百子莲生长素响应因子ApARF2及其编码基因和探针的制作方法

百子莲生长素响应因子ApARF2及其编码基因和探针的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种百子莲生长素响应因子ApARF2及其编码基因和探针，所述蛋白质为如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有百子莲ApARF2蛋白活性的由(a)衍生的蛋白质。本发明还提供了一种编码上述蛋白质的核酸序列，以及检测上述核酸序列的探针；本发明为利用基因工程技术调控百子莲生长素信号转导途径，从而达到控制其生长发育、器官形态建成的目的，为分子育种提供了理论依据，具有很大的应用价值。
【专利说明】
百子莲生长素响应因子APARF2及其编码基因和探针
技术领域
[0001] 本发明百子莲生长素响应因子ApARF2及其编码基因和探针，具体涉及一种百子莲 生长素响应因子ApARF2及其编码基因和探针。
【背景技术】
[0002] 激素对观赏植物生长发育及观赏性状调控具有重要的作用，生长素在植物体内是 唯一一种具有极性运输特征的内源激素。生长素的含量与分布关系到植株的生长与发育速 度及各器官组织的极性结构与空间形态。生长素的信号传导途径目前研究的较为清楚，其 中生长素响应因子(ARF)是一类调控生长素响应基因表达的转录因子，在生长素的信号传 导过程中处于中心位置，它能够与生长素响应基因启动子区域内的生长素响应元件特异结 合，促进或抑制基因的表达。
[0003] 百子莲为热带多年生花卉，花量大、花期长、观赏价值高，具有地下块茎组织。我们 前期建立的百子莲体胚体系表明生长素信号对百子莲体胚诱导、体胚形态、体胚数量与体 胚成苗具有决定性作用。另外，应用外源调控物质打断生长素极性运输对百子莲花期、植株 矮化、花序形态均有明显的调控作用。因此，生长素信号对花卉产业化生产与育种改良工作 具有至关重要的作用。
[0004] ARF的编码基因已从多种植物中克隆出来，包括:拟南芥、水稻、玉米、葡萄、蓖麻 等。但对于观赏植物，尤其是球根花卉中，ARF的克隆、表达模式及蛋白序列尚不清楚。目前， 未有任何与百子莲ARF蛋白及其编码基因序列相关的文献报道。

【发明内容】

[0005] 针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种百子莲生长素响应因子ApARF2 及其编码基因和探针，目的还在于填补百子莲生长素响应因子ApARF2基因的克隆、表达模 式分析以及百子莲ApARF2蛋白的空白，提供了一种百子莲ApARF2蛋白，本发明还提供了一 种编码上述蛋白质的核酸序列以及检测所述核酸序列的探针;本发明公开了百子莲ApARF2 基因转化拟南芥后的生理效应及表达模式，为今后利用基因工程技术对ApARF2基因表达的 时空特性进行调控，从而为体胚发生、株型调控提供了理论依据，具有很大的应用价值。
[0006] 第一方面，本发明提供一种如下(a)或(b)的蛋白质：
[0007] (a)如SEQ ID N0.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0008] (b)SEQ ID N0.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且 具有百子莲ApARF2蛋白活性的由（a)衍生的蛋白质。
[0009]优选的，所述蛋白质为SEQ ID N0.4所示氨基酸序列经过1~50个氨基酸的缺失、 插入和/或取代，或者在C末端和/或N末端添加1~20个以内氨基酸而得到的序列。
[0010]进一步优选的，所述蛋白质为SEQ ID N0.4所示氨基酸序列中1~10个氨基酸被性 质相似或相近的氨基酸所替换而形成的序列。
[0011]第二方面，本发明提供了一种编码上述蛋白质的核酸序列。
[0012] 优选的，所述核酸序列具体为：（a)碱基序列如SEQ ID NO. 3第1~2349位所示;或 (b)与SEQ ID N0.3第1~2349位所示的核酸有至少70%的同源性的序列；或(c)能与SEQ ID NO. 3第1~2349位所示的核酸进行杂交的序列。
[0013] 优选的，所述核酸序列具体为SEQ ID N0.3第1~2349位所示的核酸序列中1~90 个核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添加60个以内核苷酸形成的序列。
[0014] 第三方面，本发明还提供了一种检测上述核酸序列的探针，所述探针为具有上述 核酸序列8~100个连续核苷酸的核酸分子，该探针可用于检测样品中是否存在编码百子莲 生长素响应因子ApARF2相关的核酸分子。
