药理学活性的化合物的制作方法

药理学活性的化合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及以下示出的式(I)的化合物：其中Q是如本文所定义的。式(I)的化合物用作士的宁敏感性的α1?甘氨酸受体的选择性正向变构调节剂。本发明还涉及这些化合物作为用于治疗和/或预防其中涉及士的宁敏感性的α1?甘氨酸受体活性的疾病或状况(例如比如，慢性疼痛)的治疗剂的用途。本发明还涉及用于制备这些化合物的工艺并且涉及包含这些化合物的药物组合物。
【专利说明】药理学活性的化合物
[0001] 引言
[0002] 本发明涉及药理学活性的化合物。更具体地，本发明涉及用作士的宁 (strychnine)敏感性的α?-甘氨酸受体的选择性正向变构调节剂(positive allosteric modulator)的化合物。本发明还涉及这些化合物作为用于治疗和/或预防其中涉及士的宁 敏感性的α?-甘氨酸受体活性的疾病或状况(例如比如，慢性疼痛或神经病理性疼痛）的治 疗剂的用途。本发明还涉及用于制备这些化合物的工艺并且涉及包含这些化合物的药物组 合物。
[0003] 发明背景
[0004] 在许多临床环境中，对安全且有效的疼痛控制策略有需要。然而，在疼痛控制领域 中的开发的大多数仍旧未能提供无不合意的副作用和安全性问题的高效力产品。鸦片制剂 (opiate)通常被认为是可用于严重疼痛的最有效的治疗，但最终的目标是提供具有鸦片制 剂的效力，而没有与鸦片制剂使用有关的镇静、依赖性、胃损伤和一般耐受性（general tolerability)问题的疼痛控制剂。
[0005] 据已经主张的，苯酸衍生物可以具有许多神经调节作用（neuromodulatory effect)。然而，在普遍的临床使用中的仅有的苯酸衍生物是麻醉剂(anaesthetic)丙泊酸 (2,6_二异丙基苯酚）。
[0006] 麻醉的关键的特征是意识的失去，在存在疼痛刺激并且不存在记忆力(recall)下 的不动性。麻醉剂，例如丙泊酚，被理解为通过激活在中枢神经系统(CNS)中的γ -氨基丁酸 (GABAa)受体来介导其麻醉作用。
[0007] 镇痛(analgesia)被定义为疼痛的减轻。在其他外周和/或中枢神经机制中，镇痛 可以作为在脊髓的背角（d 〇 r s a 1 h 〇 r η )内的增强的抑制性突触传递（s y n a p t i c transmission)的结果而出现。被理解的是，在脊髓中的抑制性突触后传递主要涉及甘氨酸 受体。因此，甘氨酸受体家族代表用于以抑制疼痛为目的的治疗剂的靶位点。
[0008] GABAa和甘氨酸受体两者都属于配体门控离子通道超家族（ligand-gated ion channel superfamily)。它们具有其中五个亚单位形成离子通道的共同结构。α和β亚单位 以提议的3α: 2β的体内化学计量组装成五聚体受体。甘氨酸受体，例如GABAa受体，通过在激 动剂结合之后打开氯离子通道抑制神经元放电（neuronal firing)。甘氨酸受体主要在中 枢神经系统的较低区域中被发现并且涉及对运动节律产生(motor rhythm generation)的 控制、脊髓伤害性反射应答(spinal nociceptive reflex response)的协调和感觉信号的 处理。
[0009] 慢性疼痛非常不同于急性疼痛。急性疼痛可以被认为是通知我们关于有害的刺激 并且从而帮助我们逃避和防止伤害的有用的早期警告系统(early warning system)。相比 之下，慢性疼痛其自身是疾病。专家认为慢性疼痛是平衡失调综合征（dys-equilibrium syndrome )，其中在正常环境下抑制疼痛的处理的抑制性神经元活性（inhibi tory neuronal activity)显著地被降低。慢性炎性疼痛或神经性疼痛的治疗仍旧是困难的，并 且当前没有对所有状况都起作用的单一治疗。
[0010]在慢性疼痛中见到的增强的神经元兴奋性涉及通过在脊髓的浅表背角中的GABA 和/或甘氨酸能神经元介导的抑制的损失，所述GABA和/或甘氨酸能神经元控制从外周至中 枢神经系统的较高区域的伤害性信号的转运。在成人背角中，甘氨酸对快速抑制性突触后 传递的贡献占主导。甘氨酸受体主要在中枢神经系统的较低区域中被发现并且涉及对运动 节律产生的控制、脊髓伤害性反射应答的协调和感觉信号的处理。甘氨酸受体在调节上升 的伤害性通路和疼痛中的作用使其成为用于镇痛剂（analgesic agent)和解痉剂 (spasmolytic agent)的可能的感兴趣的祀位点。将甘氨酸受体激动剂牛磺酸微注射到前 扣带皮层（anterior cingulate cortex)-与疼痛的情感成份（affective component)有 关-减轻神经病理性疼痛，通过选择性甘氨酸受体拮抗剂士的宁可以被拮抗的作用。对于士 的宁敏感性甘氨酸受体，有四个α_亚单位和一个β_亚单位，α 1-亚单位在成人脊髓和脑干中 而且还在感觉处理中涉及的脑的较高中心中广泛地被表达。由于PGE2诱导的受体磷酸化， 甘氨酸受体α3_亚单位已经被鉴定为以中枢炎性疼痛敏化为基础的靶位点。α3_亚单位敲除 的小鼠在否则对急性疼痛正常响应下，不发展炎性疼痛。此现象可以通过以下的事实来解 释:可能补偿缺少α3的含α?的甘氨酸受体亚单位不具有PGE2信号转导中涉及的蛋白激酶A (PKA)磷酸化位点。此外，α3亚单位的磷酸化不一定涉及神经病理性疼痛。基于此理解，对开 发靶向包含α?亚单位的主要的成人甘氨酸受体同种型（isoform)的药物的需要已经由本发 明人鉴定。考虑到甘氨酸受体的生理学作用和甘氨酸受体相对受限制的表达(主要在脊髓 和较低的脑区域中），对选择性甘氨酸调节剂在治疗上应该有很大兴趣以提高在脊髓背角 的水平下的抑制。
[0011]有开发新的且改进的镇痛剂的需要存在。尽管甘氨酸受体代表用于鉴定这样的镇 痛剂的良好的靶标的事实，然而没有有效地靶向这些受体的现有镇痛剂。因此，本发明人决 定解决此问题并且着眼于鉴定新的且改进的用于控制疼痛的药物，开发他们的以麻醉和镇 痛为基础的病理生理学机制的知识。
[0012]本发明的方面在想到前述下被设计。
[0013] 发明概述
[0014] 在一方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0015] 在另一方面，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含如本文定义的化合物、 或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及一种或更多种药学上可接受的赋形剂。
[0016] 在另一方面，本发明提供用于治疗的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的 盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0017] 在另一方面，本发明提供用于治疗其中士的宁敏感性的α?-甘氨酸受体的选择性、 正向变构调节是有益的疾病或状况的、如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶 剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0018] 在特定的方面，本发明提供用于治疗疼痛的如本文定义的化合物、或其药学上可 接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，疼痛在人类受试 者中存在。
[0019] 在特定的方面，本发明提供用于治疗慢性疼痛的如本文定义的化合物、或其药学 上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，慢性疼痛在 人类受试者中存在。
[0020]在特定的方面，本发明提供用于治疗神经病理性疼痛的如本文定义的化合物、或 其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，慢性 疼痛在人类受试者中存在。
[0021 ]在另一方面，本发明提供用于士的宁敏感性的α?-甘氨酸受体的选择性、正向变构 调节的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组 合物。
[0022] 在另一方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化 物在制造用于治疗其中士的宁敏感性的α1_甘氨酸受体的选择性、正向变构调节是有益的 疾病或状况的药剂中的用途。
[0023] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗疼痛的药剂中的用途。合适地，药剂用于治疗在人类受试者中的疼痛。
[0024] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗慢性疼痛的药剂中的用途。合适地，药剂用于治疗在人类受试者中的 慢性疼痛。
[0025] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗神经病理性疼痛的药剂中的用途。在特定的实施方案中，神经病理性 疼痛在人类受试者中存在。
[0026] 在另一方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化 物在制造用于士的宁敏感性的α 1 -甘氨酸受体的选择性、正向变构调节的药剂中的用途。
[0027] 在另一方面，本发明提供在体外或在体内选择性地产生在士的宁敏感性的α?-甘 氨酸受体中的正向变构调节作用的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文定义的化 合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触。
[0028] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的其中士的宁敏感性的 α 1-甘氨酸受体的选择性、正向变构调节是有益的疾病或状况的方法，所述方法包括向所述 患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本 文定义的药物组合物。
[0029] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的疼痛的方法，所述方 法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物、或如本文定义的药物组合物。
[0030] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的慢性疼痛的方法，所 述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或 溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0031] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的神经病理性疼痛的方 法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受 的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0032] 本发明还提供合成如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方 法。
[0033] 在另一方面，本发明提供通过在本文定义的合成方法中的任一种可获得的、或获 得的、或直接地获得的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0034] 在另一方面，本发明提供适于在本文陈述的合成方法中的任一种中使用的本文定 义的新颖的中间体。
