与芝麻黑色种皮基因紧密连锁的ssr分子标记及应用
【专利摘要】本发明提供了与芝麻黑色种皮基因紧密连锁的SSR分子标记及应用。一个与芝麻黑色种皮基因SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4056，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。SSR分子标记ZMM4056引物，引物序列为：ZMM4056F：5’?GCAGAAGGGTCAATATCGGA?3’ZMM4056R：5’?ATCCAAACCCCAGAAAATCC?3’。另一个芝麻黑色种皮基因SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4067，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。SSR分子标记ZMM4067引物，引物序列为：ZMM4067F：5’?GCTTAAACTTGGTTGTCGGG?3’ZMM4067R：5’?AAACCCTATCATTTCTTTGCCA?3’自然群体验证表明这两个分子标记ZZM4056和ZZM6067可以有效筛选出黑芝麻和白芝麻，应用于黑芝麻分子标记辅助选择育种。
【专利说明】
与芝麻黑色种皮基因紧密连锁的SSR分子标记及应用
技术领域
[0001] 本发明属于分子标记领域，具体涉及与芝麻黑色种皮基因紧密连锁的SSR分子标 记及应用。
【背景技术】
[0002] 芝麻（Sesamum indicum L.)隶属于胡麻科胡麻属，是一种古老的油料作物，栽培 历史在5000年以上。目前，广泛分布在南炜40度至北炜45度之间，集中于亚洲和非洲的热 带、亚热带地区。它作为一种营养丰富、功能性强、保健效果好的贵重油料深受人们喜爱。芝 麻油不饱和脂肪酸含量高达85%，富含抗氧化、抗癌、降血脂的芝麻素，被誉为"油料皇后"。
[0003] 芝麻种皮颜色主要是白色和黑色，白芝麻含油量高适合油用，黑芝麻含油量稍低， 适合食用。黑芝麻除了含有大量的脂肪外，还含有大量有益于人体健康的黑色素、蛋白质、 氨基酸、维生素、微量元素和芝麻酚等，具有较高的营养保健功效和药用价值。因此，阐述芝 麻种皮颜色的遗传基础和分子机理有利于黑芝麻品种的选育。
[0004] 连锁分析主要是基于基因数据、表型数据通过统计学的方法去判断感兴趣的基因 位点与已知的标记位点间的相对位置，重组率是连锁分析的重要参数。常规连锁分析群体 是运用有限亲本的人工控制授粉群体，因此其经过有限次数的重组，通常基于有限亲本，其 等位基因的个数也有限。关联分析是基于自然变异群体，利用连锁不平衡规律来研究遗传 变异与目标性状相关的研究方法，与传统QTL定位相比，关联分析不需要构建作图群体、广 度大、精度高、能检测到同一位点多个等位基因。但由于群体背景复杂，存在亚群结构，导致 易产生假阳性，而且自然群体的连锁衰减较快，因此在群体里想找到足够的变异，需要高密 度的分子标记。关联分析结合连锁分析，可以发挥两者的优势，提高定位中的阳性率及精 度，提高复杂数量性状的挖掘效率。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的在于提供与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记。
[0006] 本发明的另一个目的在于提供与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标 记的引物。
[0007] 本发明的再一个发明目的在于提供与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分 子标记的引物的应用。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0009] 一个与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4056,其核苷 酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0010] 芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记ZMM4056引物，引物序列为：
[0011] ZMM4056F:5 '-GCAGAAGGGTCAATATCGGA-3，
[0012] ZMM4056R:5 '-ATCCAAACCCCAGAAAATCC-3 '