[0015]第四方面，一种扩增所述核酸序列的特异性引物对，如SEQ ID N0.9和SEQ ID NO. 10所示。
[0016] 第五方面，本发明还提供一种所述核酸序列在调控植物生长素表达中的应用。
[0017] 在本发明中，"分离的DNA"、"纯化的DNA"是指，该DNA或片段已从天然状态下位于 其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组分分开，而且 已经与在细胞中相伴随的蛋白质分开。
[0018] 在本发明中，术语"百子莲生长素响应因子ApARF2蛋白编码序列"指编码具有百子 莲ApARF2蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID N0.3所示的第1~2349位核苷酸序列及 其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID N0.3所示的第1~2349位核苷酸中，有一个或多 个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性， 所以与SEQ ID N0.3所示的第1~2349位核苷酸序列同源性低至约70%的简并序列也能编 码出SEQ ID N0.4所示的序列。该术语还包括与SEQ ID N0.3所示的核苷酸序列的同源性至 少70 %的核苷酸序列。
[0019] 该术语还包括能编码天然百子莲生长素响应因子ApARF2蛋白的相同功能、SEQ ID NO. 3所示序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于）：通常为1~90个核苷酸的缺 失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添加为60个以内核苷酸。
[0020] 在本发明中，术语"百子莲生长素响应因子ApARF2"指具有百子莲ApARF2蛋白活性 的SEQ ID N0.4所示序列的多肽。该术语还包括具有与天然百子莲ApARF2蛋白相同功能的、 SEQ ID N0.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于）：通常为1~50个氨基酸的 缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或为20个以内氨基酸。例如，在本 领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C 末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括百子 莲ApARF2蛋白的活性片段和活性衍生物。
[0021] 本发明的百子莲生长素响应因子ApARF2的变异形式包括：同源序列、保守性变异 体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨条件下能与百子莲ApARF2相关 DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用百子莲ApARF2蛋白的抗血清获得的多肽或蛋白。 [0022]在本发明中，"百子莲ApARF2保守性变异多肽"指与SEQ ID N0.4所示的氨基酸序 列相比，有至多10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变 异多肽最好根据表1进行替换而产生。
[0023]表 1
[0024]
[0026] 发明还包括百子莲ApARF2蛋白或多肽的类似物。这些类似物与百子莲ApARF2相关 多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者 兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如 通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的 技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸）的类似物，以及具有非 天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上 述列举的代表性的多肽。