[0035] 本发明的任一特定的方面的优选的、合适的、和任选的特征也是任何其他的方面 的优选的、合适的、和任选的特征。
[0036] 发明详述
[0037]
[0038] 除非另外陈述，否则在本说明书和权利要求中使用的以下术语具有下文陈述的以 下含义。
[0039] 应理解，提到"治疗（treating)"或"治疗（treatment)"包括预防以及减轻状况的 确立的症状。因此，状态、紊乱或状况的"治疗(treating)"或"治疗（treatment)"包括：（1) 预防或延迟在可以受状态、紊乱或状况折磨或预先处置但尚未经历或表现出状态、紊乱或 状况的临床或亚临床症状的人类中形成的状态、紊乱或状况的临床症状的出现；（2)抑制状 态、紊乱或状况，即，阻止、减少或延迟疾病或其复发症(在维持治疗的情况下）或其至少一 种临床或亚临床症状的形成;或（3)缓解或减弱疾病，即引起状态、紊乱或状况或其临床或 亚临床症状中的至少一种的消退。
[0040] "治疗有效量"意指当被施用至哺乳动物用于治疗疾病时，足以实现用于该疾病的 这样的治疗的化合物的量。"治疗有效量"将取决于化合物、疾病及其严重度以及待治疗的 哺乳动物的年龄、体重等等而变化。
[0041] 术语"卤素"指的是氟、氯、溴和碘。
[0042] 措辞"本发明的化合物"意指在本文中公开(一般性地和特别地两者）的那些化合 物。
[0043] 本发明的化合物
[0044] 在一方面，本发明提供以下示出的式I的化合物：
[0045]
[0046]
[0047]
[0048]
[0049] 其中：
[0050] Ri、R2a、R2b和R3各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF 3和0CF3;或R2JPR2b被连 接，使得它们一起形成4元、5元或6元的碳环或杂环；
[0051 ] RjPR5各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF3和0CF3;
[0052] R6和R7各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF3和0CF3;
[0053] R8和R9各自独立地选自氢、甲基、CF3、卤素、羟甲基和0CF 3;
[0054] R1Q和Rn各自独立地选自氢、甲基、CF3、卤素、羟甲基和0CF 3;
[0055] R12选自氢、（1-4C)烷基或（1-4C)卤代烷基；
[0056]或其药学上可接受的盐。
[0057]在另一方面，本发明提供以下示出的式I的化合物：
[0058]
[0059]
[0060]
[0061]
[0062]其中：
[0063] 、R2和R3各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF3和0CF 3;
[0064] RjPR5各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF3和0CF 3;
[0065] R6和R7各自独立地选自氢、卤素、甲基、羟甲基、CF3和0CF3;
[0066] R8和R9各自独立地选自氢、甲基、CF3、卤素、羟甲基和0CF 3;
[0067] 或其药学上可接受的盐。
[0068] 在上文式I的化合物中，〃指示将Q附接至式I的化合物的C(=0)部分的键。在 所有情况下，Q是上文示出的式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)或式(v)的氮连接的杂环。
[0069] 本发明的特定的化合物包括，例如式I的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化 物，其中除非另外陈述，否则0、1?1、1^、1^，1?2、1?3、1?4、1^、1?6、1?7、1?8、1?9、1?1()、1?11和1?12中的每个具 有在上文中或在下文中段落(1)至(33)的任一个中定义的含义中的任何：
[0070] (1)Q选自：
[0071]
[0072]
[0073]
[0074]
[0075]
[0091] (19)RdPR5 两者都是氢；
[0092] (20)R4和R5中的一个是氟或甲基并且另一个是氢。
[0093] (21) R6和R7各自独立地选自氢、氟、甲基、羟甲基、CF3和0CF3;
[0094] (22) R6和R7各自独立地选自氢、氟或甲基；
[0095] (23)R6和R7两者都是氢；
[0096] (24)R6和R7中的一个是氟或甲基并且另一个是氢；
[0097] (25)R8和R9各自独立地选自氢或甲基；
[0098] (26)R8和R9两者都是氢；
[0099] (27)R8和R9中的一个是甲基并且另一个是氢；
[0100] (28) R1()和Rn各自独立地选自氢、氟或甲基；
[0101] (29)R1(j和Rn两者都是氢；
[0102] (30)1?1〇和1?11中的一个是甲基并且另一个是氢；
[0103] (31 )Rio和Rii两者都是氛并且Ri2是甲基；
[0104] (32)R12 选自氢或（1-4C)烷基；
[0105] (33)R12 是甲基。
[0106] 合适地，Q是如在上文段落（1)、（2)或（3)中定义的。在实施方案中，Q具有结构式 (i)。在另一个实施方案中，Q具有结构式(ii)。在实施方案中，Q具有结构式(iii)。在特定的 实施方案中，Q具有结构式(iv)。
[0107] 在特定的实施方案中，Q是如在上文段落(3)中定义的。
[0108] 合适地，当Q具有式(i)时，Q具有以下示出的式：
[0109]
(i)
[0110] 合适地，Ri、R2a、R2b和R3是如上文段落(4)至（16)的任一个中定义的。
[0111] 合适地，RdPR5是如上文段落（17)至（20)的任一个中定义的。在特定的实施方案 中，R4和抱是如在上文段落(20)中定义的。
[0112]合适地，R6和R7是如在上文段落(21)至(24)的任一个中定义的。在特定的实施方案 中，R6和R7是如在上文段落(23)或(24)中定义的。
[0113] 合适地，R8和R9是如在上文段落(25)至(27)的任一个中定义的。在特定的实施方案 中，R6和R7是如在上文段落(26)或(27)中定义的。
[0114] 合适地，R1Q和Rn是如在上文段落(28)至(30)的任一个中定义的。在特定的实施方 案中，R6和R7是如在上文段落(29)或(30)中定义的。
[0115] 在本发明的化合物的特定的组中，Q具有上文示出的结构式（iv)。此类化合物具有 以下结构式IA:
[0116]
[0117]
[0118] 其中，Rs和R9各自具有在本文中陈述的定义中的任一个。
[0119] 在式IA的化合物的实施方案中，R8和R9各自独立地选自氢或甲基。
[0120] 在式IA的化合物的另外的实施方案中，R8和R9两者都是氢。
[0121] 在式IA的化合物的另外的实施方案中，R8和R9中的一个是甲基并且另一个是氢。
[0122] 本发明的特定的化合物包括以下的任一个：
[0123] (4_(羟基)-3,5_二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮；
[0124] (R)-(4_(羟基)-3,5_二异丙基苯基）（2_甲基吗啉代）甲酮；
[0125] (3-氟氮杂环丁烷-1-基）（4-羟基-3，5-二异丙基苯基）甲酮；
[0126] (4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯基）（哌啶-1-基）甲酮；
[0127] (4_(羟基)-3,5_二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮；
[0128] (4-羟基-3，5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3 ]庚烷-6-基）甲酮；
[0129] (4-羟基-3-5-二异丙基苯基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮；
[0130] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0131]在特定的实施方案中，本发明的化合物是：
[0132] (4_(羟基)-3,5_二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮、
[0133] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0134] 组成本发明的化合物的各种官能团和取代基典型地被选择，使得化合物的分子量 不超过1000。更通常地，化合物的分子量将小于750,例如小于700、或小于650、或小于600、 或小于550。更优选地，分子量小于525并且，例如是500或更小。
[0135] 任何本发明的化合物的合适的或优选的特征也可以是任何其他的方面的合适的 特征。
[0136] 本发明的化合物的合适的药学上可接受的盐是，例如是足够地碱性的本发明的化 合物的酸加成盐(acid-addition salt)，例如，与例如无机酸或有机酸(例如盐酸、氢溴酸、 硫酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸、柠檬酸或马来酸)的酸加成盐。此外，是足够地酸性的本发明的 化合物的合适的药学上可接受的盐是碱金属盐，例如钠盐或钾盐;碱土金属盐，例如钙盐或 镁盐;铵盐或与提供生理学上可接受的阳离子的有机碱的盐，例如与甲胺、二甲胺、三甲胺、 哌啶、吗啉或三-(2 -羟基乙基)胺的盐。
[0137] 具有相同的分子式但在性质或其原子的键合顺序或其原子在空间中的排列上不 同的化合物被称为"异构体"。在其原子在空间中的排列上不同的异构体被称为"立体异构 体"。不是彼此的镜像的立体异构体被称为"非对映异构体"并且是彼此的不可重叠的镜像 的那些被称为"对映异构体"。当化合物具有不对称中心，例如其被键合至四种不同的基团 时，一对对映异构体是可能的。对映异构体可以通过其不对称中心的绝对构型被表征并且 通过Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则，或通过其中分子使偏振光的平面旋转并且被指定为 右旋的或左旋的（即，分别为(+ )或(_)异构体）的方式被描述。手性化合物可以作为单独的 对映异构体或作为其混合物存在。包含相等比例的对映异构体的混合物被称为"外消旋混 合物"。
[0138] 本发明的化合物可以拥有一个或更多个不对称中心；因此，此类化合物可以作为 单独的（R)_或(S)-立体异构体或作为其混合物产生。除非另外指示，否则在本说明书和权 利要求书中的特定的化合物的描述或命名意图包括单独的对映异构体及其混合物(外消旋 的或以其他方式的）两者。用于确定立体化学以及分离立体异构体的方法是本领域熟知的 (参见在"Advanced Organic Chemistry"，第四版J.March，John Wiley and Sons,New York，2001的第四章中的讨论），例如通过从光学活性的起始材料合成或通过拆分外消旋形 式。本发明的化合物中的某些可以具有几何异构中心(E-和Z-异构体）。应理解，本发明涵盖 所有具有活性的光学异构体、非对映异构体和几何异构体及其混合物。
[0139] 本发明还涵盖包含一个或更多个同位素取代的如本文定义的本发明的化合物。例 如，Η可以呈任何同位素的形式，包括咕、2!1(0)、和3H(T);C可以呈任何同位素的形式，包括12C、13C、和14C;并且0可以呈任何同位素的形式，包括 160和180;等等。
[0140] 还应理解，本发明的某些化合物可以以溶剂化的以及未溶剂化的形式，比如例如 水合的形式存在。应理解，本发明涵盖具有活性的所有这样的溶剂化形式。
[0141] 还应理解，本发明的某些化合物可以呈现多晶型，并且本发明涵盖具有活性的所 有这样的形式。
