甾体类化合物及其应用
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，具体为一种甾体类化合物及其抗肿瘤干细胞活性。本发明提供的一种甾体类化合物，其结构如式I所示：式中各取代基团的定义见说明书。经体外肿瘤干细胞增殖抑制试验，本发明化合物具有抑制肿瘤干细胞增殖活性，因此可用于制备新型抗肿瘤药物。本发明对于新型抗肿瘤药物的发现具有重要的参考价值。
【专利说明】
一种甾体类化合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种从珊瑚及珊瑚共附生真菌中分离得到的具有 抑制肿瘤干细胞增殖活性的留体类化合物。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤是严重威胁人类生命的疾病之一。对于多数恶性肿瘤患者而言，可采用 化疗、放射疗法及生物免疫治疗等方法来杀死大部分肿瘤细胞，但是却无法从根本上治愈 肿瘤。研究表明，恶性肿瘤发生发展及复发的主要原因在于肿瘤干细胞的存在（C T Jordan,M L Guzman,M Noble.Cancer stem cells[J].N Engl J Med 2006,355,1253- 1261.)。肿瘤干细胞通常仅占肿瘤细胞的不足1.5%，但这类细胞具有自我更新、多向分化 及无限增殖的潜能，是肿瘤转移和复发的关键因素。因此，肿瘤干细胞一经发现立即受到强 烈关注（D Bonnet, J E Dick. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell[J].Nat Med 1997，3，730-737.)，抗肿瘤干细胞活性物质研究迅速成为近年来抗肿瘤药物研究最为关注 的热点领域。
[0003] 留体类化合物是广泛存在于生物体组织内的一类重要的天然有机化合物，尤其是 在海洋中的分布广、含量高，随着海洋药物研究的不断深入，多年来已分离鉴定了多种甾体 化合物，多具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒和酶抑制等生物活性。本课题组长期从事海洋天 然活性成分的研究，最近我们从4种珊瑚：肉芝软珊瑚(Sarcophyton subviride)、紫柳珊瑚 (Muriceopsis flavida)、小月柳珊瑚（Menella Kanisa)、侧扁软柳珊瑚（Subergorgia suberosa)中分离鉴定了若干留体化合物，活性测试部分化合物具有抗肿瘤和抗菌活性，但 文献检索未发现这类留体化合物具有抑制肿瘤干细胞增殖活性的报道。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的是提供一种留体类化合物，它可应用于医学上抑制肿瘤干细胞的增 殖活性。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0006] -种留体类化合物，如下述化学通式所示：
[0007]
[0008] 其中，Ri基团为Η或0H或-0 R2基团为Η或Ac
[0009] R3基团为0H或Η或OAc R4基团为0H或-ο
[0010] Rs基团为H或双键 R6基团为Η或双键
[°011 ] R?选自以下结构(a~ο)中的一个：
[0012]
[0013] 本发明的化合物有闭环和开环两种结构，分别为以下式la和式lb:
[0014]
[0015] 本发明的部分优选化合物详见表1。
[0016] 表1
[0017]
[0019]
[0020] 本发明化合物的制备和结构鉴定方法如下：
[0021] 1.制备化合物1~53
[0022] 将经过预处理的珊瑚{肉芝软珊瑚（Sarcophy ton subvir ide )、紫柳珊瑚 (Muriceopsis flavida)、小月柳珊瑚（Menella Kanisa)、侧扁软柳珊瑚（Subergorgia suberosa)}粉碎，用丙酮及甲醇超声提取数次，至提取液基本无色，浓缩后得到粗浸膏。将 粗浸膏分散在等体积水中，用乙醚萃取数次，合并萃取液，减压回收乙醚至干，得乙醚层浸 膏;或乙醚层浸膏再用90 %甲醇-水溶液分散，正己烷萃取数次后，浓缩90 %甲醇-水溶液得 红褐色浸膏。将乙醚层浸膏或90%甲醇-水溶液浸膏用正相硅胶色谱(200~300目）分离，分 别用不同的洗脱剂系统梯度洗脱，通过薄层板监测，根据馏分极性大小收集，将总浸膏合并 成若干个部分。然后每部分用不同条件的洗脱剂进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离、正反 相硅胶柱层析，后经反相制备型HPLC纯化，最后得化合物1~53。
[0023] 2.结构鉴定
[0024] 化合物1:无色油状物；[a]D = -54(c 1.0，Me0H) ;m.p. 260-263.5°C;ESMS(m/z): 437 ·6([Μ+Η] + )，〇27Η48〇4</Η-ΝΜΚ(α)3〇0,400ΜΗζ):4·00(1Η，πι，Η-3)，3.94( lH，dd，lH，dd，J = 11.5,4.8Hz，H-l)，3.42(lH，br s，H-6)，1.12(3H，s，Me-19)，0.92(3H，d，J=6.4Hz，Me-21)， 0.87(3H，d，J = 6.6Hz，Me-26)，0.87(3H，d，J = 6.6Hz，Me-27) ,0.71 (3H，s，Me-18).
[0025] 化合物2:白色无定形粉末；[a]D = -13.2(c 1.0，Me0H);m.p.267-269°C;ESniS(m/ z) :450.4([M+H] + ) ^28115()04^11-^^(0)300,40010?) :δΗ 4.00(lH，m，H-3)，3.94(lH，dd，lH， dd，J=11.5,4.8Hz，H-l)，3.42(lH，br s，H-6)，1.12(3H，s，Me-19)，0.92(3H，d，J = 6.4Hz， Me-21) ,0.87 (3H,d,J = 6.8Hz,Me-28) ,0.80 (3H,d,J = 6.6Hz,Me-26) ,0.80( 3H,d,J = 6.6Hz,Me-27),0.70(3H,s,Me-18).
[0026] 化合物3:无色晶体;m· p · 279-281°C ; 4-匪1?(CD30D, 400MHz): δΗ 4 · 00(1H,m,H-3), 3.94(lH,dd,lH,dd,J=11.5,4.8Hz,H-l),3.42(lH,br s,H-6),1.94(3H,s,-OAc),1.38 (3H,d,J = 7.0Hz,Me-26),1.38(3H,d,J = 7.0Hz,Me-27),1.12(3H,s,Me-19) ,0.94(3H,d,J = 6.8Hz,Me-21),0.88(3H,d ,J = 6.8Hz,Me-28),0.71(3H,s,Me-18).
[0027] 化合物4:无色晶体;m· p · 257-259°C ; 4-匪1?(CD3OD, 400MHz): δΗ 4 · 00(1H,m,H-3), 3.44(lH,br s,H-6), 1.15(3H,s,Me-19), 1.11 (3H,d,J = 5.6,Me-26), 1.11 (3H,d,J = 5.6, Me-27),0.95(3H,d ,J = 6.8,Me-21),0.88(3H,d ,J = 6.8,Me-28),0.71(3H,s,Me-18).
[0028] 化合物5:无色晶体;m· p · 242-244°C ; 4-匪1?(CD3OD, 400MHz): δΗ 4 · 09(1H,m,H-3), 3.51(lH,br s,H-6),2.00(1H,s,-〇Ac),1.38(3H,s,Me-26),1.38(3H,s,Me-26),1.17(3H, s,Me-19),0.91(3H,d ,J = 6.8,Me-21),0.84(3H,d ,J = 6.8Hz,Me-28),0.67(3H,s,Me-18).