[0027] 修饰(通常不改变一级结构)形式包括:体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰 化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行 糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物 的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基（如磷酸酪氨 酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸）的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化 了溶解性能的多肽。
[0028]在本发明中，可用实时荧光定量PCR的方法分析百子莲ApARF2基因在拟南芥中的 生理效应及表达模式，即分析百子莲ApARF2基因编码的蛋白功能。
[0029] 本发明检测样品中是否存在百子莲ApARF2相关核苷酸序列的检测方法，包括用上 述的探针与样品进行杂交，然后检测探针是否发生了结合。该样品是PCR扩增后的产物，其 中PCR扩增引物对应于百子莲ApARF2相关核苷酸编码序列，并可位于该编码序列的两侧或 中间。引物长度一般为15~50个核苷酸。
[0030] 此外，根据本发明的百子莲ApARF2核苷酸序列和氨基酸序列，可以在核酸同源性 或表达蛋白质的同源性基础上，筛选百子莲ApARF2相关同源基因或同源蛋白。
[0031]为了得到与百子莲ApARF2相关基因的点阵，可以用DNA探针筛选百子莲cDNA文库， 这些探针是在低严谨条件下，用32P对百子莲ApARF2相关的全部或部分做放射活性标记而得 的。适合于筛选的cDNA文库是来自百子莲的文库。构建来自感兴趣的细胞或者组织的cDNA 文库的方法是分子生物学领域众所周知的。另外，许多这样的cDNA文库也可以购买到，例如 购自Clontech，Stratagene，Palo Alto，Cal。这种筛选方法可以识别与百子莲ApARF2相关 的基因家族的核苷酸序列。
[0032]本发明的百子莲ApARF2相关核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重 组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤 其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法 所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次 PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
[0033] 当获得了有关序列后，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其 克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
[0034] 此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
[0035] 除了用重组法产生之外，本发明蛋白的片段还可用固相技术，通过直接合成肽而 加以生产（Stewart 等人，（1969)固相多肽合成，WH Freeman Co·, San Francisco; Merrifield J.(1963)J.Am Chem.Soc 85:2149-2154)。在体外合成蛋白质可以用手工或自 动进行。例如，可以用Applied Biosystems的431A型肽合成仪(Foster City，CA)来自动合 成肽。可以分别化学合成本发明蛋白的各片段，然后用化学方法加以连接以产生全长的分 子。
[0036]利用本发明的百子莲生长素响应因子ApARF2,通过各种常规筛选方法，可筛选出 与百子莲生长素响应因子ApARF2蛋白相关发生相互作用的物质，或抑制剂与拮抗剂等。
[0037]百子莲观赏价值极高，应用广泛，其花葶挺拔是优良的鲜切花品种，也是除了玫瑰 以外最能表达爱意的爱情花，其市场需求也越来越大。本发明首次克隆百子莲植物体内生 长素响应因子ApARF2的编码序列，并将其转化到模式植物拟南芥中，采用荧光实时定量PCR 的方法分析ApARF2基因在拟南芥中的生理效应和表达模式，为今后利用基因工程技术调控 ApARF2基因的时空表达，从而为体胚快繁、新品种选育方面提供了理论依据，具有很大的应 用价值。
【附图说明】
[0038]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得更明显：
