Hotair小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用

Hotair小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种Hotair小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用，属于含有机有效成分的医药配置品领域。本发明Hotair小分子抑制剂的化学名称为7?氮?2?[4?(7?氮?3?氧?4,9?二氢呋喃[3,2?b]喹喔啉?2?基)苯基]?4,9?二氢呋喃[3,2?b]喹喔啉?3?酮，分子量为540。其能特异性的抑制Hotair的5’端与PRC2中的EZH2蛋白结合；在U87细胞中有效的抑制EZH2入核；小鼠体内实验中其有效抑制乳腺癌肿瘤模型的生长和肺转移。本发明小分子抑制剂能应用于制备治疗肿瘤药物中，对肿瘤发生、发展和治疗的研究具有重大的临床意义，具有广阔的应用前景。
【专利说明】
Hota i r小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用
技术领域
[0001]本发明属于含有机有效成分的医药配置品领域，具体是一种Hotair小分子抑制剂 及在制备治疗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 人Hotair在染色体12ql3区域，位于H0XC12和HOXCll编码区之间。最初的研究工作 始于2007年，Chang课题组在研究H0XA-H0XD家族表观遗传学调控的过程中发现，Hotair的 作用机制是通过一系列蛋白复合物来实现的。首先发现的蛋白复合物是由组蛋白H3K27甲 基转移酶（H3K27 histone methyl transferase，HMTase)、EZH2、EED和SUZ12 共同组成多 梳蛋白抑制复合物（Polycomb Repressive Complex 2，PRC2)，它以反式作用方式（in trans)影响HOXD位点上H3组蛋白27位赖氨酸的三甲基化，进而抑制HOXD位点的基因转录。 近年来研究发现，包括Hotair在内的至少20%的IncRNAs的功能活动都与PRC2相关。在2010 年，Chang课题组同时在Nature和Science杂志发表论文，提出赖氨酸特异性组蛋白去甲基 化酶l(Lysine specific demethylase 1，LSDl)/CoREST/REST复合物被Hotair的3'端所 募集，与被5 '端募集的PRC2复合物分别发挥对H3组蛋白27位赖氨酸的三甲基化以及对H3组 蛋白4位赖氨酸的去基化作用。同年，Reinberg课题组进一步发现PRC2重要成员EZH2的354 位苏氨酸的磷酸化对其与Hotair的结合至关重要。
[0003] Hotair在肿瘤中的研究始于2010年，Chang课题组在原发乳腺癌和侵袭性乳腺癌 的临床标本中都发现了Hotair的高表达，细胞系的体外实验发现过表达Hotair可以增加肿 瘤细胞侵袭性，而敲低Hotair后可以抑制乳腺癌细胞在裸鼠皮下肿瘤的生长。上述研究第 一次把Hotair与肿瘤的恶性表型联系起来，并推测其机制可能是PRC2抑制了侵袭抑制因子 的表达所致。随后，Chang以Hotair为例提出了IncRNAs的可能作用机制，包括IncRNA与其他 RNA(lncRNA、mRNA和短非编码RNA)的互补结合作用，RNA-DNA互补结合作用，IncRNA结构介 导蛋白与mRNA的直接作用以及蛋白质联接子（linker)的作用，进而该课题组又把连接子的 概念衍生成为脚手架RNA(Scaffold RNA)。
[0004] 在肝癌患者手术切除标本中，Hotair的表达水平与患者的疾病进展关系紧密并能 够预测肝癌患者肝移植后肿瘤的复发;体外敲除Hotair后可以抑制肿瘤增殖和侵袭性生 长，并和顺铂和阿霉素的敏感性有关。在胰腺癌、胃肠间质肿瘤和鼻咽癌中，Hotair的表达 水平与肿瘤的预后和疾病级别相关，而侵袭性乳腺癌中Hotair和EZH2的原位杂交的强信号 则昭示了患者的恶性预后。同时也发现，Hotair的表达水平和基因组的甲基化水平相关，尤 其和抑癌基因 PTEN的启动子甲基化有关。随后发现，Hotair在胰腺癌中的作用存在PRC2依 赖性和非依赖性两种模式，并在细胞系基因敲除实验中证实Hotair与细胞周期调控有关。