[0029] 化合物6:白色固体粉末。HRES頂S(m/z): 427 · 6303( [M+Na] + )，C26H44〇3; [0!「;' = 14 (c0.050,Acetone)；IR(film)vmax：3373,3026,2959,2928,2854,1600,1496,1453,1379, 1302，1260，1040,966，749,699 ;UV(CHCl3)Amax nm(Abs): 278(0 · 4411);々-Μ?和 13C-NMR见 表2。
[0030] 化合物7:白色粉末状固体。HRESMS(m/z):441.6371[(M+Na) + ]，C27H46〇3;[af = -1 (c0.200,Acetone)；IR(film)vmax：3388,3061,3022,2927,2854,1602,1455,1376,1041, 966,748，699;UV(CHCl3)Amax nm(Abs) :232(0.3947),11-^^(40011^,0)300)3:4.03(111,111, H-3)，3.46(lH，brs，H-6)，0.70(3H，s，H-18)，1.16(3H，s，H-19)，0.94(3H，d，J=6.6，H-21)， 1.60(3H，s，H-26)，1.67(3H，s H-27) ,5.08( lH，t，J = 7.0，14.2Hz，H-24);13C-NMR(100MHz， CD30D)S:33.5(t，C-l)，31.6(t，C-2)，68.4(d，C-3)，41.4(t，C-4)，76.9(s，C-5)，76.6(d，C- 6)，35.3(t，C-7)，31.6(d，C-8)，46.6(d，C-9)，39.3(s，C-10)，22.3(t，C-ll)，41.4(t，C- 12)，44.0(s，C-13)，57.4(d，C-14)，25.2(t，C-15)，29.3(t，C-16)，57.6(d，C-17)，12.6(q， C-18)，17.5(q，C-19)，36.8(d，C-20)，19.4(q，C-21)，37.3(t，C-22)，25.8(t，C-23),126.3 (d，C-24)，131.6(s，C-25)，26.2(q，C-26)，18.1(q，C_27)。
[0031] 化合物8:白色粉末。ESI -MS (m/z): 418 · 5 ([ M+H] +)，C27H46O3。h-NMR (400MHz，CD3OD) 5：4.02(lH,m,H-3),3.46(lH,brs,H-6),0.72(3H,s,H-18),1.16(3H,s,H-19),1.00(3H,d,J = 6.6,H-21),0.87(3H,d ,J = 6.6,H-26) ,0.87(3H,d ,J = 6.6 ,H-27), 5.21 (lH,dd ,J = 8.2, 15.2Hz，H-22)，5.28(lH，dd，J = 7.2，15.0Hz，H-23);13C-NMR(100MHz，CD30D)S :33.5(t，C- I) ，31.7(t，C-2)，68.3(d，C-3)，41.5(t，C-4)，76.8(s，C-5)，76.4(d，C-6)，35.8(t，C-7)， 31.4(d,C-8) ,46.5(d,C-9),39.4(s,C-10),21.4(t,C-l1),41.4(t,C-12),44.0(s,C-13), 57.6(d,C-14),24.2(t,C-15),28.3(t,C-16),57.4(d,C-17),12.6(q,C-18),17.3(q,C- 19),40.2(d,C-20),20.6(q,C-21),138.3(d,C-22),126.6(d,C-23),42.l(t,C-24),28.6 (d，C-25)，22.3(q，C-26)，22.4(q，C-27)。
[0032] 化合物9:白色粉末。ESI-MS(m/z):432.3([M+H] + )，C28H48〇3</H-NMR(400MHz，CD3OD) 5：4.02(lH,m,H-3),3.46(lH,brs,H-6),0.71(3H,s,H-18),1.16(3H,s,H-19),0.96(3H,d,J = 6.6,H-21) ,1.02(3H,d,J = 6.8,H-26) ,1.02(3H,d,J = 6.8,H-27) ,4.70(lH,s,H-28), 4.60(lH，s，H-28);13C-Mffi(100MHz，CD3〇D)S:33.5(t，C-l)，31.7(t，C-2)，68.3(d，C-3)， 41.5(t，C-4)，76.8(s，C-5)，76.4(d，C-6)，35.8(t，C-7)，31.4(d，C-8)，46.5(d，C-9)，39.4 (s，C-10)，21.4(t，C-ll)，39.9(t，C-12)，44.0(s，C-13)，57.1(d，C-14)，24.2(t，C-15)， 28.3(t，C-16)，57.1(d，C-17)，12.6(q，C-18)，17.1(q，C-19)，36.4(d，C_20)，18.6(q，C- 21)，35.3(d，C-22)，31.9(d，C-23)，156.6(t，C-24)，34.5(d，C-25)，22.1(q，C-26)，22.3(q， C-27)，117.7(q，C-28)〇
[0033] 化合物 10:白色粉末。ESI-MS(m/z) :432·3([Μ+Η] + )，〇28Η48〇3</Η-匪R(400MHz, CD30D)S:4.02(lH，m，H-3),3.46(lH，brs，H-6)，0.72(3H，s，H-18)，1.16(3H，s，H-19),1.00 (3H，d，J = 6.6，H-21)，0.85(3H，d，J = 7.2，H-26)，0.83(3H，d，J = 7.2，H-27)，0.92(3H，d，J = 6.8Hz,H-28),5.16(lH,dd ,J = 8.2,15.2Hz,H-22), 5.20( lH,dd,J = 7.2,15.3Hz,H-23)；13C-NMR(100MHz，CD30D)S:33.5(t，C-l)，31.7(t，C-2)，68.3(d，C-3)，41.5(t，C-4)，76.8(s, C-5)，76.4(d，C-6)，35.8(t，C-7)，31.4(d，C-8)，46.5(d，C-9)，39.4(s，C-10)，21.4(t，C- II) ，41.4(t，C-12)，44.0(s，C-13)，57.6(d，C-14)，24.2(t，C-15)，28.3(t，C-16)，57.4(d， C-17)，12.6(q，C-18)，17.3(q，C-19)，40.0(d，C-20)，20.9(q，C-21)，135.1(d，C_22)，132.6 (d，C-23)，42.8(t，C-24)，33.0(d，C-25)，20.0(q，C-26)，20.4(q，C-27)，18.1(q，C_28)。
[0034] 化合物11:白色粉末状固体;m· p · 235-237°C (hexane);ESI-MS(m/z): 420 · 4( [M+H ^)^27114803^11-^^(40011^,0)300)3:4.02(111,111,11-3)，3.46(lH，brs，H-6)，0.72(3H，s，H- 18)，1.16(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J = 6.6，H-21)，0.87(3H，d，J = 6.6，H-26)，0.87(3H，d，J = 6.6，H-27);13C-NMR(100MHz，CD30D)S :33.5(t，C-l)，31.8(t，C-2)，68.3(d，C-3)，41.7(t， C-4)，76.6(s，C-5)，76.5(d，C-6)，35.4(t，C-7)，31.6(d，C-8)，46.4(d，C-9)，39.3(s，C- 10)，22.1(t，C-ll)，41.1(t，C-12)，43.7(s，C-13)，57.4(d，C-14)，25.2(t，C-15)，29.3(t， C-16)，57.3(d，C-17)，12.6(q，C_18)，17.4(q，C_19)，37.2(d，C_20)，19.4(q，C_21),36.0 (t，C-22)，24.0(t，C-23)，41.0(t，C-24)，30.6(d，C-25)，23.0(q，C-26)，23.2(q，C-27)。
[0035] 化合物 12:白色粉末状固体;m.p.234-236°C(Me0H) ;ESI-MS(m/z) :416.3([M+H ] + )，C27H44〇3</H-NMR(600MHz，CDCl3)S:4.10(lH，m，H-3)，3.64(lH，brs，H-6)，5.37(lH，brs， H-7),5.24(lH,dd ,J = 8.4,15.0Hz,H-22), 5.31( lH,dd,J = 6.6,14.0Hz,H-23),0.62(3H,s, H-18) ,1.10(3H,s,H-19) ,1.04(3H,d,J = 6.6,H-21),0.89(3H,d,J = 7.2,H-26),0.88(3H, d，J = 6.6，H-27);13C-NMR(125MHz，CDCl3)S :31.0(t，C-l)，32.9(t，C-2)，67.7(d，C-3)，39.4 (t，C-4)，73.6(s，C-5)，76.0(d，C-6)，117.6(d，C-7)，143.9(s，C-8)，43.4(d，C-9)，37.1(s， C-10)，22.0(t，C-ll)，39.3(t，C-12)，43.9(s，C-13)，54.7(d，C-14)，22.9(t，C-15),27.7 (t，C_16)，56.0(d，C_17)，12.0(q，C_18)，18.8(q，C_19)，39.7(d，C_20)，20.6(q，C_21)， 137.7(d，C-22)，126.6(d，C-23)，41.8(t，C-24)，28.5(d，C-25)，22.3(q，C-26)，22.3(q，C- 27)。