[0013] 一个与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4067,其核苷 酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0014] 芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记ZMM4067引物，引物序列为：
[0015] ZMM4067F:5 '-GCTTAAACTTGGTTGTCGGG-3 '
[0016] ZMM4067R:5 '-AAACCCTATCATTTCTTTGCCA-3 '
[0017]与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记鉴定方法，其特征在于：用 ZMM4056扩增芝麻叶片总DNA，其中黑色种皮芝麻品种DNA的扩增片段大小为266bp，白色种 皮芝麻品种DNA扩增片段大小为258bp。
[0018] 与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记鉴定方法，其特征在于：用 ZMM4067扩增芝麻叶片总DNA，其中黑色种皮芝麻品种DNA的扩增片段大小为144bp，白色种 皮芝麻品种DNA扩增片段大小为136bp。
[0019] 一种与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记的筛选获得方法，包括如 下步骤：
[0020] (1)从国家芝麻中期库保存的7910份国内外资源中根据产量相关性状的表型、地 理来源和遗传多样性检测结果，采取逐级取样策略，选取了705份芝麻材料进行重测序分 析；
[0021] (2)利用Illumina Hiseq2500测序平台，用2X76双末端测序法对705份芝麻材料 进行低覆盖度的全基因组重测序，获得了 2.6倍覆盖的基因组序列；
[0022] (3)结合种质资源群体中的种皮颜色数据、基因型数据和群体结构，采用EMMAX软 件包和Peal程序对芝麻相关性状进行全基因组关联分析，在Ρ=10-129水平检测到1个位于4 号连锁群上11607514的位置与芝麻种皮颜色显著关联的标记位点，解释67%的表型变异； [0023] (4)利用芝麻黑色种皮品种614为父本，芝麻白色种皮品种610为母本进行杂交，自 交数代后获得F6代分离群体，即重组自交系(RIL)群体；
[0024] (5)根据芝麻(http: //ocri-genomics · org/Sinbase/index · html)基因组序列在 该SNP位点附近开发80对SSR引物，在步骤(4)构建的重组自交系(RIL)群体中进行基因型分 析；
[0025] (6)采用CTAB法提取步骤(4)构建的芝麻RIL群体的叶片总DNA;
[0026] (7)利用(4)中的80个SSR标记引物对步骤(4)的RIL群体进行PCR扩增，产物在变性 聚丙烯酰胺凝胶中电泳，染色及带型统计，筛选亲本间有多态性的引物；
[0027] (8)将筛选得到的多态性引物对重组自交系(RIL)群体进行基因型分析，获得两个 与芝麻黑色种皮基因显著关联的标记位点ZMM4056和ZMM4067，将芝麻黑种皮基因定位在第 4条连锁群上37kb的范围内。
[0028] 利用上述技术措施，
【申请人】最终获得了与芝麻黑色种皮基因关联的SSR标记 ZMM4056和ZMM4067。其中，ZMM4056引物序列为：
[0029] ZMM4056F: 5 ' -GCAGAAGGGTCAATATCGGA-3 '，如SEQ · ID · N0 · 5所示。
[0030] ZMM4056R: 5 ' -ATCCAAACCCCAGAAAATCC-3 '，如SEQ· ID · NO · 6所示。
[0031] ZMM4067引物序列为：
[0032] ZMM4067F:5'-GCTTAAACTTGGTTGTCGGG-3'JnSEQ.ID.N0.7K*。
[0033] ZMM4067R:5'-AAACCCTATCATTTCTTTGCCA-3'JnSEQ.ID.N0.8K*。
[0034] 上述SSR分子标记ZMM4056在芝麻育种中的应用，具体应用方法为：用所述SSR分子 标记ZMM4056扩增芝麻种质资源叶片总DNA，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，如果获得 266bp的扩增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为黑色，如果获得258bp的扩增片段，则表明 该芝麻品种种皮颜色为白色。