[0142] 本发明的化合物可以以大量不同的互变异构形式存在并且提到的本发明的化合 物包括所有的这样的形式。为避免疑义，在化合物可以以若干互变异构形式中的一种存在 并且仅一种被特别地描述或示出的情况下，然而所有的其他的被本发明的化合物包括。互 变异构形式的实例包括酮、烯醇、和烯醇化物形式，如在例如以下的互变异构对中：酮/烯醇 (在下文说明的）、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、和硝基/异 硝基。
[0143]
[0144] 含胺官能的本发明的化合物还可以形成N-氧化物。本文提到的包含胺官能的式I 的化合物还包括N-氧化物。在化合物包含若干胺官能的情况下，一个或多于一个氮原子可 以被氧化以形成N-氧化物。N-氧化物的特定的实例是叔胺或含氮的杂环的氮原子的N-氧化 物。N-氧化物可以通过用氧化剂，例如过氧化氢或过酸（例如，过氧羧酸）处理对应的胺形 成，参见例如Advanced Organic Chemistry，Jerry March，第四版，Wiley Interscience， 页。更特别地，N-氧化物可以通过L.W.Deady(Syn.Comm.l977,7,509-514)的程序被制备，其 中使胺化合物与间氯过氧苯甲酸(MCPBA)反应，例如在诸如二氯甲烷的惰性溶剂中。
[0145] 本发明的化合物可以以在人类或动物身体内被分解以释放本发明的化合物的前 体药物的形式被施用。前体药物可以被用以改变本发明的化合物的物理性质和/或药代动 力学性质。当本发明的化合物包含修改性质的基团可以被附接至的合适的基团或取代基 时，可以形成前体药物。前体药物的实例包括可以在本发明的化合物中的羧基或羟基处形 成的体内可裂解的酯衍生物和可以在本发明的化合物中的羧基或氨基处形成的体内可裂 解的酰胺衍生物。
[0146] 因此，本发明包括当通过有机合成被使得是可用的时以及当在人类或动物身体内 通过其前体药物的裂解的方式被使得是可用的时的如在上文中定义的那些式I的化合物。 因此，本发明包括通过有机合成手段产生的那些式I的化合物以及还有在人类或动物身体 中通过前体化合物的代谢的方式产生的此类化合物，即式I的化合物可以是合成地产生的 化合物或代谢地产生的化合物。
[0147] 式I的化合物的合适的药学上可接受的前体药物是基于合理的医学判断为适合用 于向人类或动物身体施用而没有不合意的药理学活性且没有不适当的毒性的前体药物。
[0148] 前体药物的多种形式已经被描述，例如在以下的文献中：-
[0149] a)Methods in Enzymology,第 g 卷，第 309-396 页，由 K.Widder 等人编辑 (Academic Press,1985)；
[0150] b)Design of Pro-drugs，由H.Bundgaard编辑，（Elsevier，1985);
[0151] c)A Textbook of Drug Design and Development，由Krogsgaard-Larsen和 H.Bundgaard编辑，第5章 "Design and Application of Pro-drugs"，H.Bundgaard，第113- 191页（1991);
[0152] d)H.Bundgaard,Advanced Drug Delivery Reviews,8,1-38(1992);
[0153] e)H.Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences. ,77,285(1988)；
[0154] f )N.Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull ·，32,692(1984)；
[0155] g) T · Higuchi和V · Ste 1 la，"Pro-Drugs as Nove 1 De 1 ivery Systems"， A.C.S. Symposium Series，第14卷；以及
[0156] h)E · Roche(编辑），"Bioreversible Carriers in Drug Design"，Pergamon Press，1987。
[0157] 式I的化合物的体内作用可以部分地通过在施用式I的化合物之后，在人类或动物 身体内形成的一种或更多种代谢物而发挥。如在上文中所陈述的，式I的化合物的体内作用 还可以通过前体化合物(前体药物)的代谢的方式来发挥。
[0158] 还应当理解，式I的化合物还可以共价地被连接(在任何合适的位置处)至其他基 团，例如比如增溶的部分(例如，PEG聚合物）、使式I的化合物能够被结合至固体支撑体的部 分(比如例如，含生物素的部分）、以及靶向配体(例如，抗体或抗体片段）。
[0159]
[0160]本发明的化合物可以使用本领域已知的化学技术被合成。
[0161]在下文描述的合成方法的描述中以及在被用以制备起始材料的参考的合成方法 中，应理解，所有提出的反应条件(包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间 和后处理程序(workup procedure))可以被本领域技术人员选择。
[0162] 有机合成领域的技术人员理解，在分子的多个部分上存在的官能性必须与被利用 的试剂和反应条件是相容的。
[0163] 必需的起始材料可以通过有机化学的标准程序获得。这样的起始材料的制备连同 以下代表性的工艺变体并且在伴随的实施例中被描述。可选择地，必需的起始材料通过在 有机化学工作者的普通技术内的与被说明的那些类似的程序是可获得的。
[0164] 将理解的是，在下文界定的工艺中合成本发明的化合物期间、或在合成某些起始 材料期间，保护某些取代基以防止其非期望的反应可以是合意的。熟练的化学工作者将理 解何时需要这样的保护、以及可以如何将此类保护基放置在适当的位置，并且稍后除去。
[0165] 对于保护基的实例，参见关于该主题的许多一般教科书中的一种，例如，Theodora Green的'Protective Groups in Organic Synthesis'（出版商：John Wiley&Sons)。保护 基可以通过在文献中描述的或对于熟练的化学工作者已知的适于除去讨论中的保护基的 任何便利的方法来除去，选择这样的方法以便实现在最小干扰分子中别处的基团的情况下 除去保护基。
[0166] 因此，如果反应物包含例如诸如氨基、羧基或羟基的基团，在本文提及的反应的某 些中保护基该团可以是合意的。
[0167] 举例来说，用于氨基或烷基氨基的合适的保护基是，例如，酰基，例如烷酰基，比如 乙醜基;烷氧基幾基，例如甲氧基幾基、乙氧基幾基或叔丁氧基幾基;芳基甲氧基幾基，例如 苄氧基羰基;或芳酰基，例如苯甲酰基。用于上文保护基的脱保护条件必然地随保护基的选 择而变化。因此，例如，诸如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基的酰基可以通过，例如用诸如碱 金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠）的合适的碱水解被除去。可选择地，诸如叔丁氧 基羰基的酰基可以例如通过用合适的酸，例如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理被除去并 且诸如苄氧基羰基的芳基甲氧基羰基可以例如通过在催化剂(例如，碳载钯)上氢化，或通 过用路易斯酸例如BF3.OEt2处理被除去。用于伯氨基的合适的可选择的保护基是，例如邻苯 二甲酰基，其可以通过用烷基胺例如二甲基氨基丙胺、或用肼处理来除去。
[0168] 用于羟基的合适的保护基是，例如酰基，例如烷酰基比如乙酰基、芳酰基例如苯甲 酰基;或芳基甲基，例如苄基。用于上文保护基的脱保护条件将必然地随保护基的选择而变 化。因此，例如，诸如烷酰基或芳酰基的酰基可以例如通过用诸如碱金属氢氧化物，例如氢 氧化锂、氢氧化钠或氨的合适的碱水解来除去。可选择地，诸如苄基的芳基甲基可以例如通 过在催化剂(例如，碳载钯)上氢化来除去。
[0169] 用于羧基的合适的保护基是，例如酯化基团，例如甲基或乙基(其可以例如通过用 诸如氢氧化钠的碱水解来除去）、或例如叔丁基(其可以例如通过用酸例如有机酸(例如，三 氟乙酸)处理来除去）、或例如苄基（其可以例如通过在催化剂（例如，碳载钯)上氢化来除 去)。
[0170] 树脂也可以被用作保护基。
[0171]在特定的方面，本发明提供合成式I的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物 的方法，该方法包括：
[0172] a)使式A的化合物
[0173]
[0174] 其中X是反应性基团，例如氯;并且羟基任选地被保护；
[0175] 与式B的化合物反应：
[0176] H-Q
[0177] 其中Q是如在上文中定义的并且Η原子被附接至Q基团的氮原子;以及
[0178] b)任选地此后，并且如有必要：
[0179] i)除去存在的任何保护基；
[0180] i i)将式I的化合物转化成另一种式I的化合物;和/或 [0181 ] i i i)形成其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0182] X可以是任何合适的反应性基团。合适地，X是卤素，例如氯。
[0183] 合适地，在化合物A和化合物B之间的偶联反应在合适的溶剂的存在下发生。任何 合适的溶剂或溶剂混合物可以被用于此反应。本领域技术人员将知道如何选择用于这些反 应的合适的溶剂或溶剂混合物。合适的溶剂的实例是二氯甲烷。
[0184] 本领域技术人员将能够选择合适的反应条件来使用以便促进此反应。合适地，反 应在无水条件中并且在惰性气氛，例如氩气或氮气的存在下进行。反应还可以在室温下或 在升高的温度下进行。
[0185] 式A的化合物可以通过本领域已知的工艺以及合适地通过在本文中参考实施例描 述的工艺被制备。
[0186] 式B的化合物可以通过本领域已知的工艺以及合适地通过在本文中参考实施例描 述的工艺制备。
[0187] 获得的式I的化合物可以使用本领域熟知的技术来分离并且纯化。
[0188] 本文界定的工艺可以还包括使式I的化合物经受盐交换的步骤，特别是在其中式I 的化合物作为不同的盐形式的混合物被形成的情形下。盐交换合适地包括将式I的化合物 固定在合适的固体支撑体或树脂上，并且用合适的酸洗脱该化合物以产生式I的化合物的 单一的盐。
[0189] 在本发明的另外的方面，提供了通过本文界定的工艺中的任一种可获得的式I的 化合物。
[0190] 在本发明的另外的方面，提供了通过本文界定的工艺中的任一种获得的式I的化 合物。
[0191]在本发明的另外的方面，提供了通过本文界定的工艺中的任一种直接地获得的式 I的化合物。
[0192] 药物组合物
[0193] 根据本发明的另外的方面，提供了药物组合物，所述药物组合物包含与药学上可 接受的稀释剂或载体联合的如在上文中定义的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐或 溶剂化物。
[0194] 本发明的组合物可以呈适于口服用途的形式(例如，作为片剂、锭剂、硬的或软的 胶囊、水性的或油性的悬浮液、乳剂、可分散的粉剂或粒剂、糖浆或酏剂）、适于局部用途的 形式(例如，作为乳膏、软膏、凝胶、或水性的或油性的溶液或悬浮液）、适于通过吸入施用的 形式(例如，作为细碎的粉剂或液体气雾剂）、适于通过吹入法施用的形式(例如，作为细碎 的粉剂)或适于肠胃外施用的形式(例如，作为用于静脉内的、皮下的、肌内的、腹膜内的或 肌内的给药的无菌的水性的或油性的溶液或作为用于直肠给药的栓剂）。
[0195] 本发明的组合物可以使用本领域中熟知的常规的药物赋形剂通过常规的程序获 得。因此，意图用于口服用途的组合物可以包含，例如一种或更多种着色剂、增甜剂、增香剂 和/或防腐剂。
[0196] 用于治疗增殖性疾病的本发明的化合物的有效量是足以在温血动物，特别地人类 中在症状上减轻感染的症状以使感染的进展放慢、或以在具有感染的症状的患者中减少恶 化的风险的量。
[0197] 与一种或更多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量将必然地取决于被 治疗的宿主和特定的施用途径而变化。例如，意图用于口服施用至人类的制剂将通常包含 例如与合适的且便利的量的赋形剂（其可以从总的组合物的约5重量百分数至约98重量百 分数变化)混合的从〇. 5mg至0.5g的活性剂(更合适地从0.5mg至100mg，例如从lmg至30mg)。