[0039]图1为本发明的百子莲ApARF2基因与桑树ARF基因 mRNA的核苷酸序列的同源比较 (GAP)结果；
[0040]图2为本发明的百子莲ApARF2蛋白与油棕ARF23蛋白的氨基酸序列的同源比较 (FASTA)结果，其中，相同的氨基酸在两个序列之间用氨基酸单字符标出。
[0041 ]图3为野生型与ApARF2转基因拟南芥植株生长状况表型观察；
[0042] 图4为野生型与ApARF2转基因拟南芥ApARF2基因表达定量分析。
【具体实施方式】
[0043]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用 于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如 Sambrook等分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0044] 实施例1、百子莲ApARF2基因的克隆
[0045] 1.植物材料的获得
[0046] 取百子莲（Agapanthus praecox ssp. Oriental is) (Zhang D. ,Zhuo L.H. ,Shen X.H.Sporogenesis and gametogenesis in Agapanthus praecox ffilld.orientalis (Leighton)Leighton and their systematic implications.Plant Syst.Evol.2010, 288:1-11.)成年苗叶片组织，用于提取RNA;
[0047] 2.RNA 的抽提
[0048] 用 "RNA prep pure植物总RNA提取试剂盒"抽提总RNA(Trizol: Invitrogen)，用甲 醛变性胶电泳鉴定RNA的完整性，然后在分光光度计（Thermo Scientific NAN0DR0P lOOOSpectrophotometer)上测定RNA的纯度及浓度；
[0049] 3.基因的全长克隆
[0050]根据百子莲转录组测序(RNA-seq)的蛋白功能注释结果，获得百子莲ApARF2基因 核心片段。采用RACE方法（SMARTer? RACE cDNA Amplification Kit:Clonetech)进行cDNA 全长克隆，分三个阶段进行：
[0051 ] (l)RT-PCR获得基因中间片段
[0052] 将提取的RNA进行反转录(Prime Script Π 1st Strand cDNA Synthesis Kit:宝 生物工程(大连)有限公司），以第一链cDNA为模板，利用如下引物进行PCR:
[0053] ARF2-F(SEQ ID NO.1)：57-AGGCAAATGTTCCGTCTT-37
[0054] ARF2-R(SEQ ID N0.2)：57-TCCCTGCTTATGTACCTTAGTG-37
[0055] 扩增得到1274bp片段，回收并连接到pMD19_T Simple vector载体上，用RV-M和 M13-47作为通用引物，采用终止物荧光标记（Big-Dye，Perkin-Elmer，USA)的方法，在 ABI377测序仪（Perkin-Elmer，USA)上进行测序，测序结果通过在NCBI网站进行BLAST (http://blast.ncbi .nlm.nih.gov/)比对已有的数据库(GenBank)，知其核酸序列及编码 蛋白与已知的油棕、睡莲、葡萄的ARF基因的同源性很高，初步认为它是一个ApARF2基因；
[0056] (2)3/RACE
[0057] 二轮巢式PCR完成3'末端序列的扩增。
[0058] 第一轮：UPM+3'-GSPl(SEQIDN0·5)
[0059] 5,-ATGGTAATGAATCAGAGACCGCCCCT-3，
[0060] 第二轮：NUP+3'-GSP2(SEQ ID N0·6)
[0061 ] 57-TAGCGAGTGGGACAAGGGTCAGCATA-37
[0062] UPM和NUP为试剂盒提供。3' RACE得到百子莲ApARF2的3'末端序列（479bp)，回收， 连接到PMD19-T Simple vector载体上，用RV-M和M13-47作为通用引物，采用终止物荧光标 记（Big-Dye，Perkin_Elmer，USA)的方法，在 ABI377测序仪（Perkin-Elmer，USA)上进行测 序，测序结果通过在％131网站进行131^\31'(111^口:/7131381:.11(313；[.111111.11；[11.80￥/)比对已有的 数据库(GenBank)，知其核酸序列及编码蛋白与已知的油棕、葡萄的ARF基因的同源性很高；