[0035] 上述SSR分子标记ZMM4067在芝麻育种中的应用，具体应用方法为：用所述SSR分子 标记ZMM4067扩增芝麻种质资源叶片总DNA，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，如果获得 144bp的扩增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为黑色，如果获得136bp的扩增片段，则表明 该芝麻品种种皮颜色为白色。
[0036]本发明的优点在于：
[0037]随着基因组测序技术的发展，利用生物信息学的方法大规模挖掘基因组特异分子 标记已成为可能。本发明基于全基因组测序，对芝麻的群体结构进行分析，利用全基因组关 联分析(GWAS)的方法，结合连锁分析，最终获得了与芝麻黑色种皮基因紧密连锁的SSR分子 标记，并利用关联分析结合连锁分析对芝麻种皮颜色基因进行定位，将芝麻黑种皮基因定 位在第4条连锁群上ZZM4056和ZZM6067标记间大约37kb的范围内。自然群体验证表明这两 个分子标记ZZM4056和ZZM6067可以有效筛选出黑芝麻和白芝麻，可以应用于黑芝麻分子标 记辅助选择育种。
【附图说明】
[0038]图1为利用SSR分子标记ZMM4056的引物在芝麻种质资源中的基因组DNA中的扩增 结果。
[0039]图2为利用SSR分子标记ZMM4067的引物在芝麻种质资源中的基因组DNA中的扩增 结果。
【具体实施方式】
[0040] 下述实施例中按照《分子克隆实验指南》（第三版）（黄培堂等译，北京：科学出版 社，2002)所述的条件进行DNA提取、PCR及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。实验过程中涉及的所有 试剂成分均可从商业途径获得，并按照实验手册中的条件或所用试剂制造厂商所建议的条 件使用。
[0041] -种与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记的获得方法，包括如下步 骤：
[0042 ] (1)从国家芝麻中期库保存的7910份国内外资源中根据产量相关性状的表型、地 理来源和遗传多样性检测结果，采取逐级取样策略，选取了705份芝麻材料进行重测序分 析；
[0043] (2)利用Illumina Hiseq2500测序平台，用2X76双末端测序法对705份芝麻材料 进行低覆盖度的全基因组重测序，获得了 2.6倍覆盖的基因组序列；
[0044] (3)结合种质资源群体中的种皮颜色数据、基因型数据和群体结构，采用EMMAX软 件包和Peal程序对芝麻相关性状进行全基因组关联分析，在ρ = 10-129水平检测到1个位于4 号连锁群上11607514的位置与芝麻种皮颜色显著关联的标记位点，解释67%的表型变异；
[0045] (4)根据芝麻(http: //ocri-genomics · org/Sinbase/index · html)基因组序列在 该SNP位点附近开发80对SSR引物，在一个重组自交系(RIL)群体中进行基因型分析；
[0046] (5)利用芝麻黑色种皮品种614为父本，芝麻白色种皮品种610为母本进行杂交，自 交数代后获得F6代分离群体，即重组自交系(RIL)群体；
[0047] (6)采用CTAB法提取芝麻RIL群体的叶片总DNA;
[0048] (7)利用(4)中的80个SSR标记引物对该RIL群体进行PCR扩增，产物在变性聚丙烯 酰胺凝胶中电泳，染色及带型统计，筛选亲本间有多态性的引物；
[0049] (8)将筛选得到的多态性引物对重组自交系(RIL)群体进行基因型分析，获得两个 与芝麻黑色种皮基因显著关联的标记位点ZMM4056和ZMM4067，将芝麻黑种皮基因定位在第 4条连锁群上37kb的范围内。
[0050] 实施例1:与芝麻种皮颜色基因紧密连锁标记的获得与鉴定
[0051] 一、芝麻种皮颜色的全基因组关联分析
[0052] 1、从国家芝麻中期库保存的7910份国内外资源中，根据产量相关性状的表型、地 理来源和遗传多样性检测结果，采用分组、聚类分析、逐级取样和分子标记辅助等一套方 法，综合考虑了我国七大生态区和国外五大洲的来源和分布、种质类型、形态和生物学特 性，优先录选高抗逆、高抗病和高品质等育种目标突出的优异种质，选取了 705份芝麻核心 种质进行全基因组重测序。