[0036] 化合物 13:白色粉末状固体;πι·ρ·244-246Γ(Μθ〇Η);Ε5Ι-Μ5(πι/ζ):431·6([Μ+Η ] + )，C28H46〇3</H-NMR(600MHz，CDCl3)S:4.10(lH，m，H-3)，3.64(lH，brs，H-6)，5.37(lH，brs， H-7)，4.67(lH，s，H-22)，4.73(lH，s，H-23)，0.60(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-19)，0.98(3H， d ,J = 6.2,H-21),1.036(3H,d ,J = 7.2,H-26),1.042(3H,d ,J = 7.2,H-27)；13C-NMR(125MHz, CDCl3)S:31.0(t，C-l)，32.9(t，C-2)，67.7(d，C-3)，39.4(t，C-4)，76.0(s，C-5)，73.5(d，C- 6)，117.6(d，C-7)，143.9(s，C-8)，43.4(d，C-9)，37.1(s，C-10)，22.0(t，C-ll)，39.3(t，C- 12)，43.9(s，C-13)，54.7(d，C-14)，22.9(t，C-15)，27.7(t，C-16)，56.0(d，C-17)，12.0(q， C-18)，18.8(q，C-19)，36.1(d，C-20)，18.8(q，C-21)，34.5(t，C-22)，30.8(t，C-23),156.6 (s，C-24)，33.8(d，C-25)，21.8(q，C-26)，21.8(q，C-27)，106.0(t，C_28)。
[0037] 化合物 14:白色粉末状固体;πκρ·227-22%~(Μθ〇Η) ;ESI-MS(m/z) :416.3([M+H ]+)，C27H46O3。匪R(600MHz，CDC13: CD30D 1:1) δ : 4 · 00 (1H，m，H-3)，3 · 57 (1H，brs，H-6)， 5.30(lH，brs，H-7)，0.62(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，0.95(3H，d，J=6.6，H-21)，0.873 (3H，d，J = 6.6，H-26)，0.877(3H，d，J = 6.6，H-27);13C-NMR(125MHz，CDCl3)S:31.0(t，C-l)， 32.9(t，C-2)，67.7(d，C-3)，39.4(t，C-4)，73.6(s，C-5)，76.0(d，C-6)，117.6(d，C-7)， 143.9(s，C-8)，43.4(d，C-9)，37.1(s，C-10)，22.0(t，C-ll)，39.3(t，C-12)，43.9(s，C-13)， 54.7(d，C-14)，22.9(t，C-15)，27.7(t，C-16)，56.0(d，C-17)，12.0(q，C-18)，18.8(q，C- 19)，35.2(d，C-20)，18.6(q，C-21)，36.0(t，C-22)，23.8(t，C-23)，39.4(t，C-24)，28.1(d， C-25)，22.5(q，C-26)，22.8(q，C_27)。
[0038] 化合物 15:白色粉末状固体;πκρ·215-217Γ(Μθ〇Η) ;ESI-MS(m/z) :403.3([M+H ] + )，C26H42〇3</H-NMR(600MHz，CDCl3)S:4.10(lH，m，H-3)，3.64(lH，brs，H-6)，5.37(lH，brs， H-7),5.19(lH,dd ,J = 8.4,15.6Hz,H-22), 5.29( lH,dd,J = 8.4,15.0Hz,H-23),0.60(3H,s, H-18) ,1.10(3H,s,H-19) ,1.03(3H,d,J = 6.6,H-21),0.96(3H,d,J = 6.6,H-26),0.95(3H, d，J = 7.2，H-27);13C-NMR(125MHz，CDCl3)S :33.6(t，C-l)，30.9(t，C-2)，67.7(d，C-3)，39.5 (t，C-4)，76.6(s，C-5)，73.6(d，C-6)，117.6(d，C-7)，145.5(s，C-8)，43.5(d，C-9)，37.2(s， C-10)，22.0(t，C-ll)，39.4(t，C-12)，43.9(s，C-13)，54.7(d，C-14)，22.9(t，C-15),27.7 (t，C_16)，56.l(d，C_17)，12.1(q，C_18)，18.9(q，C_19)，39.9(d，C_20)，21.6(q，C_21)， 135.5(d，C-22)，131.8(d，C-23)，41.5(d，C-25)，20.6(q，C-26)，21.3(q，C-27)。
[0039] 化合物 16 :白色粉末状固体;m· p · 246-248°C (MeOH); ESI-MS(m/z): 433 · 4([M+H ] + )，C28H48〇3</H-NMR(600MHz，CDCl3)S:4.10(lH，m，H-3)，3.64(lH，brs，H-6)，5.37(lH，brs， H-7)，0.60(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-19)，0.94(3H，d，J = 6.6，H-21)，0.80(3H，d，J = 7.2， H-26)，0.82(3H，d，J = 6.6，H-27)，0= 33.6(t，C-l)，30.9(t，C-2)，67.7(d，C-3)，39.5(t，C-4)，76.6(s，C-5)，73.6(d，C-6)，117.6 (d，C-7)，145.5(s，C-8)，43.5(d，C-9)，37.2(s，C-10)，22.0(t，C-ll)，39.4(t，C-12),43.9 (s,C-13),54.7(d,C-14),22.9(t,C-15),27.7(t,C-16),56.1(d,C-17),12.l(q,C-18), 18.9(q，C-19)，36.5(d，C-20)，18.9(q，C-21)，33.5(t，C-22)，31.5(t，C-23)，40.5(d，C- 24)，31.1(d，C-25)，18.4(q，C-26)，20.8(q，C-27)，17.6(q，C_28)。
[0040]化合物17:白的固体粉末;!11^3頂3(111/2):469.3297([]\?^] + )，(：28!146〇4;[0^=-8 (c0.275,Acetone)；IR(film)vmax：3454,2953,2941,2867,1716,1599,1496,1452,1382, 1367,1281,1161,1037,968,699;UV(CHCl3)Amax nm(Abs) :257(0 表30
[0041 ]化合物 18:白色固体粉末;HRES頂S (m/z): 483 · 2692 ([M+Na ] +), C29H48O4; [a]f =十6 (c0.035,Acetone)；IR(film)vmax：3369,2956,2927,1736,1664,1599,1458,1378,1260, 1043,968,699;UV(CHCh)λ· nm(Abs): 240(0 · 8793);h-NMR和 13C-NMR见表3。
[0042] 化合物 19:白色固体粉末。ESI -MS (m/z): 463 · 7 ([ M+H] +)，C29H5QO4。h-NMR (400MHz , CDCl3)S:5.14(lH，m，H-3)，3.53(lH，brs，H-6)，0.68(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19),0.90 (3H，d，J = 6.5，H-21)，0.85(3H，d，J = 6.6，H-26)，0.85(3H，d，J = 6.6，H-27)，2.02(3H，s，H- 29);13C-MMR(100MHz，CDCl3)S:34.7(t，C-l)，32.1(t，C-2)，71.1(d，C-3)，37.0(t，C-4)， 75.7(s，C-5)，76.2(d，C-6)，26.7(t，C-7)，30.2(d，C-8)，45.6(d，C-9)，38.4(s，C-10)，21.1 (t，C-ll)，39.9(t，C-12)，42.8(s，C-13)，55.8(d，C-14),24.1(t，C-15)，28.2(t，C-16)， 56.2(d，C-17)，12.1(q，C-18)，16.7(q，C-19)，35.8(d，C-20)，18.7(q，C_21)，36.1(t，C- 22)，23.9(t，C-23)，39.5(d，C-24)，28.0(d，C-25)，22.6(q，C-26)，22.8(q，C-27)，170.9(s, C-28),21.4(q,C-29)〇
