作为免疫调节剂的1，3，4-*二唑和1，3，4-噻二唑衍生物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及作为治疗剂的能够抑制程序性细胞死亡1(PD1)信号传导通路的1，3，4?二唑和1，3，4?噻二唑化合物。本发明还涉及治疗剂的衍生物。本发明还包括所述治疗剂和衍生物用于经由包括抑制由PD?1、PD?L1或PD?L2诱发的免疫抑制信号在内的免疫增强作用治疗病症的用途和使用它们的疗法。
【专利说明】作为免疫调节剂的1，3,4-噁二唑和1，3,4-噻二唑衍生物
[0001 ]本申请要求2013年9月6日提交的印度临时申请号4012/CHE/2013的权益；其在此 通过参考结合。
技术领域
[0002] 本发明涉及1，3，4-卩恶二唑和1，3，4_噻二唑化合物，其在治疗上用作免疫调节剂。 本发明还涉及作为治疗剂的包含所述1，3，4-卩恶二唑和1，3，4-噻二唑化合物的药物组合物。
[0003] 发明背景
[0004] 程序性细胞死亡-l(PD-l)是CD28超家族的成员，其与它的两种配体，PD-L1或PD- L2相互作用时递送负性信号。PD-1和其配体广泛表达并且与其他⑶28成员相比，在T细胞活 化和耐受方面发挥更宽范围的免疫调节作用。PD-1和其配体参与减弱感染性免疫和肿瘤免 疫，并且促进慢性感染和肿瘤进展。PD-1和其配体的生物学重要性提示了PD-1通路的操作 对各种人类疾病的治疗可能性（Ariel Pedoeem等人，Curr Top Microbiol Immunol. (2011)；350：17-37)〇
[0005] T细胞活化和功能失调依赖于直接和调节的受体。基于它们的功能结果，共信号转 导分子可以分为共刺激剂和共抑制剂，其正面和负面控制T细胞应答的启动、生长、分化和 功能成熟（Li Shi，等人，Journal of Hematology & Oncology 2013,6:74)〇
[0006] 阻断程序性细胞死亡蛋白-l(PD-l)免疫检查点通路的治疗性抗体阻止T细胞下调 并且促进针对癌症的免疫应答。多种ro-ι通路抑制剂在临床实验的各个阶段显示出强烈的 活性（RD Harvey，Clinical Pharmacology & Therapeutics(2014);96 2,214_223)〇
[0007] 程序性死亡-l(PD-l)是T细胞主要表达的共受体。PD-1与其配体，PD-L1或PD-L2的 结合，对于免疫系统的生理调节至关重要。PD-1信号传导通路的主要功能作用是抑制自反 应性τ细胞，其用于保护免于自身免疫性疾病。因此ro-i通路的消除可以导致免疫耐受的破 坏，其可以最终导致发展出病理性自身免疫。相反，肿瘤细胞有时可以指定ro-i通路逃脱免 疫监督机制。因此，阻断ro-i通路已经变为癌症治疗的有吸引力的靶点。目前的方法包括六 种药剂，其是靶向PD-1和PD-L1的中和抗体或融合蛋白。多于四十个临床试验在进行中，以 更好地定义Η)-1阻断在多种肿瘤类型中的作用(Hyun-Tak Jin等人，Clinical Immunology (Amsterdam,Netherlands)(2014),153(1),145-152)〇
[0008] 国际申请TO 01/14557、W0 02/079499、W0 2002/086083、W0 03/042402、W0 2004/ 004771、W0 2004/056875、TO2006121168、W02008156712、W02010077634、W02011066389、 W02014055897、W02014059173、W02014100079 和美国专利 US08735553 报道了 PD-1 或 PD-L1 抑 制性抗体或融合蛋白。
[0009] 此外，国际申请W02011161699、W02012/168944、W02013144704 和 W02013132317 报 道了能够压制和/或抑制程序性细胞死亡i(roi)信号传导通路的肽或肽类化合物。
[0010]然而，对ro-i通路的更有效、更好和/或选择性的免疫调节剂，仍然存在需要。本发 明提供1，3，4-卩恶二唑和1，3，4-噻二唑化合物，这些化合物能够压制和/或抑制程序性细胞 死亡i(roi)信号传导通路。
[0011] 发明概述
[0012] 根据本发明，提供的1，3，4-卩恶二唑和1，3，4-噻二唑化合物或其药用盐或立体异构 体，它们能够压制和/或抑制程序性细胞死亡i(roi)信号传导通路。
[0013] 在一个方面，本发明提供式(I)的1，3，4-卩恶二唑和1，3，4-噻二唑化合物：
[0014]
[0015] 其中，
[0016] Rl是选自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的侧链；
[0017] X是 S或 0;
[0018] R2 是氢或-CO-Aaa;
[0019] Aaa是选自Ser，Asn或Thr的氨基酸残基;其中其c-末端是游离末端、是被酰胺化的 或是被酯化的；
[0020] R3是选自36!'，厶]^，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的侧链；
[0021]----是任选的键；
[0022] R4和R5独立地是氢或不存在；
[0023]或其药用盐或立体异构体。
[0024] 在本发明的进一步方面，其涉及包含式（I)的化合物或药用盐或立体异构体的药 物组合物和用于制备其的方法。
[0025] 在本发明的再其他方面，其提供式（I)的1，3，4-噁二唑和1，3，4-噻二唑化合物或 其药用盐或立体异构体的用途，它们能够压制和/或抑制程序性细胞死亡i(roi)信号传导 通路。
[0026] 发明详述
[0027] 本发明提供作为治疗剂的1，3，4-噁二唑和1，3，4-噻二唑化合物，用于经由包括抑 制由H)-1、PD-L1或TO-L2诱发的免疫抑制信号的免疫增强作用治疗，并且提供使用它们的 疗法。
[0028]通过解释本发明的方式，并且不是通过限制本发明的方式，提供各个实施方案。实 际上，对于本领域技术人员而言将显而易见的是，在本发明中，在不偏离本发明的范围和精 神的情况下，可以进行各种改进和变化。例如，作为一个实施方案的部分说明或描述的特征 可以用于另一实施方案以获得更进一步的实施方案。因此，意在本发明覆盖这样的改进和 变化，如在所附权利要求和其对等物的范围内。本发明的其他目标、特征和方面在以下详述 中公开，或从以下详述显而易见。本领域技术人员要理解，本讨论仅是示例性实施方案的描 述，并且不理解为限制本发明的较宽范围。
[0029]在一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物
[0030]
[0031] 其中，
[0032] Rl是选自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的侧链；
[0033] X是 S或 0;
[0034] R2 是氢或-C〇-Aaa;
[0035] Aaa是选自Ser，Asn或Thr的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酰胺化的 或是被酯化的；
[0036] R3是选自36!'，厶]^，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的侧链；
[0037]是任选的键；
[0038] R4和R5独立地是氢或不存在；
[0039]或其药用盐或立体异构体。
[0040] 亦另一窀施方蓥中，太发明榲供式（IA)的化合物
[0041]