[0053] 2、2015年1月将全部材料种植在海南三亚，于芝麻初花期(播种后45天)选择健康 单株取第三对和第四对真叶，迅速用液氮冷冻后转移至干冰中保存。将嫩叶带回实验室后 用DNeasy Plant Mini Kit(Qiagen)试剂盒提取其余300份材料的总DNA，然后用超声处理 将基因组DNA打碎，用T4DNA聚合酶、T4多聚核苷酸激酶、Klenow DNA聚合酶修复末端后，再 用K1 enow Fragment(3 ' -5 ' exo_)在3 '末端接上A碱基，将不同的材料分别与不同类型的3 碱基接头进行连接。多个样品混合后用2%的琼脂糖凝胶进行电泳，回收300-400bp的片段， PCR扩增9个循环。利用11 lumina Hiseq2500测序平台，用2 X 76双末端测序法对300份芝麻 材料进行低覆盖度的全基因组重测序。705份材料的全基因组重测序共计产生原始测序数 据264Gb，平均测序深度为芝麻基因组大小的2.6倍。
[0054] 3、用SMALT软件将双末端测序得到的短序列与已完成的芝麻基因组序列进行比 对，选取一致性较高且不重复的序列。利用Ssaha Pileup包从一致性序列读取单倍体序列， 去除杂合位点。对705份芝麻的单倍型序列进行比对，提取SNP，结合物理谱图和连锁图谱， 标记它们在基因组中的位置，记录变异在芝麻群体中发生的频率。
[0055] 4、采用EIGENS0FT和PHYLIP分别进行主成分分析和系统发育分析，探索对世界芝 麻资源的群体结构。用Haploview软件分析芝麻基因组的连锁不平衡水平，确定该群体的LD 衰减水平。结合种质资源群体中的种皮颜色数据、基因型数据和群体结构，采用EMMAX软件 包和Peal程序对芝麻种皮颜色性状进行全基因组关联分析(GWAS)。检测到一个与芝麻种皮 颜色紧密连锁的SNP位点，该位点位于4号连锁群上，位置在11607514(Ρ = 10-129)。
[0056] 二、芝麻种皮颜色关联分子标记附近SSR标记的开发
[0057] 1、构建黑色种皮/白色种皮芝麻重组自交系(RIL)群体
[0058] 利用芝麻黑色种皮品种614和白色种皮品种610进行杂交，获得F1种子，F1植株自 交产生F2代种子，F2植株自交产生F3代种子，F3代开始按株行种植并自交产生种子，每个株 行只收获1个单株的种子，种植成为下一代的1个株行，以此类推，最终获得F6代分离群体， 即重组自交系(RIL)群体。
[0059] 利用CTAB法提取叶片基因组总DNA，具体步骤如下：
[0060] A.将各亲本及RIL分离群体叶片适量放入超低温冰箱-70°C存放，备用。使用时，自 超低温冰箱(-70Γ)取适量叶片样品，立即放入冰冻处理的研钵中，加入液氮研磨成粉状； 快速装入50m 1离心管中，加入在65 °C的水浴锅中预热过的CTAB提取液（2 % CTAB，0.1Μ Tris-C1，1.4M NaCl，20mM EDTA，pH 7.5)，混合均匀，放入65°(：的水浴锅中水浴4〇11^11;
[0061] B.取出离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇按体积比为24:1混合的混合液，缓慢 上下颠倒离心管30-50次，使充分混勾，13000g离心10min;
[0062] C.取离心后的上清于另一离心管中，重复B步骤一次。然后再取上清加入0.6倍体 积冰冷异戊醇中，缓慢颠倒离心管，直至有絮状沉淀集结为止。然后置于_20°C静置30min， 挑出沉淀，用75 % (体积比)酒精漂洗2-3次，干燥后加无菌水溶解；
[0063] D.再次重复B步骤一次，取上清，向其中加入0.1倍体积的NaAc(3mol/L，PH5.2)，混 匀后缓慢加入2倍体积的冰冷无水乙醇，静止5min后缓慢转动离心管直至絮状沉淀出现，挑 出沉淀转入1.5ml离心管中，75 % (体积比）酒精漂洗2-3次，干燥后加无菌水溶解，于-20°C 冰箱中保存备用，即得各亲本及RIL分离群体叶片基因组总DNA。
[0064] 2、SSR引物的开发及多态性的筛选
[0065]根据芝麻(http: //ocri-genomics · org/Sinbase/index .html)基因组序列在 4号 连锁群附近开发SSR引物。SSR引物具体的开发方法是先利用SSRHunter软件在每个 scaf f iold搜索SSR，然后用Pr imer5.0软件设计SSR引物。共设计了 80对SSR引物。
[0066] A.自父母本中各随机选择5株的DNA等量混合，总浓度调整至20ng/ul，用作筛选引 物的DNA模板。
[0067] B.PCR扩增反应。具体反应体系及扩增程序如下：
[0068] PCR反应体系： 10xbliΠor ( MgC!.： free) I .〇〇ul dNTPs mixturct 1 OmM) 0.25ul Lefl primer (2.5uM) 1,60ul Right primcr(2.5uM) 1,60ul
[0069] 1 V Taq po!ymcrasc(5U/ul) 0.16ul MgCM25niM) 0.8ui DNA 2.5ul ddH：0 3.69ul
[0070] Total 10u!