[0063] (3)5/RACE
[0064] 以5'RACE ready cDNA为模板，通过二轮巢式PCR完成5'末端序列的扩增，
[0065] 第一轮：UPM+5'-GSPl(SEQ ID N0.7)
[0066] 5' -ATGCTGACCCTTGTCCCACTCGCTAC-3'
[0067] 第二轮：NUP+5'-GSP2(SEQ ID N0.8)
[0068] 5/ -TTTGGTCTAGGAACTGGAAGGGGGTT-37
[0069] UPM和NUP为试剂盒提供。5' RACE得到百子莲ApARF2基因的5'末端序列（1209bp)， 回收连接后用同上面一样的方法进行测序，将通过上述3种方法获得的序列的测序结果进 行拼接，将拼接序列提交BLAST分析，结果证明从百子莲中新得到的ApARF2基因的确为一个 生长素响应因子基因，将测序结果结合NCBI的ORF Finding(http:// www. ncbi . nlm. nih. gov/gorf)预测，发现了百子莲ApARF2基因的起始密码子与终止密码 子，根据获得的序列，分别从起始密码子和终止密码子处设计特异性引物：
[0070] 〇RF-F(SEQ ID N0.9)：57-ATGGAGCTAGAGTTAGGCCTTGCTCTCAAT-37 ,
[0071] 〇RF-R(SEQ ID NO.10)：57-CTATGCAGGTCTCTCTCGTTTGTTACATCG-37 ,
[0072] 以百子莲cDNA为模板进行PCR，扩增得到2349bp百子莲ApARF2蛋白的全长编码序 列（SEQ ID N0.3)。
[0073] 实施例2、百子莲ApARF2基因的序列信息与同源性分析
[0074] 本发明新的百子莲ApARF2基因全长开放读码框序列为2349bp，详细序列见SEQ ID NO. 3所示序列。根据开放读码框序列推导出百子莲ApARF2蛋白的氨基酸序列，共782个氨基 酸残基，分子量为87.78kDa，等电点(pi)为6.36,详细序列见SEQ ID N0.4所示序列；
[0075]将百子莲ApARF2的开放读码框序列及其编码蛋白的氨基酸序列用BLAST程序在 Non-redundant GenBank+EMBL+DDBJ+PDB和Non-redundant GenBank CDS translations+ PDB+SwissProt+Superdate+PIR数据库中进行核苷酸和蛋白质同源性检索，结果发现它与 桑树ARF基因（登录号：XM_010093503.1)在核苷酸水平上具有91%的相同性，如图1所示 (Query:百子莲ApARF2的编码基因序列；Sb jet:桑树ARF的mRNA序列）；在氨基酸水平上，它 与油棕ARF23基因（登录号:XP_010942377.1)也有62%的一致性和73%的相似性，如图2所 示(Query:百子莲ApARF2蛋白的氨基酸序列；Sb jet:油棕ARF23蛋白的氨基酸序列）。由此可 见，百子莲ApARF2基因与其它已知物种的ARF基因无论从核酸还是蛋白水平上都存在较高 的同源性。
[0076] 实施例3、百子莲ApARF2基因转化模式植物拟南芥 [0077] 1.含目的基因（百子莲ApARF2基因）的表达载体的构建
[0078] 根据百子莲ApARF2基因全长编码序列（SEQ ID N0.3)，设计扩增在完整编码阅读 框的引物，并在上下游引物上分别引入限制性内切酶位点（这可视选用的载体而定），以便 构建表达载体。以实施例1中获得的扩增产物为模板，经PCR扩增后，将百子莲ApARF2基因的 编码区序列连接至中间载体(如PMD19-T)中进行测序，再将测序正确的百子莲ApARF2基因 的编码区序列进一步克隆到表达载体中（如PHB)，在鉴定好阅读框正确的前提下将其转入 根癌农杆菌中（如GV3101)，并对转化后的农杆菌进行PCR鉴定，以保证含有百子莲ApARF2基 因的植物表达载体成功转化入根癌农杆菌中。
[0079] 2.根癌农杆菌介导转化拟南芥
[0080] (1)预摇农杆菌:挑阳性单克隆至25ml含50mg/L卡那霉素、50mg/L庆大霉素、25mg/ L利福平的YEP液体培养基中，28°C，200rpm摇菌24h;
[0081 ] (2)扩培农杆菌:将预摇的农杆菌菌液以1:100扩培至含400mL卡那霉素抗性YEP培 养基中，28 °C，200rpm，培养13-16h，培养至吸光度0D600达到1.5-2.0之间收菌，收菌条件是 23 °C ,5000rpm,8min；