[0042]或其药用盐或立体异构体;其中，
[0043] Rl是选自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的侧链；
[0044] X是 S或 0;
[0045] R2 是氢或-CO-Aaa;
[0046] R3是选自Ser，Ala，Glu，Gln，Asn或Asp的氨基酸的侧链；
[0047] Aaa是选自Ser，Asn或Thr的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酰胺化的 或是被酯化的。
[0048] 在另一审讲一步的实施方案中，本发明提供式（IB)的化合物
[0049]
[0055]
[0056] 或其药用盐或立体异构体;其中，
[0057] Rl是选自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的侧链；
[0058] R3是选自361'，厶1&，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的侧链；
[0059] Aaa是选自Ser，Asn或Thr的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酰胺化的 或是被酯化的。
[0060]在另一更进一步的实施方案中，本发明提供式(I)的化合物，其中，
[0061 ] Ri是Ser或Thr的侧链；
[0062] R2 是-CO-Aaa;
[0063] Aaa是氨基酸残基Ser或Thr;其中C-末端是游离的；
[0064] R3 是 Asn，Gin，Glu 或 Asp 的侧链。
[0065] 以下实施方案说明本发明并且不意在将权利要求限制于所举例说明的具体实施 方案。
[0066] 根据一个实施方案，具体提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中X是0。
[0067]根据另一实施方案，具体提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中X是S。
[0068] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中R2是氢。
[0069] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)的化合物，其中RjPR5是氢。
[0070] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)的化合物，其中R4和抱不存在。
[0071] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)的化合物，其中办是-〇)-5#。
[0072]根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)的化合物，其中办是-〇)-11^。
[0073]根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中办是 Ser的侧链。
[0074]根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中办是 Thr的侧链。
[0075]根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA))和(1C)的化合物，其中心是?以， Ala或Asn的侧链。
[0076]根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中R3是 Asn的侧链。
[0077] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)和（IB)的化合物，其中R3是Ser的 侧链。
[0078] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Gin的 侧链。
[0079] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Glu的 侧链。
[0080] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Ala或 Asp的侧链。
[0081] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(IB)和(1C)的化合物，其中Aaa是Ser。
[0082] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(1C)的化合物，其中Aaa是Thr。
[0083] 根据再另一实施方案，具体提供的是式(I)、（IA)和（IB)的化合物，其中一种、多种 或全部氨基酸是D氨基酸。
[0084] 在一个实施方案中，在没有任何限制的情况下，式（I)的具体化合物被列举在表 ⑴中：
[0085] 表 1
[0086]
[0087]
[0088]
[0089]或其药用盐或其立体异构体。
[0090]配制本发明中公开的化合物用于药物施用。
[0091] 在一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含所公开的化合物，和药用 载体或稀释剂。
[0092] 在另一个实施方案中，所述药物组合物还包含至少一种抗癌剂、化疗剂或抗增殖 化合物。
[0093]在一个实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用作药物。
[0094]在另一个实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用作用于治疗癌症 或感染性疾病的药物。
[0095] 在另一个实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用作药物，所述药物 用于治疗骨癌、头或颈癌、胰腺癌、皮肤癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠 癌、肛门区域癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍 奇金病(Hodgkin's Desease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's Desease)、食道癌、小肠 癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性 或急性白血病，包括急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋 巴细胞白血病、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经 系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波 济氏肉瘤、表皮样癌、鳞状上皮细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症，包括石棉诱发的癌 症、和所述癌症的组合。
[0096] 在另一实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用于治疗癌症。