[0043] 化合物20:白色固体粉末；HRESIMS(m/z): 455 · 3501 ([M+Na] + ); C28H48O3; [f4° = 0 (c0.040,Acetone)；IR(film)vmax：3374,3026,2929,2867,1600,1496,1454,1379,1262, 1078，1032，754，699;UV(CHCh)λ· nm(Abs): 337(0 ·4653);h-NMR和 13C-NMR见表3。
[0044] 化合物21:白色固体粉末。ESI -MS (m/z): 435 · 3 ([M+H] +)，C28H5〇〇3。^-NMR (400MHz， CDCl3)S:3.82(lH，m，H-3)，3.89(lH，brs，H-6)，0.68(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19),0.90 (3H，d，J = 6.5，H-21)，0.86(3H，d，J = 6.6，H-26)，0.85(3H，d，J = 6.6，H-27)，3.15(3H，s，H- 29) ;13C-匪R(100MHz，CDC13)S:34.4(t，C-l),31.2(t，C-2)，67.7(d，C-3),33.5(t，C-4)， 78.9(s，C-5)，70.1(d，C-6)，32.2(t，C-7)，30.2(d，C-8)，44.7(d，C-9)，39.4(s，C-10)，21.1 (t，C-ll)，39.9(t，C-12)，42.8(s，C-13)，55.9(d，C-14),24.1(t，C-15)，28.3(t，C-16)， 56.3(d，C-17)，12.2(q，C-18)，17.7(q，C-19)，35.8(d，C-20)，18.7(q，C_21)，36.2(t，C- 22)，23.9(t，C-23)，39.5(d，C-24)，28.0(d，C-25)，22.6(q，C-26)，22.8(q，C-27)，48.1。
[0045] 化合物22:白色固体粉末。!11^5頂5(111/2):443.2857([]\?^1] + )，〇261144〇4;[<^=-5 (c0.085,Acetone)；IR(film)vmax：3316,2953,2926,2851,1600,1496,1455,1379,1212, 1098,1040,1009,960;UV(CHCl3)Amax nm(Abs) :278(0.1204) JH-NMR和 13C-NMR见表2。
[0046] 化合物23:白色固体粉末。ES頂S(m/z) :435.4([M+H] + )，C27H46〇4</H-NMR(400MHz， CD30D)5：4.03(lH,m,H-3),3.44(lH,brs,H-6),3.95(lH,dd,J=4.9,11.5Hz,H-l),5.20 (lH,dd ,J = 8.1,15.4Hz, H-22) ,5.27( lH,dd,J = 6.5,13.5Hz, H-23) ,0.72(3H, s ,H-18), 1.13(3H,s,H-19),1.00(3H,d,J = 7.2,H-21) ,0.87(3H,d,J = 6.6,H-26) ,0.87(3H,d,J = 6.6，H-27)</3C-NMR(100MHz，CD3〇D)S:74.3(d，C-l)，43.1(t，C-2)，65.9(d，C-3)，41.5(t，C- 4)，77.4(s，C-5)，77.0(d，C-6)，35.1(t，C-7)，35.1(d，C-8)，47.3(d，C-9)，44.8(s，C-10)， 25.5(t，C-ll)，41.6(t，C-12)，42.4(s，C-13)，57.6(d，C-14)，24.9(t，C-15)，29.7(t，C- 16)，57.6(d，C-17)，12.7(q，C-18)，10.0(q，C-19)，41.8(d，C-20)，21.3(q，C_21)，127.3(d， C-22)，139.5(d，C-23)，43.2(t，C-24)，25.7(d，C-25)，19.9(q，C-26)，19.9(q，C-27)。
[0047] 化合物24:白色固体粉末。ES頂S(m/z) :435.4([M+H] + )，C28H5〇〇4</H-NMR(400MHz， CD30D)S:4.03(lH，m，H-3)，3.44(lH，brs，H-6),3.95(lH，dd，J=4.9,11.5Hz，H-l),0.72 (3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-19)，0.93(3H，d，J = 6.6，H-21)，0.87(3H，d，J = 6.6，H-28)， 0.80(3H，d，J = 6.6，H-26)，0.82(3!1，(1，了 = 6.6，!1-26)。13(：-匪1?(1001抱，0)3〇0)3:74.3((1，(：- 1),41.6(t，C-2),66.1(d，C-3),42.5(t，C-4)，77.8(s，C-5),77.1(d，C-6),35.3(t，C-7)， 32.6(d，C-8)，47.4(d，C-9)，44.9(s，C-10)，25.1(t，C-ll)，42.1(t，C-12)，43.4(s，C-13), 57.6(d,C-14),25.6(t,C-15),29.2(t,C-16),57.6(d,C-17),12.6(q,C-18),10.2(q,C- 19),37.9(d,C-20),19.4(q,C-21),35.0(t,C-22),31.7(t,C-23),40.5(d,C-24),32.7(d, C-25),20.6(q,C-26),18.3(q,C-27),16.1(q,C-28)〇
[0048] 化合物25:白色无定形状粉末;m.p.205-207°C;l<'4:;' = 〇(c 0.15，Me0H);IR(film) vmax3381，2925，2854，1459，1376，966cm-1; h-MR和 13C-NMR数据见表4 ; HRESIMS m/ z485.3032[M+Cl] - (calcd for C27H46O5CI，485.3034)。
[0049] 化合物26:白色无定形状粉末;1114.235-237°(：;[?;拉=-11.3(c 0.35，Me0H);IR (film)vmax3307，2924，2852，1459，1376，1005cm-1;h-NMR和 13C-NMR数据见表4;HRESIMS m/ z433.3319[M-H] -(calcd for C27H45〇4,433.3318)。
[0050] 化合物28:1!1-匪1?(〇)(：13,4001!^):3[13.97(1!1，111，!1-3)，2.79(1!1，^=12.5抱，!1- 7) ,2.15(lH,dd,J=12.5,4.6Hz,H-7),2.03(1H,ον,H-12),1.87(1H,ον,H-4),1.86(1H,ον, H-2),1.84(lH,m,H-16),1.82(lH,ov,H-9),1.80(lH,ov,H-4),1.70(2H,ov,H-8,H-l),1.54 (lH,ov,H-l),1.50(lH,m,H-15),1.51(1Η,ον,Η-25),1.45(2H,ov,H-ll,H-2),1.35(lH,m, H-20),1.34(lH,m,H-22),1.31(lH,m,H-23),1.30(lH,ov,H-14),1.28(lH,m,H-ll),1.25 (lH,m,H-16),l.23(ΙΗ,ον,H-12),1.12(2H,ov,H-17,H-23),1.06(2H,m,H-24),l.02(lH,m, H-15),1.01(lH,m,H-22),0.90(3H,d,6.6,H3-21),0.87(3H,d,6.6,H3-26),0.86(3H,d,6.6, H3-27)，0.81(3H，s，H3-19)，0.64(3H，s，H3-18)</ 3C-NMR(CDCl3，125MHz):Sc 212.2(C,C-6), 80.9(C,C-5),67.3(CH,C-3),56.4(CH,C-14),56.2(CH,C-17),44.6(CH,C-9),43.2(C,C- 13),42.5(C,C-10),41.8(CH,C-7),39.6(CH2,C-24),39.5(CH2,C-12),37.3(CH,C-8),36.5 (CH2,C-4),36.1(CH,C-22),35.7(CH,C-20),30.5(CH2,C-2),29.8(CH2,C-1),28.0(CH,C- 25),28.1(CH2,C-16) ,23.9(CH2,C-15),23.9(CH,C-23),22.8(CH3,C-26) ,22.6(CH3,C-27), 21.5(CH2，C-11)，18.7(CH3，C-21)，14.1(CH3，C-19)，12.0(CH 3，C-18)。