[0198] 根据熟知的医学原则，用于治疗或预防目的的式I的化合物的剂量的大小将根据 状况的性质和严重度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径自然地变化。
[0199] 在使用本发明的化合物用于治疗或预防目的中，其将通常被施用，使得在例如 0. lmg/kg体重至75mg/kg体重的范围内的日剂量被接收(考虑到如果需要分开的剂量）。通 常，当利用肠胃外途径时，将施用较低的剂量。因此，例如，对于静脉内施用或腹膜内施用， 在例如0. lmg/kg体重至30mg/kg体重的范围内的剂量通常将被使用。类似地，对于通过吸入 施用，在例如〇.〇5mg/kg体重至25mg/kg体重的范围内的剂量将被使用。口服施用也可以是 合适的，特别地以片剂形式。典型地，单位剂型将包含约0.5mg至0.5g的本发明的化合物。 [0200] 治疗用途和应用
[0201] 在一方面，本发明提供用于治疗的如本文定义的式I的化合物、或其药学上可接受 的盐或溶剂化物、或药物组合物。
[0202] 本发明的化合物能够选择性、正向变构调节士的宁敏感性的α 1-甘氨酸受体。如将 从实施例部分是明显的，本发明的化合物靶向甘氨酸受体α 1-亚单位，所述甘氨酸受体α 1 - 亚单位已知被麻醉剂、醇类和大麻类正向地调节，但根据本发明的化合物以高的亲和力靶 向此受体。
[0203] 在另一方面，本发明提供用于治疗其中士的宁敏感性的α?-甘氨酸受体的选择性、 正向变构调节是有益的疾病或状况的、如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶 剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0204] 在特定的方面，本发明提供用于治疗疼痛的如本文定义的化合物、或其药学上可 接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，疼痛在人类受试 者中存在。
[0205] 在特定的方面，本发明提供用于治疗慢性疼痛例如下背痛（lower back pain)或 神经病理性疼痛的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定 义的药物组合物。在特定的实施方案中，慢性疼痛在人类受试者中存在。
[0206] 在特定的方面，本发明提供用于治疗神经病理性疼痛的如本文定义的化合物、或 其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，神经 病理性疼痛在人类受试者中存在。
[0207] 在特定的方面，本发明提供用于治疗下背痛的如本文定义的化合物、或其药学上 可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。在特定的实施方案中，下背痛在人类 受试者中存在。
[0208] 在另一方面，本发明提供用于士的宁敏感性的α?-甘氨酸受体的选择性、正向变构 调节的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组 合物。
[0209] 在另一方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化 物在制造用于治疗其中士的宁敏感性的α1_甘氨酸受体的选择性、正向变构调节是有益的 疾病或状况的药剂中的用途。
[0210] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗疼痛的药剂中的用途。合适地，药剂用于治疗人类受试者中的疼痛。 [0211]在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗慢性疼痛的药剂中的用途。合适地，药剂用于治疗人类受试者中的慢 性疼痛。
[0212] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物在制造用于治疗神经病理性疼痛的药剂中的用途。在特定的实施方案中，神经病理性 疼痛在人类受试者中存在。
[0213] 在特定的方面，本发明提供如本文定义的化合物、或药学上可接受的盐或溶剂化 物在制造用于治疗下背痛的药剂中的用途。在特定的实施方案中，下背痛在人类受试者中 存在。
[0214] 在另一方面，本发明提供如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化 物在制造用于士的宁敏感性的α 1 -甘氨酸受体的选择性、正向变构调节的药剂中的用途。
[0215] 在另一方面，本发明提供在体外或在体内选择性地产生在士的宁敏感性的α?-甘 氨酸受体中的正向变构调节作用的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文定义的化 合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触。
[0216] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的其中士的宁敏感性的 α 1-甘氨酸受体的选择性、正向变构调节是有益的疾病或状况的方法，所述方法包括向所述 患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本 文定义的药物组合物。
[0217] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的疼痛的方法，所述方 法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂 化物、或如本文定义的药物组合物。
[0218] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的慢性疼痛的方法，所 述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受的盐或 溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0219] 在另一方面，本发明提供治疗在需要这样的治疗的患者中的神经病理性疼痛的方 法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文定义的化合物、或其药学上可接受 的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物。
[0220] 施用途径
[0221] 本发明的化合物或包含活性化合物的药物组合物可以通过任何便利的施用途径 被施用至受试者，无论全身地/外周地或局部地(即，在期望的作用的位点处）。
[0222] 施用途径包括但不限于：口服的（例如，通过摄食）；含服的（buccal);舌下的；经皮 的(包括，例如通过贴剂、膏药等等）；跨粘膜的(包括，例如通过贴剂、膏药等等）；鼻内的（例 如，通过鼻喷雾）；眼用的（例如，通过滴眼液）；肺的（例如，通过使用例如经由气雾剂、例如 通过口或鼻的吸入或吹入治疗）；直肠的（例如，通过栓剂或灌肠剂）；阴道的（例如，通过子 宫托）；肠胃外的，例如，通过注射，包括皮下的、真皮内的、肌内的、静脉内的、动脉内的、心 内的、鞘内的、脊柱内的、囊内的、囊下的、眼眶内的、腹膜内的、气管内的、表皮下的、关节内 的、蛛网膜下的和胸骨内的；通过植入储库(depot)或储液器(reservoir)，例如，皮下地或 肌内地。
[0223] 组合治疗
[0224] 本发明的化合物可以作为唯一的疗法被施用以便治疗本文鉴定的疾病或状况.可 选择地，该疗法可以包括施用一种或更多种另外的治疗剂(除了本发明的化合物之外）。
[0225] 例如，在上文中定义的疼痛治疗可以包括作为唯一的疗法的本发明的化合物的使 用或可以除了本发明的化合物之外还包括一种或更多种另外的镇痛剂和/或抗炎剂的施 用。合适的药剂的实例包括非留体抗炎药和鸦片制剂镇痛剂。
[0226] 这样的联合治疗可以通过治疗的单独的组分的同时、相继或分开的给药的方式来 实现。这样的组合产品利用在上文中描述的剂量范围内的本发明的化合物和在其被批准的 剂量范围内的其他的药物活性剂。
[0227] 根据本发明的此方面，提供了适于治疗疼痛(例如，慢性疼痛)的组合，所述组合包 含如在上文中定义的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及另一种药 剂。
[0228] 根据本发明的此方面，提供了适于治疗疼痛(例如，慢性疼痛)的组合，所述组合包 含如在上文中定义的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另一种镇痛 剂。
[0229] 在本发明的另外的方面，提供了与用于治疗疼痛(例如，慢性疼痛）的另一种药剂 组合的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0230] 在本文中，在使用术语"组合"的情况下，应理解，这指的是同时的、分开的或相继 的施用。在本发明的一方面，"组合"指的是同时施用。在本发明的另一方面，"组合"指的是 分开施用。在本发明的另外的方面，"组合"指的是相继施用。在施用是相继或分开的情况 下，在施用第二组分中的延迟不应使得损失组合的有益效果。
[0231] 根据本发明的另外的方面，提供了药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化 合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、另一种药剂(例如，另一种镇痛剂）以及药学上可 接受的稀释剂或载体。
[0232] 附图简述
[0233] 参考附图，本发明被进一步地描述，在附图中：
[0234] 图1示出了在实施例7中描述的表达和电生理学研究中对于化合物LT-01-25的分 级增强(fractional potentiation)(y轴)对浓度(nM;x轴）[Y轴:分级增强-例如，0.75意指 如果对单独的甘氨酸的响应是ΙμΑ，那么在药物的存在下，对甘氨酸的响应是1.75μΑ];
[0235] 图2示出了与拉莫三嗪比较(参见实施例8(i))，化合物LT-01-25对针对以下的缩 足阈值(paw withdrawal threshold)的作用:a)在神经病理性大鼠中的机械压力以及b)在 神经病理性大鼠中的冷(10 °C)的刺激；
[0236] 图3A示出了在禁食的和非禁食的大鼠中，对于以在10%DMS0/10%Solutol/80% 盐水中的1 〇mg/kg给药的LT-01 -25化合物的药代动力学曲线（血浆浓度（y轴）对时间（X 轴)）；
[0237] 图3B示出了在禁食的和非禁食的大鼠中，对于以在SSV中的10mg/kg给药的LT-01- 25化合物的药代动力学曲线(血浆浓度(y轴)对时间(X轴））；
[0238] 图3C示出了在非禁食的大鼠中，对于以在SSV中的10mg/kg给药的LT-01-25和LT- 01 -89(比较物)化合物的药代动力学曲线(血浆浓度(y轴)对时间(X轴））；
[0239] 图4示出了LT-01-25(实施例l;10mg/kg ρ·ο·)和LT-01-89(30mg/kg ρ·ο·)的作用 的比较，该作用是针对a)在神经病理性大鼠中的机械压力的身体同侧的缩足阈值，b)在神 经病理性大鼠中的冷(l〇°C)的刺激的身体同侧的缩回潜伏期。雄性，SD大鼠 。n = 6/组。媒介 *:10%DMS0/10%SolutolHS15/80%&A。