[0097] 在另一实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用于治疗感染性疾病。
[0098] 在一实施方案中，本发明提供本发明所公开的化合物，其用作药物，所述药物用于 治疗细菌感染性疾病、病毒感染性疾病或真菌感染性疾病。
[0099] 在一实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，其中所述方法包括向需要其 的受治疗者施用有效量的本发明的化合物。
[0100]在另一实施方案中，本发明提供一种调节受治疗者中由ro-i信号传导通路介导的 免疫应答的方法，其包括向受治疗者施用治疗有效量本发明的化合物，从而调节受治疗者 中的免疫应答。
[0101] 在另一实施方案，本发明提供抑制受治疗者中肿瘤细胞生长和/或迀移的方法，其 包括向受治疗者施用治疗有效量的能够抑制程序性细胞死亡1(PD1)信号传导通路的本发 明的化合物。
[0102] 所述肿瘤细胞包括癌症，比如但不限于骨癌、头或颈癌、胰腺癌、皮肤癌、皮肤或眼 内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫 内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统 癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病 (包括急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血 病）、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS) 肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤、 表皮样癌、鳞状上皮细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括石棉诱发的癌症）、和所述 癌症的组合。
[0103] 在另一更进一步的实施方案中，本发明提供治疗受治疗者中的感染性疾病的方 法，其包括向受治疗者施用治疗有效量的能够抑制程序性细胞死亡i(roi)信号传导通路的 本发明的化合物，从而对受治疗者治疗感染性疾病。
[0104] 本发明的另一更进一步实施方案提供治疗受治疗者中的细菌、病毒和真菌感染的 方法，其包括向受治疗者施用治疗有效量的能够抑制程序性细胞死亡1(PD1)信号传导通路 的本发明的化合物，从而对受治疗者治疗细菌、病毒和真菌感染。
[0105] 感染性疾病包括但不限于HIV、流感、疱疹、贾第虫、疟疾、利什曼原虫、由肝炎病毒 (A、B、&C)导致的致病感染、疱疹病毒（例如、VZV、HSV-I、HAV-6、HSV-lUPCMV、EB(Epstein Barr)病毒）、腺病毒、流感病毒、虫媒病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸 道合胞体病毒、聰腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病 毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、JC病毒和虫媒病毒脑 炎病毒、细菌衣原体导致的致病感染、立克次体细菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球 菌(pneumonococci)、脑膜炎球菌和conococci、克雷白氏杆菌、变形杆菌、沙雷氏菌、假单胞 菌、大肠杆菌、军团杆菌、白喉、沙门氏菌、杆菌、霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、细螺旋 体病、和莱姆病细菌，以下真菌引起的致病感染:假丝酵母（白色假丝酵母、克鲁斯假丝酵母 (1〇'1186；〇、光滑假丝酵母(8131?^七3)、热带假丝酵母(1：1'(^；[03118)等）、新型隐球菌、曲霉属 (烟曲霉（fumigatus)、黑曲霉（niger)等）、毛霉属（毛霉菌、腐化米霉菌、根霉 (rhizophus))、申克抱子丝菌、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西副球抱子菌 (Paracoccidioides brasiliensis)、粗球抱子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞 衆菌（Histoplasma capsulaturn)，和由以下寄生虫导致的致病感染：痢疾内变形虫 (Entamoeba histolytica)、结肠小袋虫（Balantidium coli)、福纳氏虫 (Naegleriafowleri)、棘变形虫（Acanthamoeba sp·)、吸晚贾第虫（Girdia lambia)、隐抱 子虫（Cryptosporidium sp·)、卡氏肺囊虫（Pneumocystis carinii)、间日症原虫 (Plasmodium vivax)、果氏巴贝虫（Babesia microti)、布鲁斯维虫（Trypanosoma brucei)、克鲁斯维虫（Trypanosoma cruzi)、多氏利什曼原虫（Leishmania donovani)、鼠 弓衆虫(Toxoplasma gondi)、巴西曰圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。
[0106] 本发明的化合物可以用作单个药物或作为药物组合物，其中将所述化合物与不同 药用材料混合。
[0107] 药物组合物通常通过口服或吸入途径施用，但可以通过肠胃外施用途径施用。在 本发明的实践中，组合物可以例如通过口服、静脉输注、外用、腹膜内、膀胱内或鞘内施用。 肠胃外施用的实例包括但不限于关节内（在关节中）、静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、和皮下 途径，包括水性和非水性的等渗无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得 制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液(其可以包括悬浮剂、 增溶剂、增稠剂、稳定剂、和防腐剂）。口服施用、肠胃外施用、皮下施用和静脉施用是优选的 施用方法。
[0108] 本发明的化合物的剂量根据年龄、重量、症状、疗效、剂量给药方案和/或治疗次数 而变化。通常，在成人的情况下，它们可以通过口服或吸入途径，以lmg至100mg/次的量，数 天一次、3天一次、2天一次、一天一次、一天多次施用，或通过口服或吸入的途径一天连续施 用1至24小时。因为剂量受各种条件影响，小于上述剂量的量有时可以足够好地起作用，或 在一些情况下可以需要较高剂量。
[0109] 本发明的化合物可以与其他药物联合施用，以用于（1)本发明的预防性和/或治疗 性药物的预防和/或治疗功效的补充和/或增强，（2)本发明的预防性和/或治疗性药物的动 力学、吸收改善、剂量减少，和/或(3)本发明的预防性和/或治疗性药物的副作用的减少。
[0110] 包含本发明的化合物和其他药物的伴随药物（concomitant medicine)可以作为 其中在单个制剂中含有两种成分的组合制剂施用，或以分开的制剂施用。通过分开的制剂 施用包括同时施用和间隔一些时间施用。在间隔一些时间施用的情况下，可以首先施用本 发明的化合物，接着施用另一药物，或可以首先施用另一药物，然后施用本发明的化合物。 各个药物的施用方法可以相同或不同。