[0051] 化合物29:1H-NMR(CDC13,400MHz):S h 5.27(lH，ddd，J=15.2,7.0,6.9Hz，H-23)， 5.20(lH,dd,J=15.2,8.2Hz,H-22),3.97(lH,m,H-3),2.70(lH,t,J=12.5Hz,H-7),2.13 (lH,dd,J=12.5,4.6Hz,H-7),2.02(lH,m,H-20),1.99(ΙΗ,ον,H-12),1.88(ΙΗ,ον,H-4), l. 86(lH,ov,H-2),1.84(lH,ov,H-9),1.83(2H,m,H-24),1.80(lH,ov,H-4),1.71(lH,ov,H- 8) ,1.70(lH,ov,H-l),1.68(lH,m,H-16),1.56(lH,ov,H-25),1.54(lH,ov,H-l),1.47(lH, m, H-ll),1.45(lH,ov,H-2),1.48(lH,m,H-15),1.29(lH,ov,H-14),1.28(lH,m,H-ll),1.25 (lH,m,H-16),1.23(lH,ov,H-12),1.17(lH,ov,H-17),1.02(lH,m,H-15),1.00(3H,d,6.6, H3-21),0.88(3H,d,6.6,H3-26),0.86(3H,d,6.6,H3-27),0.81(3H,s,H3-19),0.66(3H,s,H3- 18)。130匪以0)(：13，1251泡）：3。211.9(C，C-6) ,137.8(CH，C-22) ,126.5(CH，C-23) ,80.9 (C，C-5)，67.3(CH，C-3)，56.5(CH，C-14)，55.9(CH，C-17)，44.6(CH，C-9)，43.1(C，C-13)， 42.5(C，C-10)，42.0(CH2，C-24)，41.8(CH，C-7)，40.1(CH，C-20)，39.5(CH2，C-12)，37.3(CH， C-8),36.5(CH2,C-4),30.4(CH2,C-2),29.8(CH2,C-1) ,28.6(CH,C-25),28.5(CH2,C-16), 23.9(CH2,C-15),22.3(CH3,C-26),22.3(CH3,C-27),21.5(CH2,C-11),20.8(CH3,C-21),14.1 (CH3，C-19)，12.2(CH3，C-18)。
[0052] 化合物30:白色无定形状粉末；1114.248-2501:+^ =-7.3(c 0.21，Me0H);IR (film) vmax3308，2923，2852，1698，1459，1376，1068cm-1; h-NMR 和 13C-NMR 数据见表 5 ; HRES頂S m/z429.3372[M-H] -(calcd for C28H45〇3,429.3369)〇
[0053] 化合物31:白色无定形状粉末;m.p .218-2201^(:0^ =-24.S(c 0.20，MeOH);IR (fi lm) vmax 3305，2953，2852，1708，1463，1381，963cm-1; 匪R 和 13C-匪R数据见表 5 ; HRES頂S m/z 401·3058[Μ-Η] -(calcd for C26H4i〇3,401.3056)〇
[0054] 化合物32:白色无定形状粉末；!11.?.241-243°(：;[?哲=-8,3((30.08肩60!1) ;11? (fi lm) vmax3315,2930,2854,1712,1459,1371,963cm-1; h-NMR 和 13C-NMR 数据见表 5; HRES頂 S m/z429.3373[M-H] - (calcd for C28H45O3,429.3369)。
[0055] 化合物33:白色无定形状粉末;1114.237-2391^1/??° =-42.5(c 0.15，MeOH);IR (film) vmax 3307，2926，2854，1698，1458，1370，970cm-1; 匪R 和 13C-匪R数据见表 5 ; HRES頂S m/z 429·3366[Μ-Η] -(calcd for C28H45〇3,429.3369)〇
[0056] 化合物34:白色无定形状粉末；m.p.l90-192°C; [a]? =-5,1 (c 0.15，MeOH);IR (fi lm)vmax3371，2931，2868，1699，1467，1381cm-1; h-NMR和 13C-NMR数据见表4 ;HRESIMS m/ z417.3366[M-H] - (calcd for C27H45O3,417.3369)。
[0057] 化合物36:白色无定形状粉末;m.p.235-237°C =-29.0((: 0.20，Me0H);IR (film)vmax 3390，2927，2853，1698，1463，1377，1122，964cm-1;h-NMR和 13C-NMR数据见表6; HRES頂S m/z 431·3163[Μ-Η] -(calcd for C27H43〇4,431.3161)〇
[0058] 化合物37:白色无定形状粉末;m.p.l92-194°C;[?]i? =-2s)4(c 0.12，Me0H);IR (film)vmax 3377，2926，2854，1699，1463，1376cm-1;^-NMR和 13C-NMR数据见表6;HRESmS m/ z431.3158[M-H] -(calcd for C27H43〇4,431.3161)。
[0059] 化合物38:白色无定形状粉末;!11.?.225-227°(：;[(4<)=-23.8((30.09，]\^0!1) ;11? (film)vmax 3400，2929，2870，1698，1465，1379cm-1;^-NMR和 13C-NMR数据见表6;HRESmS m/ z445.3315[M-H] -(calcd for C28H45〇4,445.3318)。
[0060] 化合物 39:白色无定形状粉末;m.p.237-239°C;卜4: =-22.2(c 0.13，Me0H);IR (film) vmax 3390，2926，2853，1698，1456，1378，962cm-1; 匪R 和 13C-匪R数据见表 6 ; HRES頂S m/z 417·3007[Μ-Η] -(calcd for C26H4i〇4,417.3005)〇
[0061 ]化合物 41:白色无定形状粉末;m.pJiMjOerU;1 =+31.1(c 0.18，Me0H);IR (film) vmax 3365，2924，2851，1698，1456，1382，965cm-1; 匪R 和 13C-匪R数据见表 7 ; HRES頂S m/z 431·3163[Μ-Η] -(calcd for C27H43〇4,431.3161)〇
[0062]化合物42:白色无定形状粉末;m.p.l92-194°C;[?];7 =+35.9(c 0.11，Me0H);IR (film)vmax 3334，2925，2853，1690，1466，1377cm-1;^-NMR和 13C-NMR数据见表7;HRESmS m/ z431.3159[M-H] -(calcd for C27H43〇4,431.3161)。
[0063] 化合物43:白色无定形状粉末；m.p .197-1991^(^?° =+59.6 (c 0.12，MeOH);IR (film)vmax 3305，2923，2850，1689，1464，1378cm-1;^-NMR和 13C-NMR数据见表7;HRESmS m/ z445.3321[M-H] -(calcd for C28H45〇4,445.3318)〇
[0064] 化合物 44:白色针状结晶，[?];;' =+10.75 °(c OJUQfeOiO^H-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.54(1H,s,H-7) ,4.24(2H,m,H2-l 1) ,4.17( lH,dd ,J= 10.0,1.8Hz ,H-6), 3.45( ΙΗ,ι?,Η- 3) ,3.25(lH,ov,H-14),2.23(lH,br d,J=11.6Hz,H-4),1.96(3H,s,-〇Ac),0.96(3H,d,J= 6.8Hz,CH3-21),1.09(3H,s,CH3-19),0.66(3H,s,CH3-18),0.85(3H,s,CH3-27) ,0.84(3H,s, CH3-26)〇
[0065] 化合物45:白色针状结晶，『《]?:' =+30.75〇(c 0.18,OfeOiOc/H-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.53(lH,d ,J=1.8Hz,H-7), 4.18( lH,dd,J = 9.8,1.8Hz,H-6) ,3.69, (2H,m,H2-ll) ,3.45 (lH,m,H-3),3.25(lH,m,H-14),2.22(lH,br d,J=12.5Hz,H-4),2.05(lH,tJ = 9.8Hz,H- 17) ,1.27(3H,s,CH3-21),1.10(3H,s,CH3-19) ,0.84(3H, s ,CH3-18) ,0.86(3H, d ,J = 6.6Hz , CH3-27)，0· 85(3H，d，J = 6.6Hz，CH3-26); 13C-NMR(100MHz，CDCl3)S :206.2(C，C-9) ,149.9 (CH，C-7)，136.9(C，C-8)，76.3(C，C-20)，70.1(CH，C-3)，69.7(CH，C-6)，59.1(CH2，C-11)， 53.1(CH，C-17)，47.3(CH，C-5)，47.3(C，C-13)，43.5(CH，C-14)，42.1(C，C-10)，40.9(CH2， C-22)，40.0(CH2，C-12)，40.0(CH2，C-24)，33.2(CH2，C-4)，31.3(CH2，C-l)，30.7(CH2，C-2)， 30.5(CH，C-25)，27.5(CH2，C-15)，26.6(CH3，C-21)，23.9(CH2，C-16)，22.5(CH2，C-23)，20.0 (CH3，C-27)，19.7(CH3，C-26)，19.6(CH3，C-18)，16.5(CH3，C-19)。