[0005] 自2012年初，本课题组对220例不同级别的胶质瘤进行了表达谱和临床资料分析， 发现112个IncRNAs在不同级别胶质瘤之间存在差异表达，其中在高级别胶质瘤中74个 IncRNAs上调而38个下调；多因素回归分析发现Hotair是独立于常规病理诊断指标的一个 独立的胶质瘤患者的预后指标。同时，更加有意义的发现在于:应用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis，GSEA)与Hotair表达一致上调的mRNA，发现其显著富集的细胞 信号通路是对细胞周期的推动。此外，在胶质母细胞瘤中，Hotair的表达水平在美国癌症基 因组图谱计划(TCGA)的四个亚型具有明显的差异，其中在经典型和间质型胶质母细胞瘤中 表达丰度明显高于神经元型和前神经元型，这一发现与前期发现的i3-catenin/STAT3调控 基因优势表达经典型和间质型胶质母细胞瘤具有高度的一致性，说明Hotair与β-catenin/ STAT3信号通路之间存在一定内在的联系;本课题组同时发现Hotair在胶质瘤中的作用存 在PRC2依赖性和非依赖性两种模式，这样的结论和以前的研究结果相吻合。虽然Hotair与 肿瘤发生与发展之间关系的研究日趋成熟，但对Hotair的特异性抑制剂的研究还属空白。

【发明内容】

[0006] 本发明就是为了解决目前尚无 Hotair的特异性抑制剂的问题，所提出的一种 Hotair小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0007] 本发明是按照以下技术方案实现的。
[0008] -种Hotair小分子抑制剂，所述Hotair小分子抑制剂的化学名称为7-氮-2-[4-(7-氮-3-氧-4，9_二氢呋喃[3,2-b]喹喔啉-2-基)苯基]-4，9_二氢呋喃[3,2-b]喹喔啉-3-酮，分子量为540，其特异性的抑制Hotair的5 '端与PRC2中的EZH2蛋白结合，化学结构式为
[0009] 所述Hotair小分子抑制剂与hotair和EZH2的接位结合能力deltaG=-10 · 5kcal/ mol 〇
[0010] -种上述Hotair小分子抑制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0011]本发明获得了如下的有益效果。
[0012]本发明有效的解决了目前尚无 Hotair的特异性抑制剂的问题。本发明所述的 Ho ta i r小分子抑制剂能特异性的抑制Ho ta i r的活性，有效的降低EZH2的表达，并抑制β-catenin和ΡΚΜ2的表达;能够在U87细胞中有效的抑制ΕΖΗ2入核;小鼠体内实验表明，其能有 效抑制乳腺癌肿瘤模型的生长和肺转移，对肿瘤实现有效的抑制。本发明对肿瘤发生、发展 和治疗的研究具有重大的临床意义，具有广阔的应用前景。
【附图说明】
[0013]图1是本发明小分子抑制剂NSC372295的化学结构式； 图2是本发明小分子抑制剂NSC372315的化学结构式； 图3是本发明小分子抑制剂NSC372303的化学结构式； 图4是本发明3种小分子抑制剂对Hotair下游活性的影响图； 图5是本发明不同浓度的小分子抑制剂NSC372295对Hotair下游活性的影响图； 图6是本发明3种小分子抑制剂在U87细胞中对EZH2入核的影响图； 图7是本发明小分子抑制剂NSC372295对裸鼠乳腺癌模型生长的影响图； 图8是本发明裸鼠乳腺癌模型中注射小分子抑制剂NSC372295天数与肿瘤荧光强度之 间的曲线变化图； 图9是本发明裸鼠乳腺癌模型中注射小分子抑制剂NSC372295天数与肿瘤体积之间的 曲线变化图； 图10是本发明小分子抑制剂NSC372295对裸鼠乳腺癌模型原位肿瘤的影响图； 图11是本发明小分子抑制剂NSC372295对裸鼠乳腺癌模型肺部转移的影响图； 图12是本发明小分子抑制剂NSC372295对裸鼠乳腺癌模型肺部转移的影响图； 图13是本发明对照组第35天小鼠肺部切片图； 图14是本发明NSC372295给药组第35天小鼠肺部切片图； 图15是本发明对照组第42天小鼠肺部切片图； 图16是本发明NSC372295给药组第42天小鼠肺部切片图。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。