[0111] 基于已经在临床使用的剂量，可以适当选择其他药物的剂量。可以根据要施用的 受治疗者的年龄和体重、施用方法、施用时间、要治疗的病症、症状和其组合适当选择本发 明的化合物和其他药物的复合比例。例如，基于1质量份的本发明的化合物，其他药物可以 以0.01至100质量份的量使用。其他药物可以是适当比例的两种或更多种任意药物的组合。 基于上述机制，补充和/或增强本发明的化合物的预防性和/或治疗性功效的其他药物不仅 包括已经发现的那些，而且包括未来将要发现的那些。
[0112] 该伴随使用发挥预防性和/或治疗性作用所针对的疾病不特别限制。伴随药物可 以用于任何疾病，只要其补充和/或增强本发明的化合物的预防性和/或治疗性功效即可。
[0113] 本发明的一种或多种化合物可以与现有化疗剂同时使用或以混合形式使用。化疗 剂的实例包括烷基化剂、亚硝基脲剂、抗代谢物、抗癌抗体、植物来源的生物碱、拓扑异构酶 抑制剂、激素药物、激素拮抗剂、芳香酶抑制剂、P-糖蛋白抑制剂、钼配合物衍生物、其他免 疫治疗性药物和其他抗癌药物。此外，其可以与癌症治疗辅助剂，如白细胞减少症(嗜中性 白血球减少症)治疗药物、血小板减少症治疗药物、止吐和癌症疼痛干预药物，同时使用或 以混合形式一起使用。
[0114] 在一实施方案中，本发明的一种或多种化合物可以与其他免疫调节剂和/或增效 剂同时或以混合形式一起使用。免疫调节剂的实例包括各种细胞因子、疫苗和佐剂。刺激免 疫应答的这些细胞因子、疫苗和佐剂的实例包括但不限于 β或 γ ，IL-l，IL-2，IL-3，IL-12，Poly(I:C)^PCPG。
[0115] 在另一个实施方案中，增效剂包括环磷酰胺和环磷酰胺的类似物，抗-TGF0和伊马 替尼（Imatinib) (Gleevac)，有丝分裂抑制剂，如紫杉醇，舒尼替尼(Sunitinib) (Sutent)或 其他抗血管生成剂，芳香酶抑制剂，如来曲唑，A2a腺苷受体(A2AR)拮抗剂，血管生成抑制 剂，蒽环类抗生素，奥沙利钼(oxaliplatin)，阿霉素(doxorubicin)，TLR4诘抗剂，和IL-18 拮抗剂。
[0116] 除非另有限定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本文中的主题术语的领域 中的通常所理解的相同的意义。如本文中所使用的，提供以下定义以帮助理解本发明。
[0117] 如本文中所使用的，术语'一种或多种化合物'是指本发明中公开的化合物。
[0118] 如本文中所使用的，术语"包含(comprise)"或"包含(comprising)"通常以包括的 意义使用，即允许存在一个或多个特征或成分。
[0119]如本文中所使用的，术语"包括(including)"以及其他形式，如"包括（include)"， "包括（includes)"，和"包括（included)"不受限制。
[0120] 如本文中所使用的，术语"氨基"是指-NH2基团。除非有相反解释或陈述，本文描述 和要求的所有氨基均可以是取代的或未取代的。
[0121] 如本文中所使用的，术语"氨基酸"是指在α碳具有L或D立体化学的氨基酸。
[0122] 采用"药用盐"意为包括其一种盐的形式的式（I)的化合物活性成分，尤其是如果 与之前使用的活性成分的游离形式或活性成分的任何其他盐形式相比，该盐形式赋予该活 性成分改善的药物代谢动力学性质。活性成分药用盐形式还可以首次为该活性成分提供其 之前不具有的所需的药物代谢动力学性质，并且可以甚至就其在体内的治疗功效而言对该 活性成分的药物代谢动力学具有积极影响。
[0123] 〃药用〃意为其可以用于制备通常安全、无毒的、并且既不是生物学上不希望的也 不是其他方面不希望的药物组合物，并且包括其适于兽用以及人药用。
[0124] 术语"立体异构体"是指式（I)的化合物的任何对映异构体、非对映异构体或几何 异构体(不论它们在何处具有手性或它们何时带有一个或多个双键）。当式（I)的化合物和 相关分子式是手性的时，它们可以以外消旋或以光学活性形式存在。因为根据本发明的化 合物的外消旋物或立体异构体的药学活性可能不同，可能希望使用对映异构体。在这些情 况下，可以通过本领域技术人员已知的化学或物理方法将终产物或甚至中间体分离为对映 异构化合物或甚至以原样在合成中使用。在外消旋胺的情况下，非对映异构体通过与光学 活性拆分剂反应从所述混合物形成。适当的拆分剂的实例是光学活性酸如R和S形式的酒石 酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、合适的N-保护的氨基酸(例 如N-苯甲酰基脯氨酸或N-苯黄酰基脯氨酸），或各种光学活性樟脑磺酸。此外有利的是在光 学活性拆分剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸，三乙酸纤维素或碳水化 合物的其他衍生物或手性衍生的甲基丙烯酸聚合物)的帮助下的色谱对映异构体拆分。
[0125] 术语〃受治疗者〃包括哺乳动物(特别是人)和其他动物，如驯养动物(例如，家庭宠 物，包括猫和狗)和非驯养动物(如野生动物）。
[0126] "治疗有效量"或"有效量"是指本发明的一种或多种化合物（i)治疗或预防特定疾 病、病症或综合征（ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或综合征的一个或多个症状或 (iii)阻止或延迟本文所述的特定疾病、病症或综合征的一个或多个症状的开始的足够量。 在癌症的情况下，治疗有效量的药物可以减少癌细胞的数量;降低癌尺寸;抑制（即，减慢到 一定程度或备选地终止)癌细胞浸润入周围器官;压制（即，减慢到一定程度或备选地终止） 肿瘤转移；一定程度上抑制肿瘤生长；和/或一定程度上缓解与癌症相关的一个或多个症 状。在感染性疾病状态的情况下，治疗有效量是足以降低或缓解感染性疾病（由细菌、病毒 和真菌引起的感染症状)的量。
[0127] 天然存在氨基酸在全文中均由下表2中指出的常规三字母缩写标识。
[0128] 表2 (氨基酸编码）
[0129]
[0130]本文整个说明书中使用的缩写可以被总结在下文中，其具有它们的特定意义。 [0131]。(:（摄氏度）J(delta); % (百分数）；盐水(NaCl溶液）；CH2C12/DCM(二氯甲烷）；br s(宽的单重峰）；Cs2C03(碳酸铯）；d(双重峰）；DMF(二甲基甲酰胺）；DMS0(二甲亚砜）；DMS〇- d6(氘化DMS0);EDC.HCl/EDCI(l-(3-二甲基氨基丙基）-3-碳二亚胺盐酸盐）；Et2NH(二乙 胺）；Fm〇c(芴基甲氧基碳酰氯）；g或gr(克）；!1或!12(氢）；H20(水）；H0Bt/H0BT(l-羟基苯并三 唑）；HC1 (盐酸）；h或hr (小时）；Hz (赫兹）；HPLC(高效液相色谱）；12(碘）；ΚΚ03 (碳酸钾）； LCMS(液相色谱质谱）;MeOH(甲醇）;mmol(毫摩）;Μ(摩尔）；μL(微升）;mL(毫升）;mg(毫克）;m (多重峰）；MHz (兆赫）；MS(ES)(质谱-电喷雾）；min.(分钟）；Na(钠）；NaHC03(碳酸氢钠）； ΝΗ2ΝΗ2.Η20(水合肼）；NMM(N-甲基吗啉）；Na 2S〇4(硫酸钠）；N2(氮）；NMR(核磁共振谱）；ro-Ll (程序性死亡-配体1);H)-L2(程序性细胞死亡1配体2);制备型HPLC/制备型HPLC(制备型高 效液相色谱）；S(单重峰）；沱11 (叔丁基）；TEA/Et3N(三乙胺）；TLC(薄层色谱）；THF(四氢呋 喃）；TIPS(三异丙基硅烷）；TFA/CF3COOH(三氟乙酸）；t(三重峰）；tR=(保留时间）；TPP(三苯 基勝）；等。