[0066] 化合物 46:白色针状结晶，[etf =+20,12°(c OjLOfeOHVH-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.59(lH,s,H-7),4.20(lH,dd,J=10.0,1.8Hz,H-6),3.74(lH,m,H2-ll),3.60(lH,m,H2- ll),3.48(lH,m,H-3),3.27(lH,ov,H-14),2.27(lH,br d,J=11.6Hz,H-4),1.01(3H,d,J= 6.8Hz,CH3-21) ,1.15(3H,s,CH3-19),0.72(3H,s,CH3-18) ,0.89(3H,d ,J = 6.5Hz ,CH3-27), 0.89(3H，d，J = 6.5Hz，CH3-26)。
[0067] 化合物 47:白色针状结晶，[?]?; =4ll_24u(c OJT^HsOiO^H-NMRHOOMHz^DsOD) S:6.58(lH，s，H-7)，4.28(lH，dd，J=9.9，1.8Hz，H-6)，3.88(lH，m，H-ll)，3.67(lH，m，H- ll)，3.63(lH，m，H-3)，3.43(lH，t，J = 10.1，9.6Hz，H-14)，2.31(lH，br d，J=11.0Hz，H-4)， 1.14(3H,s,CH3-19),0.96(3H,d,J = 6.8Hz,CH3-21) ,0.86(3H,d,J = 7.0Hz,CH3-28) ,0.83 (3H，d，J = 6.6Hz，CH3-27)，0.82(3H，d，J = 6.6Hz，CH3-26)，0.64(3H，s，CH3-18)。
[0068] 化合物 48:白色针状结晶，[?]i,5 =+30.18°(c Ο.ΤΤ,α^Ο?Ο^Η-ΝΜΚαΟΟΜΗζ,α^ΟΟ) 5：6.54(lH,d ,J=1.7Hz,H-7),5.32(2H,m,H-22,H-23),4.16(lH,dd ,J = 9.8,1.8Hz,H-6), 3.71(lH,m,H-ll),3.59(lH,m,H-ll),3.45(lH,m,H-3),3.25(lH,ov,H-14),2.23(lH,ov,H- 4) ,1. 11(3H,s,CH3-19) ,1.04(3H,d,J = 6.8Hz,CH3-21) ,0.85(3H,s,CH3-27) ,0.85(3H,s, CH3-26), 0 · 69 (3H, s , CH3-18); 13C-NMR (100MHz , CDC13) δ: 206 · 2 (C, C-9), 149 · 4 (CH, C-7)， 138.l(CH，C-22)，137.3(C，C-8)，128.6(CH，C-23)，70.8(CH，C-3)，69.8(CH，C-6),59.3 (CH2，C-11)，52.1(CH2，C-17)，44.0(CH2，C-24)，49.9(CH，C-5)，47.2(C，C-13) ,46.1 (C，C- 10),43.2(CH,C-14),42.4(CH2,C-12),39.9(CH,C-20),33.7(CH 2,C-4),33.2(CH2,C-1), 31.3(CH2，C-2)，29.8(CH，C-25),28.1(CH2，C-15)，27.0(CH 2，C-16)，22.7(CH3，C-27),22.7 (CH3，C-26)，22.0(CH3，C-21)，18.0(CH3，C-18)，16.5(CH3，C-19)。
[0069] 化合物49:白色针状结晶，[?]?; =+42.11°(c 0.32,0130!〇。匪1?数据见表8。
[0070] 化合物50:白色针状结晶，[?]f =+23.44°(c O.ee^HsOiOc/H-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.55(lH,d,J = 5.8,1.8Hz,H-7),5.24(2H,m,H-22,H-23),4.17(lH,br d,J = 9.9Hz,H- 6),3.72(lH,m,H-ll),3.60(lH,m,H-ll),3.45(lH,m,H-3),3.25(lH,ov,H-14),2.23(lH,br d,J=12.8Hz,H-4) ,1.11 (3H,s,CH3-19) ,1.04(3H,d,J = 6.8Hz,CH3-21) ,0.91 (3H,d,J = 6.8Hz,CH3-28),0.85(3H,d ,J = 7.0Hz,CH3-27),0.85(3H,d ,J = 7.0Hz,CH3-26),0.69(3H,s, CH3-18)；13C-NMR(100MHz,CDC13)5：206.1(C,C-9),149.3(CH,C-7),137.4(C,C-8),136.2 (CH，C-22)，134.2(CH，C-23)，70.8(CH，C-3)，69.7(CH，C-6)，59.2(CH2，C-11)，51.7(CH，C- 17)，49.6(CH，C-5)，47.2(C，C-13),46.1(C，C-10)，44.4(CH2，C-24)，43.8(CH，C-14),42.3 (CH2，C-12)，40.2(CH，C-20)，33.7(CH2，C-4)，33.2(CH2，C-1)，31.3(CH2，C-2)，29.1(CH，C- 25)，28.2(CH2，C-15)，27.1(CH2，C-16)，22.1(CH3，C-21)，20.6(CH3，C-27)，20.0(CH 3，C-26)， 18.1(CH3，C-28)，17.7(CH3，C-18)，16.5(CH3，C-19)。
[0071] 化合物51:白色针状结晶，[碰5 =+3U0°(c O.lS^HsOHVH-NMRGOOMHz^DsOD) 5：6.58(lH,d ,J=1.5Hz,H-7), 5.12( lH,br s,H-24) ,4.28( lH,br d ,J = 8.4Hz ,H-6), 3.88 (lH,m,H-ll),3.66(lH,m,H-ll),3.62(lH,m,H-3),3.43(lH,t,J=9.8,10.3Hz,H-14),2.32 (lH,m,H-4),1.14(3H,s,CH3-19),0.96(3H,d ,J = 6.8Hz,CH3-21 ),1.68(3H,s,CH3-27), 1.68 (3H，s，CH3-26)，0.65(3H，s，CH3-18)。
[0072] 化合物 52:白色针状结晶，[?f =十 5,90°(c O.W^HsOiOc/H-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.55(lH,d ,J=1.8Hz,H-7), 4.71( 1H,s H-28) ,4.64( lH,s,H-28) ,4.17( lH,dd,J= 10.0, 2.0Hz,H-6),3.71(lH,m,H-ll),3.57(lH,m,H-l1),3.45(lH,m,H-3),3.25(lH,ov,H-14), 2.23(lH,ov,H-4),1.12(3H,s,CH3-19),1.02(3H,ov,CH3-21),1.01(3H,ov,CH3-27) ,1.00 (3H，ov，CH3-26)，0 · 69(3H，s CH3-I8)。
[0073] 化合物 53:白色针状结晶，[ajf =+35.10°(c O.WHsOiOc/H-NMRHOOMHz^DsOD) 5：6.58(1H,s,H-7),5.10(lH,m,H-28),4.28(lH,d,J=10.4Hz,H-6),3.87(lH,m,H-ll), 3.65(lH,m,H-ll) ,3.59(lH,m,H-3),3.43(lH,tJ= 10-3,9.8Hz,H-14) ,2.31(lH,m,H-4), 1.59(3H,d ,J = 6.8Hz,CH3-29) ,1.14(3H,s,CH3-19) ,0.98(3H,d ,J = 6.8Hz , CH3-21) ,0.98 (3H，s，CH3-27)，0.97(3H，s，CH3-26)，0.65(3H，s，CH3-18)。
[0074] 表2.化合物6和22的核磁共振数据（in⑶30D)
[0075]
[0077] 表3·化合物17、18和20的核磁共振数据（in CDC13)
[0079]
[0080] 表4.化合物25、26和34的核磁共振数据(a In CD30D，b In CDC13)
[0081]
[0083] 表5.化合物30、31、32和33的核磁共振数据（丨11〇)(：13)
[0084]
[0086] 表6.化合物36、37、38和39的核磁共振数据（in CD30D)
[0087]
[0088] 表7.化合物41、42和43的核磁共振数据（丨11〇)3(?)