[0240] 图5示出了LT-01-26 (实施例6)对冷（10 °C )的刺激的翻转百分数（percentage reversal)的作用。在所有情况下，禁食的、雄性Wistar大鼠被使用(n = 6/组）。媒介物：10% DMS0/10%Solutol HS15/80%盐水。10ml/kg ρ·ο·单向AN0VA，使用图基HSD检验（Tukey's HSD test)与时间匹配的媒介物组（time-matched vehicle group)比较，*ρ〈0·05、**ρ〈 ο·οι，ν〇·〇〇ι〇
[0241] 图6示出了 a)LT-01_25和b)加巴喷丁对在链脲佐霉素（STZ)诱导的神经病理性大 鼠中的机械性异常痛敏(mechanical allodynia)的效力。在所有情况下，Wistar大鼠被使 用(n = 2-6)。媒介物：10%DMS0+l%Solutol+80%盐水，p.o.l0mg/kg。以下施用的剂量被使 用；加巴喷丁 ： 30mg/kg、60mg/kg在DSS中，p ·〇 · 10ml/kg;以及LT-01-25:3mg/kg、10mg/kg、 30mg/kg 和100mg/kg 在 DSS中，p · ο · 10ml/kg。 实施例
[0242] 实施例1-(4-(羟基)-3,5-二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮(LT-01-25)的合成
[0243] 步骤1-4-羟基-3-5-二异丙基苯甲醛的合成
[0244]
[0245] 将六亚甲基四胺（15 · 8g，56mmol)添加至2，6-二异丙基苯酸（10 · 4mL)在冰醋酸 (50mL)和H20(10mL)中的溶液。将获得的混合物加热至回流持续5分钟并且然后引入短路蒸 馏头(short path distillation head)并且10ml的蒸馏物被收集。允许溶液继续回流持续 6小时并且反应通过TLC来监测。在完成反应之后，将溶液冷却至0°C并且将获得的橙色沉淀 物分离并且用H20(3x50mL)洗涤以提供作为浅橙色固体的产物（10.3g，89%收率）。咕NMR (400MHz,CDC13)59.86(s,1H),7.63(s,2H),5.49(s,lH),3.21(m,2H),1.31(d,J=6.9Hz, 12H) JS: C13H18O2要求206 · 3，实测206 · 3。
[0246] 步骤2-4-(苄氧基)-3，5-二异丙基苯甲醛的合成
[0247]
[0248] 向4-羟基-3-5-二异丙基苯甲醛(4.188,20.3臟〇1)在丙酮(5〇11^)中的溶液添加苄 基溴（2.6mL，22.4mmo 1)和碳酸钾（5.6g，40.6mmo 1)。允许获得的混合物在室温下搅拌持续 18小时并且反应通过TLC来监测。在完成之后，使混合物通过硅藻土过滤并且将溶剂在真空 下除去。产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为灰白色固体的产物(5.3g， 88%收率）</H NMR(400MHz，CDC13)S9.96(s，1H)，7.69(s，5H) ,7.55-7.30(m，2H)，4.85(s， 2!〇,3.64-2.96(111，2!1)，1.27((1，了 = 6.9取，12!1)。]\^:〇2()1124〇2要求：319.1679，实测：319.1674。
[0249] 步骤3-4-(苄氧基)-3,5_二异丙基苯甲酸的合成
[0250]
[0251] 将4-(苄氧基）-3，5-二异丙基苯甲醛（1 · 74g，5 · 87mmol)在一层N2下溶解在THF (5mL)中。将二氧化硒（325mg，2.94mmol)连同过氧化氢（1.5mL，27wt% )-起添加至该溶液 并且将混合物加热至回流持续18小时。在完成之后，添加 Pd/C(10mg)并且允许反应混合物 搅拌持续10分钟。使混合物通过Celite(硅藻土)?过滤并且将溶剂在真空下除去。产物通过 柱色谱法（EtOAc/正己烷）被纯化以提供作为白色固体的产物（1.6g，85 %收率）。咕匪R (400MHz，CDC13)S7.92(s，2H)，7.57-7.27(m，5H)，4.85(s，2H)，3.49-3.24(m，2H)，l.27((1,J =6 · 9Hz，12H) JSEM+Na]、C2QH24O3要求：335 · 1625，实测335 · 1623。
[0252] 步骤4-4-(苄氧基)-3,5_二异丙基苯甲酰氯的合成
[0253] ΟΙ
[0254] 将4_(节氧基）_3,5-二异丙基苯甲酸（200mg，0 · 6mmol)在一层N2下溶解在DCM (5mL)中。将草酰氯(0.1211^，0.72111111〇1)连同01^(来自巴斯德吸管的1滴)一起添加。允许反 应混合物在室温下搅拌持续2小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，将溶剂在真空下 除去。产物不分离并且通过粗品进行。
[0255] 步骤5-(4-(苄氧基)-3,5_二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮的合成
[0256]
[0257] 将吗啉（67yL，0.77mmol)添加至4-(苄氧基）-3,5-二异丙基苯甲酰氯（200mg， 0.64mmol)在DCM(5mL)中的搅拌的溶液。添加 Et3N( 133μ1，9.6mmol)并且允许获得的溶液在 室温下搅拌持续1.5小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，反应混合物用H20(50mL)猝 灭并且用Et0Ac(3x50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgS〇4干燥并且将溶剂在 真空下除去。粗的产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白色固体的产物 (192.9mg，79%收率）</H NMR(400MHz，CDCl3)S7.54-7.33(m，5H)，7.18(s，2H)，4.80(s，2H)， 3 · 73( s，8H) ,3.45-3.27(m，2H)，1.24((1, J = 6.9Hz，12H) 〇MS[M+Na] +:C24H3iN〇3 要求： 404.2202,实测：404.2196。
[0258] 步骤6-(4-(苄氧基)-3,5-二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮(LT-01-25)的合成
[0259]
[0260] 将（4-(节氧基）-3，5-二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮（520mg, 1 · 4mmol)在一层H2下 溶解在MeOH(lOmL)中。添加 Pd/C(32mg，0.27mmol)并且允许反应混合物搅拌持续18小时。在 完成之后，使反应混合物通过Celite?过滤并且将溶剂在真空下除去。粗的产物通过柱色谱 法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白色固体的产物(346mg，85 %收率）。咕NMR(400MHz， CDCl3)57.14(s,2H),5.06(s,lH),3.71(s,8H),3.15(m,2H),1.26(d ,J = 6.9Hz,12H)〇13C 匪以101]\0^，0)(：13)3171.74，151.89，134.12，127.40，123.58,67.30,27.47,23.02。]\^[]\1+ Na] +:Ci7H25N〇3要求：314.1732,实测：314.1725XHN要求C: 70.07%，H: 8.65%，N:4.81%，实 测C:69.05%，H:8.54%，N:4.71 %。
[0261] 实施例2-(R)-(4_(羟基)-3,5-二异丙基苯基）（2-甲基吗啉代）甲酮的合成
[0262] 4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯甲酰氯的合成
[0263]
[0264] 将4_(节氧基）_3,5-二异丙基苯甲酸（200mg，0 · 6mmol)在一层N2下溶解在DCM (5mL)中。将草酰氯(0.1211^，0.72111111〇1)连同01^(来自巴斯德吸管的1滴)一起添加。允许反 应混合物在室温下搅拌持续2小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，将溶剂在真空下 除去。产物不分离并且通过粗品进行。
[0265] (R)-(4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯基）（2_甲基吗啉代）甲酮的合成
[0266]
[0267] 将(R)_2_甲基吗啉盐酸盐（164mg, 1.19mmol)添加至4_(节氧基)-3,5-二异丙基苯 甲酰氯（264mg，0.80mmo 1)在DCM(5mL)中的搅拌的溶液。添加 Et3N(332μ1，2.4mmo 1)并且允 许获得的溶液在室温下搅拌持续1.5小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，反应混合 物用H20(50mL)猝灭并且用Et0Ac(3x 50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgS〇4干 燥并且将溶剂在真空下除去。粗的产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白 色固体的产物（151.7mg，48%收率）</H NMR(400MHz，CDCl3)S7.42(m，5H)，7.18(s，2H)，4.81 (s，2H)，4.07-3.48(m，4H)，3.39(m，2H)，2.96(m，2H)，1.24(d，J=6.9Hz，12H)，1.14(s，3H)。 [0268] (R)-(4_(羟基)-3,5_二异丙基苯基）（2-甲基吗啉代）甲酮的合成
[0269]
[0270] 将(4-(节氧基)-3,5-二异丙基苯基）（吗啉代）甲酮（15〇11^，0.381111]1〇1)在一层H2下 溶解在MeOH(lOmL)中。添加 Pd/C(32mg，0.27mmol)并且允许反应混合物搅拌持续18小时。在 完成之后，使反应混合物通过Celite?过滤并且将溶剂在真空下除去。粗的产物通过柱色谱 法（EtOAc/正己烷）被纯化以提供作为灰白色固体的产物（11 lmg，96 %收率）。咕NMR (400MHz,CDC13)57.13(s,2H),5.17(s,lH),3.74(d,J = 127.9Hz,4H),3.22-3.07(m,2H), 2.74(s, 1H)，1.26(d，J = 6.8Hz，12H) ,1 · 18(s，3H)</3C NMR(101MHz，CDC13)S171.43， 152.11,134.14,126.52,123.21,72.14,66.68,26.88,22.68,18.61 JSEM+Nal'Cisi^NOs 要 求：328.1899，实测：328.1889。(：圆要求(：:70.79%，!1:8.91%少:4.59%，实测(：:70.56%，!1: 8.55% ,N:4.61%
[0271] 实施例3-(3-氟氮杂环丁烷-1-基）（4-羟基-3,5-二异丙基苯基）甲酮的合成
[0272] (4_(苄氧基)_3，5-二异丙基苯基）（3-氟氮杂环丁烷-1-基）甲酮的合成
[0273]
[0274] 将3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(2500mg，2.25mmol)添加至4-(苄氧基)-3，5-二异丙基 苯甲酰氯（如在实施例1中描述的被制备；500mg，1.5mmo 1)在DCM(5mL)中的搅拌的溶液。添 加 Et3N(597μl，4.5mm0l)并且允许获得的溶液在室温下搅拌持续1.5小时。反应通过TLC来 监测并且在完成之后，反应混合物用H20(50mL)猝灭并且用Et0Ac(3x 50mL)萃取。合并的有 机萃取物用盐水洗涤，经MgS04干燥并且将溶剂在真空下除去。粗的产物通过柱色谱法 (EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白色固体的产物(387.4mg，70%收率）。咕NMR(400MHz， CDCl3)S7.53-7.34(m，6H)，5.36(dddd，J=56.8,9.6,6.2,3.5Ηζ，1Η),4.58-4.46(m，2H)， 4.45-4.30(m，2H)，3.44-3.33(m，2H)，1.24(d，J = 6.9Hz，12H)。