[0132] 实验
[0133] 本发明的实施方案提供使用适当材料的根据以下实施例的式（I)的化合物的制 备。本领域技术人员将理解，以下制备程序的条件和方法的已知改变可以用于制备这些化 合物。此外，通过详细描述的步骤，本领域技术人员可以制备本发明的其他化合物。
[0134] 起始材料通常从商业来源，比如从美国或德国的Sigma-Aldrich ;美国的Chem- Impex;中国的G.L.Biochem和印度的Spectrochem获得。
[0135] 化合物的纯化和表征
[0136] 分析型HPLC方法:使用ZIC HILIC 200A。柱(4.6mmX250mm，5ym)进行分析型HPLC， 流速:1. OmL/min。使用的洗脱条件是:缓冲液A: 5mmo 1乙酸氨，缓冲液B:乙腈，用90 %缓冲液 B平衡柱，并且在30min期间内用90 %至40 %缓冲液B梯度洗脱。
[0137] 制备型 HPLC 方法：使用 SeQuant ZIC HILIC 200A。柱（10mmX250mm，5ym)，流速： 5.〇1111/1]1；[11进行制备型!^]^。使用的洗脱条件是:缓冲液4:51111]1〇1乙酸氨（用乙酸调节至口!1- 4)，缓冲液B:乙腈，用90%缓冲液B平衡柱并且在20min内用90%至40%缓冲液B梯度洗脱。
[0138] 利用具有G1315B DAD的Agilent 1100系列HPLC，使用Mercury MS柱或利用具有 G1315B DAD的Agilent 1100系列HPLC的Agilent LC/MSD VL单四极（single quad)，使用 Mercury MS柱或使用具有SPD-20A DAD的Prominence UFLC系统的Shimadzu LCMS 2020单 四极，在 API 2000LC/MS/MS 三联四极（triple quad)(应用生物系统（Applied bio systems))进行 LCMS 〇
[0139] 实施例1:化合物1的合成
[0140] 步骤 la:
[0141]
[0142] 将碳酸钟(7 · 9g，57 · 39mmo 1)和甲基鹏（1 · 3mL，21 · 04mmol)加入至化合物 la (5 · 0g， 19.13mmo 1)在DMF (35mL)中的溶液中并且在室温搅拌2h。反应的完成通过TLC分析确认。将 反应混合物在水和乙酸乙酯之间分开。将有机层用水、盐水洗涤，经Na2S04干燥并且在减压 下蒸发，得到5.0g的化合物lb(收率:96.1%)。^^:176.1(1-8〇。) +。
[0143] 步骤 lb:
[0144]
[0145] 水合肼(7 · 2mL)加入至化合物lb(5.0g，18.16mmo 1)在甲醇（30mL)中的溶液中并且 在室温搅拌2h。反应的完成通过TLC分析确认。将反应混合物在减压下蒸发，将获得的残留 物在水和乙酸乙酯之间分开。将有机层用水、盐水洗涤，经Na2S04干燥并且在减压下蒸发，得 到4.0g 的化合物 lc(收率:80.0%)。1^1^:276.3(]\1+!〇 +。
[0146] 步骤lc:
[0147]
：
[0148] 在0°(：将匪1(0.671111，6.52111111〇1)缓慢加入至1。（1.28,4.35111111〇1)，1(1(1.43 8， 4·35mmol)，H0Bt(0·7g，5·22mmol)和EDC·HCl(0·99g，5·22mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液 中。将反应混合物在室温搅拌12h。反应的完成通过TLC分析确认。将反应用冰猝灭并且将沉 淀的固体过滤并在真空下干燥，获得2.0g纯的产物le(收率:83.3%)。^^:591.5(1+他)+。
[0149] 步骤 Id:
[0150]
[0151 ]在 0 °C 向 le (1 · 5g，2 · 63mmol)在无水 THF( 15 · OmL)和 DMF( 5 · OmL)中的搅拌溶液中加 入三苯基膦（1.38g，5.27mmol)和碘（1.33g，5.27mmol)。在将碘完全溶解后，在冰冷的温度 将Et3N( 1.52mL，10.54mmol)加入至该反应混合物中。让反应混合物达到室温并搅拌4h。反 应的完成通过TLC分析确认。将反应用冰水猝灭并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和硫代 硫酸钠和盐水溶液洗涤。将分离的有机层经Na2S04干燥并且在减压下蒸发，得到残留物，将 其通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己烷中的30%乙酸乙酯)进一步纯化，获得0.8g的化合物If (收
[0152] 步骤 le:
[0153]
[0154] 在 〇°C 通过将二乙胺（20.01^)加入至化合物1以0.88，1.45臟〇1)在〇12(：1 2(20.01^) 中的溶液中而将Fmoc基团脱保护。将反应在室温搅拌2h。将得到的溶液在真空中浓缩，得到 厚胶质残留物。将粗制化合物通过中性铝土柱色谱(洗脱剂:氯仿中的2%甲醇)纯化，获得 0.388的化合物18(收率:80.0%):1^1^:329.4(]\1+!〇 +。
[0155] 步骤 If:
[0156]
[0157] 在 〇°C 将化合物 lg(0.38g，l · 16mmol)，溶解在 DMF(lOmL)中的 TEA(0.33mL， 2.32mmol)逐滴加入至lh(0.55g，1.39mmol)的溶液中用于脲键形成并且将混合物在室温搅 拌2h。反应的完成通过TLC分析确认。将反应用冰水猝灭，将沉淀的固体过滤并在真空下干 燥，得到粗制化合物，其进一步通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己烷中的0-35%乙酸乙酯）纯化， 得到 〇.4g 产物li (收率:59.7%)。1^1^:586.4(]\1+!〇 +。
[0158] 步骤 1S:
[0159]
[0160] 向化合物1 i (0 · 4g，0 · 68mmo 1)在CH2C12 (5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(5mL)和催 化量的三异丙基硅烷并且在室温搅拌3h以移除酸敏感性保护基团。将得到的溶液在氮下浓 缩并且将固体材料通过如实验条件下描述的制备型HPLC方法纯化（收率A.OSghLCMS: 318.0(M+H) + ;HPLC:tR=10.96 分钟。
[0161] 化合物 1 h (N〇2-C6H4-〇C〇-Thr (tBu) -〇*Βιι)的合成：
[0162]
[0163] 在0°C向氯甲酸4-硝基苯酯(4.798,23.77111111〇1)在0〇1(25.〇1^)中的溶液中，加入 H-Thr (tBu) -OtBu (5 · 0g，21 · 6 lmmo 1) TEA( 6 · 2mL，43 · 22mmo 1)在CH2CI2 (25mL)中的溶液并且 将其搅拌30分钟。反应的完成通过TLC分析确认。反应完成后，将其用DCM稀释并且用1.0M的 柠檬酸洗涤，接着用1.0M碳酸钠溶液洗涤。将有机层经Na2S04干燥并且在减压下蒸发，获得 粗制化合物lh，将其进一步通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己烷中的0-5%乙酸乙酯）纯化，得到 3.(^的产物111。1!1匪1?(0)(：13,40010^):31.17(8,9!1)，1.28((1，3!〇，1.50(8,9!〇,4.11(111， lH)，4.28(m，lH)，5.89(d，lH)，7.37(d，2H)，8.26(d，2H)。