[0089]
[0090]
[0091] 表8.化合物49的核磁共振数据（in CD30D)
[0092]
[0093]
[0094] 本发明还提供了上述的留体类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0095] 优选的，上述的留体类化合物在制备抗肝癌药物中的应用。
[0096] 进一步地，本发明提供了一种药物组合物，含有所述留体类化合物作为活性成份 和药学上可接受的载体。
[0097] 本发明米用CCK-8法（Cell Counting Kit_8, Ishiyama M，Miyazono Y，Sasamoto K,et al.A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability[J].Talanta,1997,44(7):1299- 1305.)对化合物1~53进行了体外抑制人肝癌Huh7干细胞增殖活性试验，试验结果表明，部 分化合物对人肝癌Huh7干细胞增殖表现出了不同程度的抑制活性，可用于制备新型抗肝癌 药物。
[0098] 本发明对于制备新型抗肿瘤药物具有重要的参考价值，对开发利用中国的海洋药 用生物资源具有重要意义。
【具体实施方式】
[0099]下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的实施不仅限于此。 [0100]实施例1:化合物1~5的制备
[0101 ]取肉芝软珊瑚洗净剪碎，丙酮超声提取7次，再用甲醇超声提取3次，至提取液基本 无色，合并丙酮及甲醇提取液，减压浓缩得粗浸膏，用等体积水分散，乙醚萃取数次，合并萃 取液，减压回收乙醚至干，得乙醚层浸膏ll〇g，乙醚层浸膏再用90%甲醇-水溶液分散，正己 烷萃取5次后，浓缩90%甲醇-水溶液得红褐色浸膏10g。将90%甲醇-水溶液的10g粗浸膏， 以二氯甲烷/乙醇梯度洗脱（100:1~1:1)，经正相硅胶柱层析分离，薄层板监测，收集合并 得到16个部分Fr. A~Fr. P。
[01 02] Fr. 0经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱层析，流动相为甲醇:氯仿=1:1，根据薄层 板监测，收集合并得到组分Fr. 0-7，再经过反相硅胶柱(0DS)、RP-HPLC纯化，以86 %甲醇-水 溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物1和2。
[0?03] Fr ·N经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱层析，流动相为甲醇:氯仿=1:1，薄层板监 测，收集合并得到组分Fr. N-3，再经过反相硅胶柱(0DS)、RP-HPLC纯化，以79 %甲醇-水溶液 为流动相，示差检测器检测，收集化合物3。
[0104] Fr.Μ经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱层析，流动相为甲醇:氯仿=1:1，薄层板监 测，收集合并得到组分Fr. M-4，再经过反相硅胶柱(0DS)、RP-HPLC纯化，以84 %甲醇-水溶液 为流动相，示差检测器检测，收集化合物4。
[0105] Fr.L经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱层析，流动相为甲醇:氯仿=1:1，薄层板监 测，收集合并得到组分Fr. L-1，再经过反相硅胶柱(ODS)、RP-HPLC纯化，以96 %甲醇-水溶液 为流动相，示差检测器检测，收集化合物5。
[0106] 实施例2:化合物6~24的制备
[0107] 取新鲜紫柳珊瑚洗净剪碎，用重量为新鲜紫柳珊瑚重量的5~10倍的丙酮(丙酮中 加入少量水)超声提取至提取液无色，减压回收丙酮至无丙酮味，用等体积水分散，乙醚萃 取数次，合并萃取液，减压回收乙醚至干，得总浸膏。将总浸膏用正相硅胶色谱（200~300 目）分离，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，通过薄层板监测，根据馏分极性大小收集，将 总浸膏合并成16个部分。
[0108] Fr. 12部分加入适量氯仿，过滤得滤渣，滤渣经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流 动相：甲醇:氯仿=1:1)洗脱，根据薄层板检测，收集合并得到Fr. 12-1~Fr.l2-4;Fr. 12-3 经过RP-HPLC纯化，以85 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物6、7、8、9、 10、11;Fr. 12-2经过正相硅胶柱(流动相CHC13: CH30H=35:1)、RP-HPLC纯化，以85 %甲醇-水 溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物12、13、14、15、16;
[0109] Fr.6部分经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流动相:石油醚：甲醇：氯仿=2:1:1) 洗脱，根据薄层板检测，收集合并得到Fr. 6-1~Fr. 6-6; Fr. 6-5，经正相硅胶柱(流动相:石 油醚:丙酮=4:1)分离，薄层板检测，收集合并得到Fr. 6-5-1~Fr. 6-5-4; Fr. 6-5-2经过RP- HPLC纯化，以90 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物20、21 ;Fr. 6-5-3经 过RP-HPLC纯化，以95 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物17、18、19;
[011 0] Fr. 13部分经正相硅胶柱分离，由氯仿：甲醇梯度洗脱，薄层板检测，收集合并得到 Fr. 13-1~Fr. 13-4;Fr. 13-3加入适量氯仿，过滤得滤渣，滤渣经过Sephandex LH-20凝胶柱 色谱(流动相：甲醇:氯仿=1:1)洗脱，薄层板检测，收集合并得到Fr. 13-3-1~Fr. 13-3-3; Fr. 13-3-2经过RP-HPLC纯化，以85 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物 22、23、奴。
[0111] 实施例3:化合物25~43的制备
[0112] 取新鲜小月柳珊瑚洗净剪碎，用重量为新鲜小月柳珊瑚重量的5~10倍的丙酮(丙 酮中加入少量水)超声提取至提取液无色，减压回收丙酮至无丙酮味，用等体积水分散，乙 醚萃取数次，合并萃取液，减压回收乙醚至干，得总浸膏。将总浸膏用正相硅胶色谱（200~ 300目）分离，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，通过薄层板监测，根据馏分极性大小收集， 将总浸膏合并成21个部分。
[0113] Fr. 15部分经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流动相：甲醇：氯仿=1:2)洗脱，薄 层板检测，收集合并得Fr. 15-1~Fr. 15-8 Jr. 15-7部分再经过正相硅胶色谱(二氯甲烷：甲 醇=30 :1)分离，薄层板监测，合并得到Fr. 15-7-1~Fr. 15-7-6 Ar. 15-7-3通过半制备型 RP-HPLC纯化，以90 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物28、29、30、31、 32、33;
[0114] Fr. 19部分经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流动相：甲醇：氯仿=1:2)洗脱，薄 层板检测，收集合并得Fr. 19-1~Fr. 19-5 Jr. 19-4部分再经过正相硅胶色谱(二氯甲烷：甲 醇= 20:1)分离，薄层板监测，收集合并得到Fr. 19-4-1~Fr. 19-4-19。Fr. 19-4-7用半制备 型RP-HPLC纯化，以95 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物34; Fr. 19-4- 16用半制备型RP-HPLC纯化，以95%甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集得到 Fr. 19-4-16-1 ~Fr. 19-4-16-9 Ar. 19-4-16-1 用半制备型 RP-HPLC 纯化(流动相，90%的甲 醇-水），紫外检测器检测，收集化合物25; Fr. 19-4-16-4用半制备型RP-HPLC纯化(流动相， 84 %的甲醇-水），示差检测器检测，收集化合物35、40 Jr. 19-4-16-3用半制备型RP-HPLC纯 化(流动相，87%的甲醇-水），紫外检测器检测，收集得到Fr.l9-4-16-3-a~Fr.19-4-16-3- i;Fr.l9-4-16-3-d浓缩得到化合物39;Fr.l9-4-16-3-g用半制备型RP-HPLC纯化(流动相， 90%的乙腈-水），紫外检测器检测，收集化合物37和42 ;Fr. 19-4-16-3-h用半制备型RP- HPLC纯化(流动相，78%的乙腈-水），紫外检测器检测，收集化合物36和41 ;Fr. 19-4-16-3-i 用半制备型RP-HPLC纯化(流动相，93%的乙腈-水），紫外检测器检测，收集化合物38和43。 [0115] Fr.20部分经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流动相：甲醇：氯仿=1:2)洗脱，薄 层板检测，收集合并得Fr. 20-1~Fr. 20-6。Fr. 20-3部分再经过正相硅胶色谱(二氯甲烷：甲 醇=20:1、15:1、10:1)洗脱，薄层板监测，收集合并得到Fr · 20-3-1~Fr · 20-3-9 Jr · 20-3-8 通过半制备型RP-HPLC纯化，以90 %甲醇-水溶液为流动相，示差检测器检测，收集化合物 26、27。
[0116]实施例4:化合物44~53的制备
[0?17] 取新鲜侧扁软柳珊瑚(Subergorgia suberosa)洗净剪碎，用重量为新鲜侧扁软柳 珊瑚重量的5~10倍的丙酮超声提取至提取液无色，减压回收丙酮至无丙酮味，用等体积水 分散，乙醚萃取数次，合并萃取液，减压回收乙醚至干，得总浸膏。总浸膏经过Sephandex LH-20凝胶柱色谱(流动相：二氯甲烷：甲醇= 1:1)洗脱，薄层板检测，收集合并得到Fr.A和 Fr.B两部分。