[0275] (3-氟氮杂环丁烷-1-基）（4-羟基-3，5-二异丙基苯基）甲酮的合成
[0276]
[0277] 将（4_(苄氧基）-3,5_二异丙基苯基）（3_氟氮杂环丁烷-1-基）甲酮（387mg， 1.05mmol)在一层H2下溶解在MeOH(lOmL)中。添加 Pd/C(32mg，0.27mmol)并且允许反应混合 物搅拌持续18小时。在完成之后，使反应混合物通过Celite?过滤并且将溶剂在真空下除 去。粗的产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷）被纯化以提供作为白色固体的产物（223mg， 76%收率）</H NMR(400MHz，CDC13)S7.36(s，2H)，5.66(s，lH)，5.36(dddd，J = 56.8,9.6， 6.2,3.5Hz,lH),4.58-4.26(m,4H),3.26-3.12(m,2H),1.25(d,J=6.9Hz,12H)〇MS[M+H] +： C16H22FNO3要求:280 · 1711，实ii: 280 · 1707 〇
[0278] 实施例4-(4-(苄氧基)-3,5-二异丙基苯基）（哌啶-1-基）甲酮的合成
[0279] 4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯甲酰氯的合成
[0280]
[0281 ] 将4_(节氧基）_3,5-二异丙基苯甲酸（200mg，0 · 6mmol)在一层N2下溶解在DCM (5mL)中。将草酰氯(0.1211^，0.72111111〇1)连同01^(来自巴斯德吸管的1滴)一起添加。允许反 应混合物在室温下搅拌持续2小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，将溶剂在真空下 除去。产物不分离并且通过粗品进行。
[0282] (4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯基）（哌啶-1-基）甲酮的合成
[0283]
[0284] 将哌啶（230yL，2.25mmol)添加至4-(苄氧基）-3,5-二异丙基苯甲酰氯（500mg， 1.5mmo 1)在DCM(5mL)中的搅拌的溶液。添加 Et3N(31 ΟμL，2.25mmo 1)并且允许获得的溶液在 室温下搅拌持续1.5小时。反应通过TLC来监测并且在完成之后，反应混合物用H20(50mL)猝 灭并且用Et0Ac(3x50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgS〇4干燥并且将溶剂在 真空下除去。粗的产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为灰白色固体的产物 (546mg，95%收率）</H NMR(400MHz，CDCl3)S7.52-7.32(m，5H)，7.16(s，2H)，4.80(s，lH)， 3.71(s,4H),3.35-3.45(m,2H),1.64(d ,J = 43.1Hz,6H),1.23(d ,J = 6.9Hz,12H)〇[M+H] + ] + ： C25H34NO2 要求：380 · 2590，实测：380 · 2575
[0285] (4-羟基-3,5-二异丙基苯基）（哌啶-1-基）甲酮的合成
[0286]
[0287] 将（4-羟基-3，5-二异丙基苯基）（哌啶-1-基）甲酮（520mg, 1.40mmol)在一层H2下 溶解在MeOH(lOmL)中。添加 Pd/C(32mg，0.27mmol)并且允许反应混合物搅拌持续18小时。在 完成之后，使反应混合物通过Celite?过滤并且将溶剂在真空下除去。粗的产物通过柱色谱 法（EtOAc/正己烷）被纯化以提供作为灰白色固体的产物（323mg，80 %收率）。咕NMR (400MHz,CDC13)57.12(s,2H),4.97(s,lH),3.50(s,4H),3.20-3.08(m,2H),1.64(d,J= 33·5Ηζ,1Η),1.26((1, J = 6.9Hz,lH) JSEM+NahCisifcsNO〗要求：290.2120,实测：290.2123。
[0288] 实施例5-(4-羟基-3，5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基）甲酮 的合成
[0289] 4-羟基-3-5-二异丙基苯甲酸的合成
[0290]
[0291 ]将NaCl〇2( 1 · 3g
，14·4mmol)添加至4_羟基-3-5-二异丙基苯甲酸（1 ·0g，4· 8mmo 1)、 NaH2P〇4 (2 · 2g，14 · 4mmo 1)和2-甲基-2-丁烯（9 · 5mL，2M 在 THF 中）在B11OH/H2O (1:1，15mL)中的 溶液。允许反应在室温下搅拌持续16小时。在完成之后，反应混合物用Na2C03 (50mL)稀释并 且用Et0Ac(50mL)洗涤。水层被酸化至pH l(20mL HC1，1M)并且用Et0Ac(3X30mL)萃取。有 机萃取物被收集并且经MgS〇4干燥并且在真空下浓缩以提供产物。产物通过柱色谱法 (EtOAc/正己烷)被纯化以给出作为白色固体的产物（739mg，68 %收率）。咕MIR(400MHz， CDC13)S7.85(s，2H)，5.30(s，lH) ,3.21-3. ll(m，2H)，1.30((1, J = 6.8Hz，12H)</3C 匪R (101MHz,CDCl3)5l72.25,155.07,133.42,126.77,121.39,27.27,22.45〇MS：Ci3Hi8〇3[M+ 順4]+要求240.2，实测240.2。
[0292] 4_(苄氧基)-3,5_二异丙基苯甲酸的合成
[0293]
[0294] wi、卜牛、也·/ 〇 , 〇 一κ、」必斗、τ 既、1 · 74g , 5 · 87mmo 1)在一层 N2 下洛解在 THF (5mL)中。将二氧化硒（325mg，2.94mmol)连同过氧化氢（1.5mL，27wt% )-起添加至该溶液 并且将混合物加热至回流持续18小时。在完成之后，添加 Pd/C(10mg)并且允许反应混合物 搅拌持续10分钟。使混合物通过Ce 1 i te?过滤并且将溶剂在真空下除去。产物通过柱色谱法 ^切六〇/正己烷）被纯化以提供作为白色固体的产物（1.68,85%收率）。1!1匪1?(40(^他， CDC13)S7.92(s，2H)，7.57-7.27(m，5H)，4.85(s，2H) ,3.40(七重峰，J = 6.8Hz，2H)，l .27((1, 】 = 6.8Ηζ，12Η)。13。NMR(101MHz，CDC13)S171.53，158.06，142.57，137.06，128.65，128.19， 127.43，126.77，125.49,76.51，26.76,23.93。]\^[]\1+恥]+:〇2()1124〇3 要求：335.1625,实测： 335.1623
[0295] (4-(苄氧基)-3，5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基）甲酮的合 成
[0296]
[0297] 向4-(苄氧基)-3,5-二异丙基苯甲酸（100mg，0.32mmo 1)在DMF(5mL)中的溶液添加 HATU(180，0 · 48mmo 1)、K2CO3 (220mg，1 · 6mmo 1)和2-氧杂-6-氮杂螺[3 · 3 ]庚烷-6-鑰羧基甲酸 盐（2-〇xa-6_azaspiro[3 · 3]heptan-6_ium carboxyformate) (lOlmg, 0.35mmo 1) 〇允许获得 的溶液搅拌持续1小时。在完成之后，反应混合物用H20(20mL)猝灭并且用EtOAc(3x 30mL) 萃取。合并的有机萃取物用H20(3x 30mL)、盐水(20mL)洗涤，经MgS〇4干燥并且将溶剂在真空 下除去。粗的产物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白色固体的产物(62mg， 50%收率）</H NMR(400MHz，CDC13)S7.54-7.31 (m，7H)，4.83(d，J = 11.7Hz，6H)，4.40((1, J = 42.4Hz，4H) ,3.39(七重峰，J = 6.8Hz，2H)，l .25((1, J = 6.8Hz，12H)</3C NMR(101MHz，CDC13) δ170·82,157.83,142.63,128.66,128.31,127.37,126.60,125.44,72.92,60.89,53.37， 26.39,24.02。]^[]\1+恥]+:〇25出1勵3要求：416.2202，实测：416.2186。
[0298] (4-羟基-3，5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3 ]庚烷-6-基）甲酮的合成
[0299]
[0300] 使（4-(苄氧基）-3,5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基）甲酮 (50mg，0.13mmol)根据在段落[00163]中描述的程序与Pd/C(15mg，0.12mmol)反应。粗的产 物通过柱色谱法(EtOAc/正己烷)被纯化以提供作为白色固体的产物（38mg，99%收率）。咕 NMR(400MHz，CDC13)S7.35(s，2H)，5.43(s，1H)，4.82(s，4H)，4.39(d，J=41.9Hz，4H),3.16 (七重峰，J = 6.8Hz，2H)，1.26((1,J = 6.8Hz，12H)</3C NMR(101MHz，CDC13)S172.27,154.00， 134.78，125.74，125.05,82.10,39.57,28.22,23.79。]\^[]\1+!1] +:(：181126勵3要求：304.1907，实 测：304.1906XHN 要求C:71.26%，Η:8·31%，Ν:4·62%，实测 C:71 ·12%，Η:8·16%，Ν: 4.38%
[0301] 实施例6-(4-羟基-3-5-二异丙基苯基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮的合成
[0302]
[0303] 使4-羟基-3-5-二异丙基苯甲酰氯（160mg，0.66mmo 1)根据一般程序1 (下文）与N- 甲基哌嗪(0.088mL，0.80mmol)反应以提供作为棕色固体的产物。粗的产物通过用Et0Ac磨 碎被纯化（l〇9mg，55%收率hm.p. =154-1561::? Mffi(400MHz，CDCl3)S7.13(s，2H) ,5.18 (s，1H)，3.74(s，4H) ,3.16(七重峰，J = 6.8Hz，2H)，2.44(s，4H)，l .26((1, J = 6.8Hz，12H)</3C NMR(101MHz，CDC13)S171.24，151.59，133.65，127.18，123.19,65.87,54.82,45.78,27.12， 22.62。]\^:(：181128吣〇2要求：305.2229,实测：305.2224XHN要求C: 71.02%，H: 9.27%，N: 9.20%，实测C:68.44%，H:9.03%，N:8.39%。
[0304] 一般程序1-酰胺偶联