[0071] PCR扩增程序：
[0072
[0073] 3、PCR扩增产物凝胶电泳测试获得多态性筛选结果
[0074] 将以上获得的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，以获得双亲多态性筛选结 果，具体步骤如下：
[0075] 胶板制备：
[0076] 玻璃板用10% (质量比)NaOH溶液浸泡24小时，洗净，晾干。短胶板用餐巾纸均匀涂 抹硅烷化剂(AMMRESC0)，长胶板涂抹lml反硅烷化剂，放置5min后，将玻璃装好，并以边条隔 开，四周用制胶夹夹紧。准备就绪后用注射器将6% (质量比）聚丙烯酰胺胶液60ml缓慢注入 玻璃间的缝隙中，直至灌满到玻璃板模具的顶部，注意避免产生气泡。小心插入梳子不带齿 的一边，并用夹子夹牢，聚合2小时以上。
[0077] 反硅烷化剂：500ml稀释液(95 %无水乙醇，0.5 %冰醋酸，4.5 % ddH20)中加1 -2ml 亲和硅烷；
[0078] 6% (质量比）聚丙烯酰胺胶液:5.7% (质量比）丙烯酰胺，0.3% (质量比）N，N'_甲 叉二丙烯酰胺，42% (质量比）尿素，1XTBE缓冲液。灌胶前每60ml胶液加入10% (质量比）过 硫酸铵390ul和TEMED 39ul;
[0079] 电泳：
[0080] 去掉制胶夹，取出胶板，小心的取出梳子，冲洗并擦净玻璃外侧，固定于电泳槽上， 上下槽各加 500ml 1XTBE缓冲液，以恒功率75W电泳30min直到电压回升，用注水器冲洗凝 胶的上表面以冲走析出的尿素和碎胶，插上梳子。在PCR产物中加入0.5倍体积的上样缓冲 液，95 °C变性5min，冰浴冷却3min以上，每个点样孔点样5ul，1800伏恒压电泳约80min，当二 甲苯青FF到达2/3胶板时停止电泳。取下胶板，用自来水冲洗降温。
[0081 ] 1 X TBE: Tris-basel08g，硼酸55g，0 · 5M EDTA(PH8 · 0)40ml，定容至 1000ml即成10 X TBE，使用时稀释10倍即为1 X TBE工作液；
[0082] 上样缓冲液:98 % (体积比）去离子甲酰胺，lOmmol/LEDTA，0.005 % (质量比）二甲 苯青FF，0.005% (质量比）溴酚蓝。
[0083]银染法染色：
[0084]将两块玻璃板分离开来，长玻璃板连同凝胶用蒸馏水漂洗3次，每次3min，放入染 色液（含〇 . 15%的AgN03)中染色lOmin，用蒸馏水快速漂洗5-6s。放入显影液（含0.2%的 似0!1，0.04%的甲醛，35°(：)中显影，至带型清晰，然后在蒸馏水中漂洗1次，室温下自然晾 干，拍照保存。观察胶板上各引物在双亲中的扩增带型，双亲带型有差异的引物即为多态性 引物。
[0085] 4、筛选得到的多态性引物在RIL群体中的分析
[0086] 以550个RIL群体为模板，利用目标区间的分子标记进行基因型检测。统计基因型 结果，将与父本一致的带型记为A，与母本一致的带型记为B，杂合的记为H。在此基础上，采 用JoinMap 4.0进行遗传图谱构建，从而计算出各标记在目标区间内的遗传位置。其中， ZMM4056和ZMM4067这两个标记与芝麻种皮颜色显著相关，将芝麻黑种皮基因定位在第4条 连锁群上37kb的范围内。
[0087] 实施例2:与芝麻种皮颜色基因紧密连锁的分子标记在芝麻种质资源中的应用
[0088] 利用实施例1获得的与芝麻种皮颜色基因连锁的SSR标记在96份不同遗传背景材 料上进行验证，其中48份材料为白色种皮芝麻品种，48份材料为黑色种皮芝麻品种，以确定 该标记用于分子标记辅助选择的准确性。采用实施例1中步骤中的PCR扩增和检测方法。 [0089]表1 96份芝麻地方品种材料的种皮颜色
[0090]
[0091]
[0092]
[0093] 检测结果显示见图1。图1中从左到右各样品分别为编号为1，2,3…96的芝麻。分子 标记引物ZMM4056F/ZMM4056R扩增的与黑色种皮基因连锁的SSR标记特征条带为266bp，其 核苷酸序列如SEQ. ID. NO. 1所示;分子标记引物ZMM4056F/ZMM4056R引物扩增的与白色种皮 基因连锁的SSR标记特征条带为258bp，其核苷酸序列如SEQ.ID.N0.2所示。检测结果表明该 SSR标记在96份材料中的验证结果准确性为100%。