[0118] Fr. A部分经过反相硅胶柱色谱，用甲醇/水梯度洗脱，薄层板监测，合并得到Fr. A1 ~Fr. A6 Jr. A4用半制备型RP-HPLC纯化，以70 %乙腈-水溶液为流动相，示差检测器检测， 收集化合物47和53;Fr.A5用半制备型RP-HPLC纯化，以77%乙腈-水溶液为流动相，示差检 测器检测，收集得到化合物51 ;Fr.A3部分经正相硅胶柱层析，石油醚/丙酮体系梯度洗脱， 薄层板监测，合并得到Fr. A2-4，Fr. A2-4用半制备型RP-HPLC纯化(流动相，80 %的甲醇- 水），示差检测器检测，收集化合物44、45、46、48、49、50和52。
[0119] 实施例5:本发明的甾体化合物的抗肿瘤干细胞活性
[0120] -、实验方法
[0121] 采用CCK-8法对所述留体化合物进行肿瘤干细胞增殖抑制试验。
[0122] 1.实验用细胞株:human Huh7Stem cell(人肝癌干细胞）。实验用细胞株购自中国 科学院细胞库。
[0123] 2.实验试剂、耗材和仪器：
[0124] DMEM/F12培养液（Corning); ITS(Life technologies) ;B27(Life technologie); bFGF(Life technologie); EGF(Life technologie) ;EDTA膜酶（Invitrigen) ; DMS0 (sigma);青霉素链霉素(Hycl〇ne)、CCK-8(日本同仁）；超低吸附10cm培养皿和96孔培养板 (Corning);移液管（Corning) ;C〇2孵箱（SANYO);酶标仪（Thermo Multiskan MK3)。
[0125] 3.实验用药：
[0126] 部分实施例1~4制备的甾体化合物，
[0127] 阳性对照药:阿霉素 (Adriamycin)，大连美仑生物科技有限公司。
[0128] 4.细胞培养
[0129] Huh7干细胞培养：人肝癌细胞(Huh7stemcell)在含有DMEM/F12培养液50ml、B27 (1ml)、ITS(500yL)、bFGF( 10μ1，100μg/ml)、EGF(2yl，10μg/ml)、青霉素链霉素450μ1 配成的 培养液里，37 °C、5 % C02条件下培养，每天补充新鲜干细胞培养液，始终保持培养液微红。约 第四天开始传第一代，以后每三天传一代，等传至第四代以后，干细胞纯度可达90%左右， 可用于试验。
[0130] 将细胞液完全吸入15ml离心管内，静置约20-30min，成球的肝癌肿瘤干细胞会慢 慢沉积于离心管底部，小心吸去上层液，用0.25 %的EDTA胰酶消化，直至液体澄清。终止消 化，放入离心机内在1200R的条件离心5min，小心吸去上层液。用培养液混悬细胞，计数铺 板。将细胞浓度调至1〇6个/ml种于96孔板中，每孔100μ1，于18~24h后进行实验。
[0131] 5.细胞活力检测实验
[0132] Huh7干细胞活力检测实验:于实验前以105个细胞/100μ1 ·孔的细胞浓度接种96 孔板。37 °C、5 %⑶2条件下培养24h后，每孔分别加100μ1药物浓度为50ymol/L的培养液，设 立两个重复组、DMS0对照组和阿霉素（lOμg/ml)阳性对照组。给药后，37°C、5 %C02条件下孵 育48h。每孔加入20μ1 CCK-8试剂，37°C、5%⑶2条件下孵育2h。用酶标仪在450nm条件下检 测0D值。
[0133] 二、实验结果
[0134] 通过CCK-8法测定部分实施例1~4制备的甾体类化合物体外抑制肿瘤干细胞增殖 活性，部分实施例1~4制备的留体类化合物表现出不同程度的抑制活性，其肿瘤干细胞抑 制率见表9所示，其他化合物无抑制活性。
[0135] 表9部分实施例1~4制备的留体化合物的人肝癌Huh7干细胞增殖抑制试验（IC50y Μ)
[0136] -
[0137]
[0138] 由表9的数据可以看出，化合物1、2、8、11、23、50对人肝癌Huh7干细胞具有抑制活 性，可用于制备新型抗肿瘤药物。
[0139] 本发明对于制备新型抗肿瘤药物具有重要的参考价值，对开发利用中国的海洋药 用生物资源具有重要意义。
[0140]以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等同物界定。
【主权项】
1. 一种酱体类化合物，其化学结构如式I所示：式I中，Ri基团为Η或0H或-0 R2基团为Η或Ac 化基团为OH或Η或OAc R4基团为OH或-0 化基团为Η或双键 R6基团为Η或双键 化选自W下a~0中的任一个结构：0.2. 根据权利要求1所述的酱体类化合物，其特征在于，所述的酱体类化合物为 胆酱-10，30，5曰，6护四醇、 24S-胆酱-10，30，5曰，6护四醇、 24S-胆酱-1β，3β，5α，6β-四醇-25-单乙酸醋、 24S-胆酱-3β，5α，6β，25-四醇、 24S-胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-25-单乙酸醋、 (22Ε) -22-締-24-降胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇、 24 (25)-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 (22Ε) -22-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 24 (28)-締-麦角酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 (22Ε) -22-締-麦角酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 (2沈)-22_締-Μ-胆酱-泌，5曰，郎-S醇、 (2沈)-了，22_二締-胆酱-泌，5曰，郎-S醇、 7 (8)，24 (28)-二締-麦角酱-3β，5α，6β-Ξ醇、 7-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 (22Ε) -7，22-二締-24-降胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇、 (22Ε) -7，22-二締-麦角酱-3β，5α，6β-Ξ 醇、 (22Ε) -22-締-24-降胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-3β-醋酸醋、 (22Ε) -22-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ 醇-3β-醋酸醋、 胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-3β-醋酸盐、 (22Ε) -22-締-5α-甲氧基-胆酱-3β，6β-二醇、 5α-甲氧基-胆酱-3β，6β-二醇、 22-締-24-降胆酱-1β，3β，5α，6β-四醇、 22-締-胆酱-1β，3β，5α，6β-四醇、 麦角酱-10部，5曰，6护四醇、 (23Ε) -23-締-胆酱-25-过氧-3β，5α，6β-Ξ 醇、 24(25)-締-胆酱-1β，3β，5α，6β-四醇、 24(28)-締-麦角酱-化30，5曰，6护四醇、 胆酱-3β, 5α-二醇-6-酬、 (22Ε) -22-締-胆酱-3β，5α-二醇-6-酬、 24(28)-締-麦角酱-3β，5α-二醇-6-酬、 (22Ε) -22-締-24-降胆酱-3β，5α-二醇-6-酬、 (24S，22E)-22-締-麦角酱-3β，5α-二醇-6-酬、 (24R，22E)-22-締-麦角酱-3β，5α-二醇-6-酬、 胆酱-1β，3β-二醇-6-酬、 胆酱-1β，3β，5α-Ξ 醇-6-酬、 (2沈)-22-締-胆酱-?β，泌，δα-Ξ醇-e-酬、 24 (25)-締-胆酱-1β，3β，5α-Ξ醇-6-酬、 24 (28)-締-麦角酱-1β，3β，5α-Ξ 醇-6-酬、 (2沈)-22-締-Μ-降胆酱-?β，泌，δα-Ξ醇-e-酬、 胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-1-酬、 (22Ε) -22-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-1-酬、 24 (25)-締-胆酱-3β，5α，6β-Ξ醇-1-酬、 24 (28)-締-麦角酱-3β，5α，6β-Ξ醇-1-酬、 1l-acetoxy-30，6a-dihydroxy-9，1l-sec〇-5a-cholest-7-en-9-〇ne、subergorgol B、 3β，6a，1l-trihydroxy-9，1l-sec〇-5a-cholest-7-ene-9-〇ne、Sarcomilasterol、 subergorgol I、 24-11〇1'-3目，6〇，11-吐化7虹〇巧-9，11-36(3〇-5〇-诚〇163古-7,22化）-扣611-9-〇116、（24民）- methyl-30，6α，1l-trihydroxy-9，ll-sec〇-5a-cholest-7，22E-diene-9-〇ne、subergorgol H、 3β，6a，1l-trihydroxy-24-methylene-9，1l-sec〇-5a-cholest-7-en-9-〇ne，或 subergorgol J〇3. 根据权利要求2所述的酱体类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法如 下： 将经过预处理的珊瑚粉碎，用丙酬及甲醇超声提取数次，至提取液基本无色，浓缩后得 到粗浸膏;将粗浸膏分散在等体积水中，用乙酸萃取数次，合并萃取液，减压回收乙酸至干， 得乙酸层浸膏；或乙酸层浸膏再用90%甲醇-水溶液分散，正己烧萃取数次后，浓缩90%甲 醇-水溶液得红褐色浸膏；将乙酸层浸膏或90%甲醇-水溶液浸膏用正相硅胶色谱分离，分 别用不同的洗脱剂系统梯度洗脱，通过薄层板监测，根据馈分极性大小收集，将总浸膏合并 成若干个部分;然后每部分用不同条件的洗脱剂进行Se地adex LH-20凝胶色谱分离、正反 相硅胶柱层析，后经反相制备型HPLC纯化，即得。4. 如权利要求1或2所述的酱体类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。5. 根据权利要求4所述的酱体类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述 的肿瘤为肝癌。6. -种药物组合物，其特征在于:所述的药物组合物包括如权利要求1或2所述的酱体 类化合物作为活性成份和药学上可接受的载体。
【文档编号】C07C67/56GK105837650SQ201610208194
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月5日
【发明人】张文, 汤华, 王翠红, 孙鹏, 李铁军, 庄春林, 李娇, 孙逸哲, 刘大华
【申请人】中国人民解放军第二军医大学