[0305] 将合适的吗啉衍生物（1.2当量)添加至酰基氯（1.0当量)溶解在DCM(10mL/g)中的 搅拌的溶液。添加 Et3N(l.5当量)并且允许获得的溶液在室温下搅拌持续1.5小时。反应通 过TLC来监测并且在完成之后，反应混合物用H20(50mL)猝灭并且用Et0Ac(3x 50mL)萃取。 合并的有机萃取物用Na2C03洗涤，经MgS〇4干燥并且将溶剂在真空下除去。
[0306] 实施例7-甘氨酸和GABA受体活性的表达和电生理学表征
[0307] 人胚胎肾（HEK)293细胞(ATCC CRL 1573)和/或爪蟾卵母细胞(Xenopus laevis oocyte)被用于表达被插入到哺乳动物的表达载体中的人类al-3甘氨酸受体亚单位以及人 类al、b3、g2GABA受体亚单位cDNA。来自受体表达细胞的膜片钳和电压钳记录在-70mV的保 持电位下在正常的林格氏溶液中进行并且被数字化用于分析。激动剂诱导的峰值电流（I) 的剂量响应曲线被归一化为获得的最大电流值并且使用高斯-麦克托迭代法（Gauss Marquardt iteration)用反曲式的希尔方程（sigmoidal Hill equation)拟合，其中EC50代 表在一半最大响应中获得的甘氨酸/GABA浓度。在激动剂诱导的电流上测试的化合物的作 用在用相应的化合物浇注(superfuse)细胞持续5秒钟之后、在激动剂应用之前和期间被分 析，并且被调节的电流的剂量响应曲线在引起对应于最大可诱导的电流的20 % (EC2Q值）的 响应的激动剂浓度的存在下被确定。结果表示平均值土s.d.并且数据的显著性使用学生配 对t检验(Student's paired t test)来评估并且在P〈0.05下被视为在统计学上显著的。 [0308]对于实施例1的化合物(LT-01 -25 )，结果在图1中被示出。
[0309]以下EC5Q数据是对于实施例2至实施例6的化合物获得的：
[0310]
L031U 实施例8-对LT-01-25(实施例1)的生物评估
[0312] (i)对于LT-01 -25 (实施例1)的缩足阈值的体内评估
[0313]
[0314] 所有动物程序根据英国动物（科学程序）法案1986 (UK Animals (Scientific Procedures) Act 1986)和有关的指南进行。将雄性Wi star大鼠（初始体重125-149g; Harlan UK Ltd)保持在受控制的光照环境中，四个至一个笼子中并且随意地给以食物和水。
[0315]神经病理性疼痛的引入
[0316]神经病理性疼痛通过坐骨神经的部分的结扎被引入。简略地，将大鼠麻醉（异氟 烷/〇2吸入），左坐骨神经在大腿中部水平下通过小切口暴露并且1/3至1/2的神经厚度紧紧 地结扎在7.0丝缝线(silk suture)内。伤口用皮肤夹(skin clip)闭合。允许动物恢复并且 在手术之后12-15天测试。
[0317] 行为测试:
[0318] 机械性痛觉过敏
[0319] 机械性痛觉过敏(mechanical hyperalgesia)在神经病理性疼痛的模型中通过使 用装备有楔形探针(wedge-shaped probe)(面积 1.75mm2)的压痛仪(Analgesymeter) (Ugo- Bas i 1 e，Mi 1 an)测量对应用于大鼠足的背侧面的逐渐增加的机械力的缩足阈值(PWT)来检 查。截止(cut-off)被设定在250g并且将后足的缩回作为终点。身体同侧的和对侧的缩足读 数都被米集。
[0320] 冷敏感性
[0321 ] 冷敏感性使用商购的冷板(cold-plate)(Ugo Basile,Milan)来评估。冷板根据预 定的校准数据使用表面温度探针来设定以使设定的温度在宽的温度范围内（-5°C至26°C ) 与实际表面温度相关联。允许冷板在测试之前在设定的温度下稳定持续5分钟。缩足潜伏期 用被设定在l〇°C下的冷板来确定。动物被轻微地限制并且每个后足被轮流放置在冷板的表 面上。足的缩回被作为终点并且被记录为对于身体同侧的和对侧的足的缩回潜伏期。30秒 钟的最大截止被用于每个足。
[0322] 测试细节和数据处理
[0323] 缩回阈值和潜伏期在身体同侧的（结扎的）和对侧的（非结扎的）足两者上都被测 量。治疗组被随机化并且盲化。6个大鼠的组被使用。预剂量行为测量通过在神经结扎之后 14天;在药物治疗开始之前测量缩足来获得。在治疗之后，进一步的读数在药物施用和媒介 物施用之后的第1、第2、第4、第6和第24小时被采集。
[0324] 数据被表示为缩回阈值(g)或缩回潜伏期(s)以及根据下式计算的翻转百分数：
[03251
[0326] 一般性观察
[0327] 除了行为疼痛读数之外，每个大鼠还在整个研究中被观察一般行为中的变化。
[0328] 药物施用
[0329] 化合物在包含10%DMS0/10%Solutol HS15/80%盐水的媒介物中被制备。大鼠在 给药之前被禁食过夜。化合物通过在l〇ml/kg体重下的口服强饲法(oral gavage)被施用。 对照动物接受单独的媒介物。
[0330] 将化合物溶液和媒介物溶液编码并且以预剂量随机地分配至动物(编码的A-F)。 数据不编码并且在试验结束时分类。
[0331] 统计学分析
[0332] 使用AN0VA在重复的测量下，随后是使用图基HSD检验的事后分析（post-hoc analysis)，关于缩回阈值读数进行统计学分析。用于统计学显著性的水平被设定为？〈 0.05〇
[0333] 结果
[0334] 结果在图2中被不出。
[0335] LT-01-25化合物产生冷参数（10°C冷板)和机械性参数(足压力）两者的显著的且 持续时间长的翻转。LT-01-25化合物的所有三个剂量都示出良好的且剂量有关的效力。在 机械的条件下的90 %的峰值翻转在3小时时发生并且在冷的条件下的93 %在1小时时发生。 阳性对照，拉莫三嗪，给出在机械和冷中分别65 %和72 %的翻转。
[0336] 因此，LT-01 -25示出对机械性压力的对侧的缩足阈值的明显的增加。在30mg/kg 下，LT-01 -25产生对冷的增加的对侧的缩足潜伏期。
[0337] 没有明显的药物诱导的行为副作用。
[0338] (ii)药代动力学评估
[0339] 化合物-LT-01-25(实施例1)和LT-01-89[比较物：（4-(羟基）-3,5-二叔丁基）（吗 啉代）甲酮]
[0340] 剂量-10mg/kg(5mL/kg)
[0341] 途径-口服
[0342] 媒介物-10%DMS0/10%Solutol 和 SSV
[0343] 时间-24小时
[0344] 程序数-6
[0345] 媒介物
[0346] 10%DMS0/10%Solutol/80% 盐水
[0347] 将化合物称取重量到清洁的小瓶中。
[0348] 将DMS0添加到小瓶中；将小瓶涡旋并且对其声处理持续15分钟。
[0349] 将Solutol HS 15在50°C下加热，直到液体形成，并且然后添加到小瓶中。将小瓶 涡旋持续1-2分钟。
[0350] 将0.9%盐水溶液添加至小瓶。将小瓶涡旋并且然后声处理持续10分钟。
[0351] 标准悬浮媒介物(SSV)
[0352] SSV的溶液使用0 · 5 %羧甲基纤维素钠、0 · 5 %苄醇、0 · 4 % Tween 80 (吐温80)和 98.6%盐水(0.9%)来制备。
[0353] 将化合物称取重量到清洁的小瓶中
[0354] 将SSV溶液添加到小瓶中；将小瓶涡旋并且对其声处理持续15分钟。
[0355] 禁食的大鼠
[0356] 将禁食的大鼠禁食过夜并且在给药之后立即准许获取食物。
[0357] 方案
[0358] 将大鼠手动地限制并且以5mL/kg给以1 Omg/kg 口服剂量的化合物。
[0359] 在指定的时间点（第〇. 25、第0.5、第1、第3、第5、第7和第24小时），大鼠使用异氟烷 被麻醉。
[0360]使用用肝素处理的1.5英寸的针，从尾静脉采集约300yL的血液并且收集到1.5mL eppendorf 管中。
[0361] 在取样之后，将压力应用于刺孔直到流血停止。使动物返回至笼并且准许自由获 取食物和水。
[0362] 将血液样品储存在冰上并且然后在13,000rpm下离心持续15分钟以分离血浆。
[0363] 150yL的血浆用300yL的包含内标的ACN:MeOH(l: 1)溶液处理。然后，将样品在13， OOOrpm下离心持续另外的15分钟。
[0364] 200yL的上清液被收集并且被放置在LC-MS小瓶中用于分析。所有样品被储存在- 80°C 下。
[0365] 莖里
[0366] 在禁食的和非禁食的大鼠中，以在10%DMS0/10%Solutol/80%盐水中的10mg/kg 给药的LT-01 -25化合物的结果在图3A中和在以下示出的表1中被示出。
[0367] 表 1
[0368]
[0369] 在禁食的和非禁食的大鼠中，以在SSV中的10mg/kg给药的LT-01-25化合物的结果 在图3B中和在以下示出的表2中被示出。
[0370] 表 2
[0371]
[0372] 在非禁食的大鼠中，以在SSV中的lOmg/kg给药的LT-01-25和LT-01-89(比较物)化 合物的结果在图3C中和在以下示出的表3中被示出。
[0373] 表 3
[0374]
[0375] (iii)神经病理性疼痛的体内模型:触觉异常痛敏的翻转
[0376] LT-01_25(实施例1)和L1-01-89的比较使用以下方案进行：
[0377] 概述：
[0378] 1)在大鼠中，外周神经病通过在一个后肢中的坐骨神经的部分的结扎来诱导。
[0379] 2)在外周神经病的诱导之后两周（12-15天），稳定的机械性(触觉）异常痛敏在受 影响的肢的后足中被诱导。
[0380] 3)雄性SD大鼠 （n = 8)的五个治疗组被使用：媒介物对照（药物制剂）、3个药物剂 量、和阳性对照，拉莫三嗪(30mg/kg)。动物在组之间被随机化并且试验使用盲化条件进行。 在每个试验中，研究用η = 4/组来分开。
[0381] 4)基线行为测量在手术之前以及在术后的间隔被获得。预剂量行为测量通过在神 经结扎之后12-15天测量缩足阈值来获得。
[0382] 5)化合物效力通过在媒介物/化合物治疗之后，以规定的间隔测量缩足阈值来确 定。
[0383] 方法
[0384]
[0385] 所有动物程序根据英国动物（科学程序）法案1986 (UK Animals (Scientific Procedures) Act 1986)和有关的指南进行。动物被保持在受控制的照明环境中并且随意地 给以食物和水。雄性Sprague Dawley大鼠（120_140g，在手术时)被使用。
[0386] 药物施用
[0387] 将大鼠在自由获取水的情况下禁食过夜并且在给药后4小时被喂食。
[0388] 测试化合物以及拉莫三嗪（30mg/kg，体积：10ml/kg)在指定的制剂（10 %DMS0、 Solutol HS 15/80%和0.9%盐水用于p.o.施用）中被制备并且经由选择的途径被施用。 [0389]神经病理性触觉异常痛敏的诱导
[0390] 异常痛敏在通过坐骨神经的部分的结扎诱导的神经病理性疼痛的模型中被检查， 如由Seltzer等人（1990)描述的。将大鼠麻醉(异氟烷/02吸入），左坐骨神经通过小切口在 大腿中部水平处被暴露并且1/3至1/2的神经厚度紧紧地结扎在7.0丝缝线内。伤口用皮肤 夹闭合。允许动物恢复并且在手术之后12-15天施用化合物。
[0391] 行为测试
[0392]触觉异常痛敏通过测量校准的纤毛机械刺激针(von Frey hairs)的缩回阈值来 评估。因为高于15g的力可以提升足以及引起响应，所以15g代表截止点。将动物放置到能够 到达其足的下面的具有金属网格地板的有机玻璃室中并且允许动物在试验开始之前适应 环境。触觉异常痛敏通过用纤毛机械刺激针以递升顺序的力触及后足的跖面持续多达6秒 钟来测试。如果足急剧地缩回或在移除该针之后有退缩，那么正向响应被记录。一旦正向缩 回响应已经被确立，足就被再测试，以下一个递降的纤毛机械刺激针开始直到没有响应发 生。引起响应所需的最低量的力被记录为缩足阈值(以克计）。
[0393]数据还被表示为最大可能的作用的百分数（％MPE)，被定义为：
[0394] 异常痛敏在化合物施用或媒介物施用之前(预剂量)和之后的设定的时间点（后剂 量），对身体同侧的(结扎的）和对侧的(非结扎的)足两者都进行测量。治疗组被随机化并且 盲化。八个大鼠的组被使用。