[0164] 实施例2:化合物2的合成
[0165] 步骤 2a:
[0166]
[0167] 在0°(：将丽1(1.811^，18.15111111〇1)缓慢加入至1。（2.(^，7.26111111〇1)，2(1(4.3 8， 7 · 26mmol)、H0Bt(1 · 17g，8 · 7mmol)和EDC· HC1 (1 · 66g，8 · 7mmol)在DMF( 15mL)中的搅拌溶液 中。将反应混合物在室温搅拌12h。反应的完成通过TLC分析确认。将反应用冰猝灭，将沉淀 的固体过滤并在真空下干燥，获得3.7g的纯的产物2e(收率:59.6%)。^^:854.4(1+!〇 +。
[0168] 步骤 2b:
[0169]
[0170] 在0°C 向溶解在于燥THF(25 · OmL)和DMF(10 · OmL)中的2e(3 · 7g，4 · 33mmol)的搅拌 溶液中加入三苯基膦(2.28g，8.66mmo 1)和碘(2.2g，8.66mmo 1)。将碘完全溶解后，在相同温 度加入Et3N(2.5mL，17.32mm0l)。将反应混合物在室温搅拌4h。反应的完成通过TLC分析确 认。将反应用冰水猝灭并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和硫代硫酸钠和盐水溶液洗涤。 将分开的有机层经Na2S04干燥并且在减压下蒸发，将其进一步通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己 烷中的30 %乙酸乙酯）纯化，得到2. Og的化合物2f (收率:55 % )。LCMS: 858.4(M+Na) +。
[0171] 步骤 2c:
[0172]
[0173] 在 〇uC 将二乙肢（30.011^)加人全化合物2八2.(^，1.17111111〇1)在〇12(：12(30.01^)中的 溶液中。将反应混合物在室温搅拌lh。将得到的溶液在真空中浓缩，得到稠的胶质残留物。 将粗制化合物通过中性铝土柱色谱(洗脱剂：氯仿中的2%甲醇）纯化，获得l.Og化合物2g (收率：71.4%)。1^1^:614.5(]\1+!〇 +。
[0174] 步骤 2d:
[0175]
[0176] 在〇°C 将溶解于DMF( 10mL)中的化合物2g( 1 · 0g，1 · 63mmol)和ΤΕΑ(0 · 47mL， 3.2mmol)逐滴加入至lh(0.7g，1.79mmol)的溶液中。然后使反应混合物达到室温并且继续 搅拌2h。反应的完成通过TLC分析确认。将反应用冰水猝灭，将沉淀的固体过滤并在真空下 干燥。将获得的粗制化合物进一步通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己烷中的0-30%乙酸乙酯）纯 化，得到 〇.8g 的产物 2i (收率:57.1%)。1^1^:871.6(]\1+!〇 +。
[0177] 步骤 2e:
[0178]
[0179] 向化合物2丨（0.88,0.92111111〇1)在012(：1 2(61^)中的溶液中加入三氟乙酸(61^)和催 化量的三异丙基硅烷并且在室温搅拌3h。将得到的溶液在氮气下浓缩并且将固体材料通过 实验条件下所描述的制备型HPLC方法纯化（收率：0.065g) dPLC: tR = 12.01分钟；LCMS: 361.34(M+H)+〇
[0180] 实施例3:化合物3的合成
[0181] 步骤 3a:
[0182]
[0183] 将劳森试剂（Lawesson ' s reagent) (2 · 85g，7 · 03mmol)加入至化合物2e(4g， 4.68mmo 1)在THF(40mL)中的溶液中，并在75 °C搅拌4h。反应的完成通过TLC分析确认。将反 应混合物在减压下蒸发并且将获得的残留物在冰水和乙酸乙酯之间分开。将有机层用 NaHC03溶液洗涤，然后用盐水溶液洗涤。将有机层经Na2S〇4干燥，过滤并且在减压下蒸发，获 得残留物，将其进一步通过硅胶柱色谱(洗脱剂：己烷中的0-5%乙酸乙酯）纯化，获得2.7g 的化合物 3a(收率:67.66%)。1^1^:852.3(]\1+!〇 +。
[0184] 步骤 3b:
[0185：
[0186」 旭;寸一mjja J 丄g，丄?丄（mmol 丄· omL·)中的溶'液 中而将化合物3a上的Fmoc基团脱保护。将反应混合物在室温搅拌30分钟。将得到的溶液在 真空中浓缩，得到稠的胶质残留物。将粗制化合物通过中性铝土柱色谱(洗脱剂：己烷中的 0-50 %乙酸乙酯，然后氯仿中的0-5 %甲醇）纯化，获得0.62g的化合物3b。LCMS: 630.5 (M+H )+。
[0187]步骤 3c:
[0188]
[0189] 向化合物3b (0.6g)在CH2C12 (7.5mL)中的溶液中加入三氟乙酸（2.5mL)和催化量的 三异丙基硅烷并且在室温搅拌3h。将得到的溶液在真空中浓缩，得到0.13g的化合物3,将其 通过实验条件下所描述的制备型HPLC方法纯化。LCMS: 232.3 (M+H) +。
[0190] 实施例4:化合物4的合成
[0191] 步骤 4a:
[0192]
[0193] 通过在室温将THF(lOmL)中的化合物313(0.58,7.9111111〇1)与化合物46(0.34 8， 7·9mmol)偶联来进行脲连接。通过加入THF(10mL)中的TEA(0·16g，15·8mmol)来引发偶联 并且将得到的混合物在室温搅拌。12h后，从反应材料中蒸发THF，并且在水和乙酸乙酯之间 分开。将有机层用水、盐水洗涤，经Na2S04干燥并且在减压下蒸发，获得4a，将其进一步通过 硅胶柱色谱（洗脱剂：己烷中的0-50 %乙酸乙酯）纯化，得到0.45g的产物4a (收率： 61.64%)〇LCMS：921.8(M+H) + 〇
[0194] 步骤 4b:
[0195] 4a
[0196] 在惰性气氛下向化合物4a (0.55g)在甲醇（20mL)中的溶液中加入10 % Pd-C (0.15g)。将混合物在H2气氛下搅拌lh。反应的完成通过TLC分析确认。然后Pd-C催化剂通过 经Celite?垫过滤移除并且用2〇mL甲醇洗涤。将合并的有机滤液在减压下蒸发，从而分离产 物 4b(收率:0.428,85.71%)。1^1^:831.5(]\1+!〇 +。
[0197] 步骤 4c:
[0198]
[0199] 向化合物4b(0.2g，0.3mmo 1)在CH2C12(5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸（5mL)和催 化量的三异丙基硅烷，并且在室温搅拌3h。将得到的溶液在真空中浓缩并且将固体材料通 过实验条件下所描述的制备型HPLC方法纯化（收率:0.0658)。冊^：:4=14.1分钟江015 :377.3(M+H) + 〇
[0200] 化合物4e，（Nf^-CsHfOCO-ThHOtBiO-Bzl，）的合成：
[0201]
[0202]向化合物Fmoc-Thr (*Βιι) -OH(15g，37 · 73mmo 1)在 10OmL DMF中的溶液中，加入 Cs2C03(14.75g，45.2mmo 1)并且将得到的混合物冷却至0°C。向冷却的反应混合物中加入苄 基溴(7.74g，45.2mmol)并且.将溶液在冰冷温度搅拌30min，然后在室温搅拌12h。将反应混 合物在减压下浓缩并用乙酸乙酯稀释。将有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤并经Na2S04干燥。将过滤的溶液浓缩并通过硅胶柱色谱纯化(洗脱剂：己烷中的0-30%乙酸乙酯），得到 18g 的 4c，为白色固体。1^1^:433.1(]?-0%11) +，397.2(]\1-0821) +。