[0015] 一、Hotair 的核苷酸序列（NR_003716.3) I cctccaggcc ctgccttctg cctgcacatt ctgccctgat ttccggaacc tggaagccta 61 ggcaggcagt ggggaactct gactcgcctg tgctctggag cttgatccga aagcttccac 121 agtgaggact gctccgtggg ggtaagagag caccaggcac tgaggcctgg gagttccaca 181 gaccaacacc cctgctcctg gcggctccca cccgggactt agaccctcag gtccctaata 241 tcccggaggt gctctcaatc agaaaggtcc tgctccgctt cgcagtggaa tggaacggat 301 ttagaagcct gcagtagggg agtggggagt ggagagaggg agcccagagt tacagacggc 361 ggcgagagga aggaggggcg tctttatttt tttaaggccc caaagagtct gatgtttaca 421 agaccagaaa tgccacggcc gcgtcctggc agagaaaagg ctgaaatgga ggaccggcgc 481 cttccttata agtatgcaca ttggcgagag aagtgctgca acctaaacca gcaattacac 541 ccaagctcgt tggggcctaa gccagtaccg acctggtaga aaaagcaacc acgaagctag 601 agagagagcc agaggaggga agagagcgcc agacgaaggt gaaagcgaac cacgcagaga 661 aatgcaggca agggagcaag gcggcagttc ccggaacaaa cgtggcagag ggcaagacgg 721 gcactcacag acagaggttt atgtattttt attttttaaa atctgatttg gtgttccatg 781 aggaaaaggg aaaatctagg gaacgggagt acagagagaa taatccgggt cctagctcgc 841 cacatgaacg cccagagaac gctggaaaaa cctgagcggg tgccggggca gcacccggct 901 cgggtcagcc actgccccac accgggccca ccaagccccg cccctcgcgg ccaccggggc 961 ttccttgctc ttcttatcat ctccatcttt atgatgaggc ttgttaacaa gaccagagag 1021 ctggccaagc acctctatct cagccgcgcc cgctcagccg agcagcggtc ggtgggggga 1081 ctgggaggcg ctaattaatt gattcctttg gactgtaaaa tatggcggcg tctacacgga 1141 acccatggac tcataaacaa tatatctgtt gggcgtgagt gcactgtctc tcaaataatt 1201 tttccatagg caaatgtcag agggttctgg atttttagtt gctaaggaaa gatccaaatg 1261 ggaccaattt taggaggccc aaacagagtc cgttcagtgt cagaaaatgc ttccccaaag 1321 gggttgggag tgtgttttgt tggaaaaaag cttgggttat aggaaagcct ttccctgcta 1381 cttgtgtaga cccagcccaa tttaagaatt acaaggaagc gaaggggttg tgtaggccgg 1441 aagcctctct gtcccggctg gatgcagggg acttgagctg ctccggaatt tgagaggaac 1501 atagaagcaa aggtccagcc tttgcttcgt gctgattcct agacttaaga ttcaaaaaca 1561 aatttttaaa agtgaaacca gccctagcct ttggaagctc ttgaaggttc agcacccacc 1621 caggaatcca cctgcctgtt acacgcctct ccaagacaca gtggcaccgc ttttctaact 1681 ggcagcacag agcaactcta taatatgctt atattaggtc tagaagaatg catcttgaga 1741 