[0395] 预剂量行为测量通过在神经结扎之后12-15天;在药物治疗开始之前测量缩足阈 值来获得。
[0396] 化合物/媒介物以规定的剂量被施用。在治疗之后，进一步的读数在p.o.施用之后 的第1、第3、第6和第24小时被采集。
[0397] 统计学分析
[0398] 原始数据使用参数的统计学检验来分析，包括单向方差分析（AN0VA)，随后是 AN0VA的重复的测量的图基事后检验。
[0399] P〈0:05被设定为统计学显著性的水平。
[0400] 参考文献：Seltzer Z，Dubner R，Shir Y.A novel behavioural model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.Pain 1990;43:205±218。
[0401 ] 结果
[0402] 结果在图4和以下表4中被示出：
[0403] 表 4-LT-01-25 和 L1-01-89 的比较
[0404]
[0405] (iv)脑脊髓液(CSF)和血浆水平
[0406]
[0408] 莖里
[0409] 结果在以下表5中被示出。
[0410] 表5-LT-01 -25 和L1 -01 -89 (比较物）的 CSF 数据
[0411]
[0412] (v)微粒体的稳定性数据
[0413] 大鼠和人类微粒体的稳定性数据使用对本领域技术人员确立好的方案来获得。
[0414] 人类微粒体的稳定性方案在下文被详细描述。
[0415] 人类微粒体的数据
[0416] 温育法
[0417] 代谢稳定性测定通过用人肝微粒体一式两份地在37°C和0.4mg/mL蛋白浓度下温 育每个测试化合物（ΙμΜ)来进行。代谢反应通过添加 NADPH再生体系（即，NADPH是CYP450介 导的代谢需要的辅因子）引发并且通过添加乙腈在60分钟温育时间段内的不同时间点被猝 灭。对照样品（不包含NADPH)被包括(并且在2分钟、30分钟和60分钟猝灭）以监测在辅因子 不存在下的可能的降解。样品通过在阳性电喷雾电离下的UPLC-MS(Waters/Micromass Xevo G2QT0F)被分析并且获得在80至1200道尔顿的质量范围内的MS光谱数据。
[0418]
[0419]测试化合物浓度对时间数据被拟合成指数衰减函数以确定底物消耗的一级速率 常数。在其中与一级动力学的清楚的偏差是明显的情况下，仅曲线的开始的线性部分被用 于确定降解速率常数(k)。然后，每个底物消耗速率常数被用于计算：[1 ]降解半衰期，[2]体 外固有清除率值(CLint，体外）；[3]预测的体内肝固有清除率值(CLint); [4]预测的体内血 液清除率值(CL血液(CLb 1 ood));以及[5 ]预测的体内肝提取率(EH)。
[0425] $以下换算因数a在以上计算中被假定：
[0426]
[0427] a Ring等人（2011)Journal of Pharmaceutical Sciences, 100:4090-4110。
[0428] 注解：
[0429] 固有清除率的计算基于"体外Ti/2法"（Obach，1999，Drug Metab .Dispos · 27:1350- 1359)，该方法假定：
[0430] 1)使用的底物浓度大大低于底物更新(substrate turnover)的表观Km;并且
[0431] 2)既没有明显的产物抑制，也没有任何酶的基于机制的失活。
[0432] 肝微粒体在预测体内肝提取率中的使用具有两个另外的固有的假定（Obach， 1999)，该假定：
[0433] 1 )NADPH依赖性氧化代谢对其他代谢途径（即，直接辄合的代谢、还原、水解等等） 占优势;并且，
[0434] 2)代谢速率和体外酶活性真实地反应体内存在的那些代谢速率和酶活性。
[0435] 数据应该被认为在引用的这些术语内。
[0436] 此测定的灵敏度的限值对应于在测定持续时间段内的15%的化合物损失。对于在 60分钟内示出〈15 %损失的化合物（即，降解半衰期>247分钟），基于0.4mg/mL微粒体蛋白浓 度的代谢稳定性参数被报告如下：
[0437]
[0438] 莖里
[0439] 对于大鼠和人类微粒体研究的结果在以下表6中被示出：
[0440]表6-对于LT-01 -25和L1 -01 -89 (比较物)的大鼠和人类微粒体的数据
[0441]
[0442] 实施例9-LT-01_26(实施例6)的生物评估
[0443] LT-01-26对冷(10°C)刺激的翻转百分数的作用使用在以上实施例8，（iii)部分中 描述的方案来调查。在所有情况下，禁食的、雄性Wistar大鼠被使用(n = 6/组）。媒介物是 10%DMSO/ 10%Solutol HS15/80%盐水。10ml/kg ρ·ο·被施用。结果经受单向AN0VA，使用 图基HSD检验与时间匹配的媒介物组比较，*p〈0.05，p〈0.01，*p〈0.001。
[0444] 结果
[0445 ]结果在图5中被不出。
[0446] 实施例10-链脲菌素诱导的糖尿病性神经病理性疼痛模型
[0447] LT-01-25对在链脲菌素(STZ)诱导的神经病理性大鼠中的机械性异常痛敏的效力 使用在下文描述的方法学来测量。还产生加巴喷丁 (Gbp)的效力的比较数据。
[0448] 友迭
[0449] 机械性异常痛敏使用后足缩回阈值(PWT)，使用纤毛机械刺激针测试来测量。在所 有情况下，Wi s tar大鼠（~200g，SLAC)被使用。链脲菌素(从Si gma获得)在时间零点（0天)被 腹腔内地注射(IP注射）。有效量的60mg/kg的链脲菌素被注射。然后，PWT测试和血糖测试在 7天之后(空白（BL))，在媒介物或化合物被施用之前被测量并且另外的PWT测量在第1、第3、 第4和第6小时，在媒介物施用或化合物施用之后第1、第3和第6小时或第3、第6、第9和第12 小时被进行。
[0450] 使用的化合物:
[0451 ]媒介物II(DSS): 10%DMS0+1 %Solutol+80%盐水，ρ·〇· 10mg/kg
[0452] 加巴喷丁 ： 30mg/kg、60mg/kg 在 DSS中，p · ο · 10ml/kg
[0453] LT-01-25:3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg在DSS中，p·ο·10ml/kg
[0454] 莖里
[0455] 结果在图6(a)和图6(b)中被示出。
【主权项】
1. 一种W下示出的式(I)的化合物：其中： Q选自：其中： WWV指示至所述式I的化合物的c(=〇)部分的附接点； 化、R2a、R2b和R3各自独立地选自氨、面素、甲基、径甲基、CF3和0CF3 ;或R2a和R2b被连接，使 得它们一起形成4元、5元或6元的碳环或杂环； R4和Rs各自独立地选自氨、面素、甲基、径甲基、CF3和0C的； R6和R?各自独立地选自氨、面素、甲基、径甲基、CF沸0肌； R8和R9各自独立地选自氨、甲基、CF3、面素、径甲基和0C的； Rio和Rii各自独立地选自氨、甲基、肌、面素、径甲基和0CF3; 化2选自氨、（1-4C)烷基或（1-4C)面代烷基； 或其药学上可接受的盐。2. 根据权利要求1所述的化合物，其中Rl、R2a、R2b和R3各自独立地选自氨、氣或甲基；或 尺23和1?26被连接，使得它们一起形成4元或5元的碳环或杂环。 3 .根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中Rl、R2a、R2b和R3全部是氨;或R2a和R2b 被连接，使得它们一起形成4元或5元的杂环。4. 根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中Rl、R2a、R2b和R3中的一个或两个是不 同于氨的取代基。5. 根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中化和R3是氨并且R2a和R2b中的一个是 氣。6. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4和Rs各自独立地选自氨、氣或甲 基。7. 根据权利要求6所述的化合物，其中R4和Rs两者都是氨。8. 根据权利要求6所述的化合物，其中R4和Rs中的一个是氣或甲基并且另一个是氨。9. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R6和R?各自独立地选自氨、氣或甲 基。10. 根据权利要求9所述的化合物，其中R6和R?两者都是氨。11. 根据权利要求9所述的化合物，其中R6和R?中的一个是氣或甲基并且另一个是氨。12. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R8和R9各自独立地选自氨或甲基。13. 根据权利要求12所述的化合物，其中Rs和R9两者都是氨。14. 根据权利要求12所述的化合物，其中R8和R9中的一个是甲基并且另一个是氨。15. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中化0和Rii各自独立地选自氨、氣或甲 基。16. 根据权利要求15所述的化合物，其中化0和化1中的一个是氣或甲基并且另一个是氨。17. 根据权利要求15所述的化合物，其中化0和化巧者都是氨。18. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中化2是甲基。19. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物，所述化合物选自W下中的任何一个： (4-巧圣基)-3,5-二异丙基苯基）（吗嘟代）甲酬； (的-(4-巧圣基)-3,5-二异丙基苯基K2-甲基吗嘟代）甲酬； (3-氣氮杂环下烧-1-基）（4-径基-3，5-二异丙基苯基）甲酬； (4-(节氧基)-3,5-二异丙基苯基）（赃晚-1-基）甲酬； (4-径基-3，5-二异丙基苯基）（2-氧杂-6-氮杂螺[3.3 ]庚烧-6-基）甲酬； (4-径基-3-5-二异丙基苯基）（4-甲基赃嗦-1-基）甲酬； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物。20. -种药物组合物，包含在与药学上可接受的稀释剂或载体的渗合物中的根据权利 要求1至19的化合物或其药学上可接受的盐。21. 如在权利要求1至19中任一项定义的化合物、或其药学上可接受的盐、或根据权利 要求20的药物组合物，用于治疗。22. 如在权利要求1至19中任一项定义的化合物、或其药学上可接受的盐、或根据权利 要求20的药物组合物，用于治疗慢性疼痛。23. 如在权利要求1至19中任一项定义的化合物、或其药学上可接受的盐、或根据权利 要求20的药物组合物，用作麻醉剂。24. -种治疗在需要运样的治疗的患者中的慢性疼痛或诱导在需要运样的治疗的患者 中的麻醉的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19的化合 物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据权利要求20的药物组合物。25. -种合成式I的化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，所述方法包括： a)使式A的化合物其中X是反应性基团，例如氯;并且径基任选地被保护； 与式B的化合物反应： H-Q 其中Q是如在上文中定义的并且Η原子被附接至Q基团的氮原子；W及 b)任选地此后，并且如有必要： i) 除去存在的任何保护基； ii) 将所述式I的化合物转化成另一种式I的化合物;和/或 iii) 形成其药学上可接受的盐或溶剂化物。
【文档编号】A61K31/4453GK105849088SQ201480070720
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2014年12月23日
【发明人】M·洛伊韦尔, P·奥尼尔, N·贝里, 钱德拉卡拉·皮达萨拉
【申请人】利物浦大学