[0203] 在室温搅拌下，通过向CH2Cl2(100mL)中的化合物4d(25g，51.3mmol)中加入二乙胺 (100mL)而将化合物4c (25g，51.3mmo 1)上的Fmoc基团脱保护lh。将得到的溶液在真空中浓 缩并且将稠的残留物通过中性铝土柱色谱(洗脱剂：己烷中的0-50%乙酸乙酯，然后氯仿中 的0-5 %甲醇）纯化，获得10.6g的化合物4d。LCMS: 266.5 (M+H) +。
[0204]
[0205] 向化合物4d(l .5g，5.65mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液中，加入TEA(1 · 14g， 11.3mmol)，并且将溶液在室温搅拌5-10分钟。向该混合物中加入氯甲酸4-硝基苯酯（1.4g， 6.78mmo 1)在CH2C12 (1 OmL)中的溶液并且将得到的混合物在室温搅拌12h。反应的完成通过 TLC分析确认。反应完成后，将其用DCM稀释并且用1.0M硫酸氢钠溶液洗涤，然后用1.0M碳酸 钠溶液洗涤。将有机层经Na2S04干燥，过滤并且在减压下蒸发，获得粗制化合物4e，将其通过 硅胶柱色谱（洗脱剂：己烷中的0-20 %乙酸乙酯）进一步纯化，获得0.7g的产物4e。4匪R (DMS0-d6,300MHz):Sl.04(s，9H)，1.16(d，3H)，4.11(m，lH)，5.11(m，3H)，6.91(d，2H)，7.40 (m，5H)，8.10(d，2H)，8.26(br s，lH)。
[0206] 基于上述实验步骤制备下表3中的化合物。
[0207] 表 3
[0209]
[0210]
[0211] 可以通过按照与上文所述类似的步骤制备（具有本领域技术人员已知的适当改 变)的下表4中所示的化合物也包括在本申请的范围内。
[0212] 表4
[0213]
[0214] 在重组PD-L1/PD-L2的存在下小鼠脾细胞增殖的挽救:
[0215] 使用重组小鼠 PD-Ll(rm-PDL-1，目录号：1019-B7-100和R&D系统）作为H)-L1的来 源。
[0216]必需品：
[0217] 从6-8周龄C57 BL6小鼠获得的小鼠脾细胞；RPMI 1640(GIB⑶，Cat#11875);高葡 萄糖 01^]?(618〇)，03丨#06429);胎牛血清[办(310116,03丨#5!130071.03] ;青霉素（10000单位/ ml)-链霉素（10,000μg/ml)液体(618〇)，03七#15140-122);]\^]\1丙酮酸钠溶液100111]\1(10(^)， 液体（GIB⑶，Cat#11360);非必需氨基酸（GIB⑶，Cat#11140);L-谷氨酰胺（GIB⑶，Cat# 25030);抗-CD3 抗体（eBiosciences-16-0032);抗-CD28 抗体（eBiosciences-16-0281);ACK 裂解缓冲液（lmL) (GIBC0，Cat#-A10492) ;Histopaque(密度-1 ·083gm/mL) (SIGMA 10831); 台盼蓝溶液（SIGMA_T8154);2mL Norm Ject Luer Lock注射器-(Sigma 2014-12) ;40μΜ尼 龙细胞滤器(BD FALCON 35230);血球计(Bright line-SIGMA Z359629);FACS缓冲液(PBS/ 0 · 1 %BSA):具有0 · 1 %牛血清白蛋白（BSA) (SIGMA A7050)和叠氮化钠 (SIGMA 08591)的磷 酸缓冲盐水(PBS)pH 7.2(HiMedia TS1006);5mM CFSE储存溶液:CFSE储存溶液通过用180μ L的二甲亚砜(DMSO C2H6S0，SIGMA-D-5879)稀释冻干的CFSE而制备并且等分到小管中用于 进一步使用。将工作浓度从1〇μΜ滴定到ΙμΜ. (eBioscience-650850-85) ;0.05%胰蛋白酶和 0.02%EDTA(SIGMA 59417C);96-孔形式 ELISA 板（Corning CLS3390);BD FACS 口径 (E6016);重组小鼠 B7-H1/PDL1 Fc Chimera，（rm-PD-Ll 目录号：1019-B7-100)〇[0218] 方案
[0219]脾细胞制备和培养：
[0220] 将通过在40μπι细胞滤器磨碎小鼠脾而获得的在50mL离心管中的脾细胞进一步在 室温用lmL ACK裂解缓冲液处理5min。在用9mL RPMI完全培养基洗涤后，将细胞重悬在15mL 管中的3mL的lxPBS中。将3mL Histopaque小心加入至管底，不破坏上面覆盖的脾细胞悬浮 液。在室温在800xg离心20min后，小心收集脾细胞的不透明层，不使层破坏/混合。用冷的 lxPBS洗涤脾细胞两次，然后使用台盼蓝排除方法进行总细胞计数，并且进一步用于基于细 胞的测定。
[0221] 将脾细胞培养在1^11完全培养基(1^11 + 10%胎牛血清+111^丙酮酸钠+10,000单 位/ml青霉素和10,000μg/ml链霉素）中，并且在37°C维持在具有5%C02的C02温箱中
[0222] CFSE增殖测定：
[0223] CFSE是被动散布到细胞中并且结合于细胞内蛋白的染料。将lxlO6个细胞/mL的所 获得的脾细胞用预温热的1 xPBS/0.1 % BSA溶液中的5μΜ的CFSE在37 °C处理1 Omin。将5体积 的冰冷的培养基使用于细胞并在冰上孵育5分钟以将过量的CFSE猝灭。将标记的脾细胞用 冰冷的完全RPMI培养基进一步洗涤三次。将CFSE标记的lxlO5个脾细胞加入至含有MDA- MB231细胞(在高葡萄糖DMEM培养基中培养的lxlO5个细胞)或重组人roL-l(100ng/mL)和测 试化合物的孔中。用抗-小鼠 CD3和抗-小鼠 CD28抗体(各自1 yg/mL)刺激脾细胞，并且将培养 物进一步在37°C用5%⑶2孵育72h。收获细胞并且用冰冷的FACS缓冲液洗涤两次并且通过 流式细胞术用488nm激发和521nm发射滤波器分析增殖百分数。
[0224]数据搜集，加工和推断：
[0225] 使用细胞寻找FACS程序分析脾细胞增殖百分数，并且在减去％背景增殖值并且相 对于作为100 %的％刺激的脾细胞增殖（阳性对照)标准化后，评估化合物导致的脾细胞增 殖的挽救百分数。
[0226] 刺激的脾细胞:脾细胞+抗-⑶3/⑶28刺激
[0227] 背景增殖:脾细胞+抗-CD3/CD28+PD-L1
[0228] 化合物增殖:脾细胞+抗-⑶3/⑶28+PD-L1+化合物
[0229] 通过在配体(PDL-1)的存在下向抗-CD3/CD28刺激的脾细胞中加入需要浓度的化 合物来检测化合物效应。
[0230] 表 5
[0231]
[0232]
【主权项】