[0082] (3)转化植株：（需要在转化前一天或是转化当天剪去植株上所有的角果和盛开以 及露白的小花)配制500mL含5%蔗糖的1/2MS溶液，用少量MS溶液将收集的农杆菌沉淀悬 起，摇勾，向剩余的鹿糖溶液中加入0.04 % (v/v)的Silwet L-77与10yL 6-BA(母液为lmg/ mL)，搅匀，在转化前将二者混匀，将植株茎部及花序浸泡在菌液中30s，取出沥干菌液，放入 一次性塑料袋中，密封保湿。将所有植株转化完毕后，罩上黑盒子，避光培养24h。之后取出 植株，将植株直立放置，浇水培养，保证植株水分充足。
[0083] 3.转基因阳性株系的筛选
[0084] 转化后的植株待角果全部成熟后收种子，在垫有滤纸的干燥培养皿中室温放置一 周，使种子全部干燥，之后用50目的不锈钢筛过滤种子，除去角果，收集转基因 T0代种子并 播种于穴盘中，用0.05% (v/v)草甘膦进行幼苗抗性筛选，获得T1代转基因植株，持续筛选 直至获得T3代纯合体转基因植株。野生型与ApARF2转基因拟南芥植株的表型具有显著性差 异（图3);ApARF2转基因植物生长明显快于野生型植株，说明ApARF2对生长素具有正调控作 用。
[0085] 4.转基因拟南芥植株ApARF2基因表达差异
[0086]剪切拟南芥野生型与ApARF2转基因植株的叶片0.2g，提取RNA、制备cDNA并进行实 时定量PCR分析。Rea 1 -time PCR中ApARF2基因定量分析的特异性引物为：
[0087] qT-F(SEQ ID NO.11)：57-ACTCAGATGGATTACTCACAA-37 ,
[0088] qT-R(SEQ ID NO.12)：57-GGCTCATAGGTAGGATTCAA-37 ,
[0089] 内参基因为拟南芥UBQ5基因，引物为：
[0090] UBQ5-F(SEQ ID NO.13)：57-GACGCTTCATCTCGTCC-37 ,
[0091] UBQ5-R(SEQ ID NO.14)：57-CCACAGGTTGCGTTAG-37〇
[0092] 采用法作相对定量分析，结果表明转基因拟南芥中ApARF2的表达量较高，是 内参基因 UBQ5的3.6倍，是野生型植物的4632倍（图4)。表明ApARF2没有在野生型植株中表 达。
[0093] 以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述 特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影 响本发明的实质内容。
【主权项】
1. 一种如下(a)或(b)的蛋白质： (a) 如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b) SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有 百子莲APARF2蛋白活性的由（a)衍生的蛋白质。2. 如权利要求1所述的蛋白质，其特征是，所述蛋白质为SEQ ID NO.4所示氨基酸序列 经过1~50个氨基酸的缺失、插入和/或取代，或者在C末端和/或N末端添加1~20个以内氨 基酸而得到的序列。3. 如权利要求2所述的蛋白质，其特征是，所述蛋白质为SEQ ID NO.4所示氨基酸序列 中1~10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成的序列。4. 一种编码权利要求1所述蛋白质的核酸序列。5. 如权利要求4所述的核酸序列，其特征是，所述核酸序列具体为： (a)碱基序列如SEQ ID NO.3第1~2349位所示； 或(b)与SEQ ID NO.3第1~2349位所示的核酸有至少70%的同源性的序列； 或(c)能与SEQ ID NO.3第1~2349位所示的核酸进行杂交的序列。6. 如权利要求4所述的核酸序列，其特征是，所述核酸序列具体为SEQ ID NO.3第1~ 2349位所示的核酸序列中1~90个核苷酸的缺失、插入和/或取代，或者在5'和/或3'端添加 60个以内核苷酸形成的序列。7. -种用于检测如权利要求4所述核酸序列的探针，其特征在于，所述探针为包含有所 述核酸序列8~100个连续核苷酸的核酸分子。8. -种扩增如权利要求4所述核酸序列的特异性引物对，其特征在于，如SEQ ID NO. 9 和SEQ ID NO. 10所示。9. 一种如权利要求4所述核酸序列在调控植物生长素表达中的应用。
【文档编号】C07K14/415GK105837670SQ201610298271
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月6日
【发明人】陈冠群, 申晓辉, 杨舟, 陈淑敏, 张荻
【申请人】上海交通大学