[0094] 另一检测结果见图2,图2中从左到右各样品分别为编号为1，2,3…96的芝麻。分子 标记引物ZMM4067F/ZMM4067R扩增的与黑色种皮基因连锁的SSR标记特征条带为144bp，其 核苷酸序列如SEQ. ID. N0.3所示;分子标记引物ZMM4056F/ZMM4056R引物扩增的与白色种皮 基因连锁的SSR标记特征条带为136bp，其核苷酸序列如SEQ.ID.N0.4所示。检测结果表明该 SSR标记在96份材料中的验证结果准确性为100%。
【主权项】
1. 一个与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4056，其特征在 于:核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。2. 权利要求1所述的与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记ZMM4056引物， 其特征在于：引物序列为： ZMM4056F:5 '-GCAGAAGGGTCAATATCGGA-3， ZMM4056R:5 '-ATCCAAACCCCAGAAAATCC-3 '。3. -个与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记，命名为ZMM4067，其特征在 于:核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。4. 权利要求3所述的芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记ZMM4067引物，其 特征在于：引物序列为： ZMM4067F:5 '-GCTTAAACTTGGTTGTCGGG-3 ' ZMM4067R:5'-AAACCCTATCATTTCTTTGCCA-3'。5. 与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记鉴定方法，其特征在于：用权利 要求2所述的ZMM4056引物扩增芝麻叶片总DNA，其中黑色种皮芝麻品种DNA的扩增片段大小 为266bp，白色种皮芝麻品种DNA扩增片段大小为258bp。6. 与芝麻黑色种皮基因 SiPPO紧密连锁的SSR分子标记鉴定方法，其特征在于：用权利 要求4所述的ZMM4067引物扩增芝麻叶片总DNA，其中黑色种皮芝麻品种DNA的扩增片段大小 为144bp，白色种皮芝麻品种DNA扩增片段大小为136bp。7. 权利要求2所述的ZMM4056引物在芝麻育种中的应用，其特征在于:应用方法为：用权 利要求2所述的ZMM4056引物扩增芝麻种质资源叶片总DNA，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电 泳后，如果获得266bp的扩增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为黑色，如果获得258bp的扩 增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为白色。8. 权利要求4所述的ZMM4067引物在芝麻育种中的应用，其特征在于:应用方法为：用权 利要求4所述的ZMM4067引物扩增芝麻种质资源叶片总DNA，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电 泳后，如果获得144bp的扩增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为黑色，如果获得136bp的扩 增片段，则表明该芝麻品种种皮颜色为白色。
【文档编号】C12Q1/68GK105838785SQ201610176228
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月25日
【发明人】张秀荣, 魏鑫, 周瑢, 王林海, 张艳欣
【申请人】中国农业科学院油料作物研究所