1. 式(I)的化合物其中， 化是选自Ser，Τ'虹，F*he，Ala或Asn的氨基酸的侧链； X是S或0; 化是氨或-C〇-Aaa; Aaa是选自Ser，Asn或化r的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酷胺化的或是 被醋化的； Rb是选自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的侧链； ----是任选的键； R4和Rs独立地是氨或不存在； 或其药用盐或立体异构体。2. 根据权利要求1所述的化合物是式(IA)的化合物：或其药用盐或立体异构体;其中， 化是选自Ser，Τ'虹，F*he，Ala或Asn的氨基酸的侧链； X是S或0; 化是氨或-C〇-Aaa; Rb是选自Ser，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的侧链； Aaa是选自Ser，Asn或化r的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。3. 根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其是式(IB)的化合物：或其药用盐或立体异构体;其中， 化是选自Ser，Τ'虹，F*he，Ala或Asn的氨基酸的侧链； Rb是选自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的侧链； Aaa是选自Ser，Asn或化r的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。4. 根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其是式(IC)的化合物：或其药用盐或立体异构体;其中， 化是选自Ser，Τ'虹，F*he，Ala或Asn的氨基酸的侧链； Rb是选自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的侧链； Aaa是选自Ser，Asn或化r的氨基酸残基;其中其C-末端是游离末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。5. 根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中X是0。6. 根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中X是S。7. 根据权利要求1所述的化合物，其中 化是Ser或化r的侧链； 化是-C〇-Aaa; Aaa是氨基酸残基Ser或化r;其中C-末端是游离的； Rs 是 Asn，Gln，Glu 或 Asp 的侧链。8. 根据权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中化是氨。9. 根据权利要求1的化合物，其选自由W下各项组成的组：或其药用盐或立体异构体。10. -种药物组合物，其包含至少一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其 药用盐或立体异构体，和药用载体或赋形剂。11. 根据权利要求10所述的药物组合物，其包含至少一种其他药剂，其中所述其他药剂 是抗癌剂、化疗剂或抗增殖化合物。12. 根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，或其药用盐或立体异构体，其用作药 物。13. 根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，或其药用盐或立体异构体，其用作用于 治疗癌症或感染性疾病的药物。14. 根据权利要求13的用于所述用途的化合物，其中所述癌症选自骨癌、头或颈癌、膜 腺癌、皮肤癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛口区域癌、胃癌、睾丸癌、 子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋己瘤、食道 癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎 癌、慢性或急性白血病、包括急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病、急性淋己细胞白血病、 慢性淋己细胞白血病、儿童实体瘤、淋己细胞性淋己瘤、膀脫癌、肾或输尿管癌、肾孟癌、中 枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋己瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺 瘤、卡波济氏肉瘤、表皮样癌、鱗状上皮细胞癌、T细胞淋己瘤、环境诱发的癌症、包括石棉诱 发的癌症、和所述癌症的组合。15. 根据权利要求13的用于所述用途的化合物，其中所述感染性疾病是细菌感染性疾 病、病毒感染性疾病或真菌感染性疾病。16. -种调节受治疗者中由PD-1信号传导通路介导的免疫应答的方法，所述方法包括 向受治疗者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。17. -种抑制受治疗者中肿瘤细胞生长和/或迁移的方法，所述方法包括向受治疗者施 用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。18. 根据权利要求15所述的方法，其中所述肿瘤细胞是选自由W下各项组成的组中的 癌症:乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌和肾癌。19. 根据权利要求15所述的方法，其中所述肿瘤细胞是选自由W下各项组成的列表中 的癌症:骨癌、头或颈癌、膜腺癌、皮肤癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、 肛口区域癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金 病、非霍奇金淋己瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、 软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、包括急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血 病、急性淋己细胞白血病、慢性淋己细胞白血病、儿童实体瘤、淋己细胞性淋己瘤、膀脫癌、 肾或输尿管癌、肾孟癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋己瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿 瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤、表皮样癌、鱗状上皮细胞癌、T细胞淋己瘤、环境 诱发的癌症、包括石棉诱发的癌症、和所述癌症的组合。20. -种治疗受治疗者感染性疾病的方法，所述方法包括向受治疗者施用治疗有效量 的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。21. -种治疗受治疗者中细菌、病毒和真菌感染方法，所述方法包括向受治疗者施用治 疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。
【文档编号】A61K31/4245GK105849092SQ201480057737
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2014年9月5日
【发明人】帕塔伊尔·戈文丹·奈尔·萨西库玛, 穆拉里哈拉·拉马钱德拉, 西塔拉马伊阿·塞提·苏达山·纳里马德帕里
【申请人】奥瑞基尼探索技术有限公司