cacatgggta acctaattat ataatgcttg ttccatacag gagtgattat gcagtgggac 1801 cctgctgcaa acgggacttt gcactctaaa tatagacccc agcttgggac aaaagttgca 1861 gtagaaaaat agacatagga gaacacttaa ataagtgatg catgtagaca cagaaggggt 1921 atttaaaaga cagaaataat agaagtacag aagaacagaa aaaaaatcag cagatggaga 1981 ttaccattcc caatgcctga acttcctcct gctattaaga ttgctagaga attgtgtctt 2041 aaacagttca tgaacccaga agaatgcaat ttcaatgtat ttagtacaca cacagtatgt 2101 atataaacac aactcacaga atatattttc catacattgg gtaggtatgc actttgtgta 2161 tatataataa tgtattttcc atgcagtttt aaaatgtaga tatattaata tctggatgca 2221 ttttctgtgc actggtttta tatgccttat ggagtatata ctcacatgta gctaaataga 2281 ctcaggactg cacattcctt gtgtaggttg tgtgtgtgtg gtggttttat gcataaataa 2341 agttttacat gtggtgaata taaa 二、 小分子抑制剂的筛选 Hotair的小分子抑制剂是从美国癌症研究院(NIH)的癌症治疗计划(DTP)中筛选获得。 本发明利用计算机结构模拟Hotair 5 '端的3D结构(MC-SYM)，从DTP数据库中筛选与之结合 位点相匹配的化合物，并挑选出匹配度前三位的化合物，分别是7-氮-2-[4-(7-氮-3-氧-4， 9_二氢呋喃[3,2-b]喹喔啉-2-基）苯基]-4，9_二氢呋喃[3,2-b]喹喔啉-3-酮，命名为 吧〇372295，化学结构式如图1所示;2,2'-苯-1，4-二基双(4,9-二氢呋喃（2,3-13)喹喔啉-3-(2H)-酮），命名为NSC372315,化学结构式如图2所示;7-氯代-2-(4-(7-氯代-3-氧代-4,9-二氢呋喃（3,2-b)喹喔啉-2-基）苯基）-4,9-二氢呋喃（3,2-b)喹喔啉-3-酮，命名为 NSC372303,化学结构式如图3所示。这3种小分子抑制剂均可以从DTP免费获得（网站地址 http://dtp.cancer.gov/OrderAuth) 三、 小分子抑制剂IC50的检测 利用M T T法检测三种小分子抑制剂的IC 5 0 (被测量的拮抗剂的半抑制浓度，h a I f maximal inhibitory concentration)，实验方法如下： (1) 处于对数生长期的肿瘤细胞常规消化（100mm直径大皿，用Iml胰酶37°消化30s-lmin)，接种于96孔板中，接种量4000个(200μ1)/孔； (2) 接种24小时后，加入浓度梯度为100、200、300、400、500、600、700、800、900、 1000ug/ml 的 NSC372295，NSC372315 和 NSC372303化合物； (3) 处理72hrs后进行MTT检测:将浓度为5mg/ml的MTT液以每孔20μ1加入待测的96孔板 内，37°C培养4小时，小心弃上清液，每孔加 DMSO 200μ1并振荡15min已完全溶解结晶，最后 用紫外分光光度计570nm波长测定各孔的吸光度(A值），取每组10孔的均值； (4) 肿瘤细胞存活率计算方法:用未做任何处理的细胞(Control)作为对照，求出试验 组肿瘤细胞存活率： M 转染组细胞A值 月中瘤細胞存活率=-~~-如祕\士 -- (释) 空白对照細胞為値 (5)统计学处理 所用实验数据使用SPSS16统计软件包进行统计学分析，单因素方差分析进行统计学分 析，按照P<〇. 05作为检验水准。
[0016]结果显示，NSC372295在U87细胞中的IC50值为384nM，U87vIII 中为290nM; NSC372315 在 U87 细胞中的 IC50 值为 297nM，在 U87vIII 中为 189nM;NSC372303 在 U87 细胞中的 IC50 值为356nM，在 U87vII I 中为264nM。
[0017]四、小分子抑制剂对Hotair下游活性的影响 取540mg小分子化合物NSC372295溶解于0.5ml DMSO中，配制为0.2M的母液。6孔板中接 种肿瘤细胞，细胞数量为10-15万，使用中皿则接种量为20-30万；用10% FBS的DMEM培养24h 后，加入NSC372295母液使终浓度分别为50、100、200 μΜ，培养24h后，利用western blot在 胶质瘤U87和U87_vIII细胞系中，检测ΕΖΗ2、β -catenin和PKM2的表达。western blot具体 方法如下： (1)处理细胞24h后用预冷的PBS(0.01M，pH7.4)洗涤细胞2次，加入400μ1预冷的蛋白裂 解液（〇.lmol/L NaCl，0.01mol/L Tris-Cl PH7.6,0.001mol EDTA PH8.0，lμg/ml Aprotinin，100μg/ml PMSF，1% NP40)，置冰浴中30min使其充分裂解。4°C、12000转/分离心 15min，取上清2μ1用NanoDrop ND-1000进行蛋白定量，剩余混合物与等体积2 X SDS上样缓 冲液（Tris100 mmol/L，DTT 200mmol/L，SDS 4%，溴酚兰 0.2%，甘油 20%)混合后煮沸 10分 钟。
[0018] (2)蛋白冷却短暂离心后上样，每个上样孔加入约30yg总蛋白。80V的电压电泳至 染料进入分离胶后，将电压增加到150V直至染料到达分离胶底部，终止电泳。
[0019] (3)将电泳后的凝胶浸于电泳转移液（25mmol/L Tris，92 mmol/L甘氨酸，lg/L SDS，20% v/v甲醇，pH7.5)中平衡约20分钟；其间裁出与凝胶大小相等的PVDF膜和2张3M滤 纸，将PVDF膜浸于甲醇中15秒，取出后迅速浸于DDW中10分钟，将PVDF膜和3张滤纸在电转液 中浸透;将凝胶支架打开放平，在阴极板上铺上一层预先浸透的海绵板，将一张滤纸铺于阴 极板中央，驱除气泡;将凝胶平铺于滤纸上，驱除气泡;于凝胶上铺PVDF膜，驱除气泡;再在 其上铺一张滤纸，驱除气泡;在滤纸上铺一层浸透的海绵板，将阳极板合上，关上支架;将支 架垂直插入电转槽内，连同已放入冰的冰槽一起垂直放入转移盒中，加入预冷电转液，使其 不超过电转槽的上缘;4 °C或冰浴条件下80V电转60min。
[0020] (4)电转完毕后，取下PVDF，PBST(PBS pH 7.5,0.1% Tween-20)中漂洗洗2次每次 5m i η。封闭液中室温封闭I h (或4 °C过夜），封闭非特异性抗体结合位点;倒掉封闭液，加入一 抗（I :1000膜封闭液稀释），4°C杂交过夜(或室温3-4h);大量I3BST漂洗3次每次IOmin;加入 二抗(1:1000PBST稀释)室温杂交1小时，大量PBST漂洗3次每次10min。
[0021] (5)采用化学发光检测系统，将PVDF膜平铺于平皿内，将Western blot发光液加于 PVDF膜上，放入凝胶成像系统(Syngene，G_box)中，采集图像。
[0022] (6)将显影后的PVDF膜浸于IOml洗脱缓冲液(62.5mM Tris-HCl pH6.8，2% SDS， IOOmM β-巯基乙醇）中，70°C水浴静止孵育30分钟；用I3BST漂洗3次每次5min;膜封闭液封闭 Ih(或4°C过夜）；倒掉封闭液，进行二次杂交，加入一抗（1:1000膜封闭液稀释），4 °C杂交过 夜(或室温3-4h); 大量PBST漂洗3次每次IOmin;加入二抗（1: 1000PBST稀释)室温杂交1小时，大量PBST漂 洗3次每次lOmin。采用化学发光检测系统，将PVDF膜平铺于平皿内，将Western blot发光液 加于PVDF膜上，放入凝胶成像系统中，采集图像。
[0023] (7)用Quantify One软件分析目的条带的灰度值，以灰度值大小代表目的蛋白的 表达量。目的蛋白条带相对表达量计算方法： 百的条带的灰度値 目酌羅白相对表达量=--- 同一丨手本内参的灰度值 如图4所示，在U87细胞中，与NSC372315、NSC372303相比NSC372295能够最有效的降低 EZH2的表达，并抑制β-catenin和PKM2的表达。由实验结果可得出NSC372295对Hotair的下 游活性具有最好的抑制效果。
[0024] 在U87vIII细胞中进行进一步的研究，检测不同浓度的NSC372295细胞对Hotair下 游蛋白的影响，发现在50nM的微量下，即可达到抑制下游PKM2能表达的作用（图5)。
[0025] 五、小分子抑制剂对EZH2入核的影响 EZH2在细胞核内发挥甲基化H3K27的生物学功能，本发明利用免疫荧光技术检测小分 子抑制剂对EZH2入核的影响，实验方法如下： (I) 已加药处理或转染处理72 h的细胞接种于共聚焦专用培养皿里，冰PBS洗三遍，每 次5分钟； (2 )细胞半干时，覆盖以4%冷的多聚甲醛固定15分钟，避光； (3) 吸去多余多聚甲醛后，用冰的I3BS洗三遍，每次5分钟； (4) 0.5 % Triton X-100覆盖细胞10分钟，冰I3BS洗三遍，每次5分钟； (5) 用进口胎牛血清室温封闭30分钟； (6) 配制一抗(抗体按照说明书的推荐稀释量稀释）；加入一抗覆盖细胞，锡纸包裹4°C 避光过夜； (7) 取出细胞复温至室温约I h; (8) 冰1%〇 Tween摇洗两次，每次5分钟;冰I3BS摇床上摇洗一次，5分钟； (9) 用I3BS配制荧光标记二抗(浓度参考荧光二抗的说明）；加入二抗，室温孵育1小时 (避光）； (10) 冰1%〇 Tween于摇床上摇洗两次，每次5分钟;冰I3BS摇床上摇洗一次，5分钟； (II) DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可； (12) 冰1%〇 Tween于摇床上摇洗两次，每次5分钟;冰I3BS摇床上摇洗一次，5分钟； (13) 加入水性防荧光淬灭封片剂，避光； (14) 共聚焦显微镜(Olympus，FV-1000)照相。
[0026] 实验结果如图6所示，与NSC372315、NSC372303相比NSC372295在IC50浓度的处理 下，能够在U87细胞中最有效的抑制EZH2入核。
[0027 ]六、小分子抑制剂抑制小鼠肿瘤模型的生长 本实验选取小鼠乳腺癌皮下原位模型 (1)模型建立 取转染过表达荧光素酶的重组慢病毒的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞经0.125%胰酶 消化，1000 rpm常温离心10分钟去上清，以PBS离心洗涤2次;计算细胞数并调整细胞浓度 至5 X 107/ml，将细胞悬浮于无血清DMEM培养液中，制成细胞悬液。然后用量程为100μ1的 无菌微量进样器抽取IOOyL (约含5 X IO6细胞)细胞悬液，接种于裸鼠前胸皮下脂肪垫处。 接种完毕后，常规皮肤消毒，放于笼中。
[0028] (2)肿瘤大小观察 将MDA-MB-231荷瘤小鼠各随机分为两组(n=6只/组），DMS0治疗组及372295治疗组，开 始进行肿瘤的治疗。治疗剂量分别为DMSO组：100μ1 DMSO与无血清的DMEM 1:1混合溶液； 372295组：按照25mg/kg剂量溶于100μΙ DMSO与无血清的DMEM 1:1混合溶液中。隔天给药， 共给药2周。治疗采取腹腔注射的方法共治疗，每次治疗前，用游标卡尺测量一次肿瘤的长 径(L)及宽径(W)，按公式:V=(LW 2)/2计算肿瘤体积。同时在治疗的第1天，对两组小鼠进行 第1次生物发光成像，以了解肿瘤细胞的生长情况，并记为Days 0。此后每1周，进行1次成 像，连续成像5周。
[0029]结果显示，NSC372295对裸鼠乳腺癌的生长具有显著性的抑制作用，给药组相较于 DMSO组，肿瘤体积得到了明显的控制（如图7-9所示）。进一步的，对小鼠乳腺癌肺转移的研 究发现，295给药组在荧光检测中肺部未发现明显的转移抑制作用(如图10-16所示）。
[0030] SEQUENCE LISTING 〈11〇>天津医科大学总医院 〈120> Hotair小分子抑制剂及在制备治疗肿瘤药物中的应用 <130> 1 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2364 <212> DNA <213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum <220> <221> Hotair 〈222> (1)..(2364) <400> 1 cctccaggcc ctgccttctg cctgcacatt ctgccctgat ttccggaacc tggaagccta 60 ggcaggcagt ggggaactct gactcgcctg tgctctggag cttgatccga aagcttccac 120 agtgaggact gctccgtggg ggtaagagag caccaggcac tgaggcctgg gagttccaca 180 gaccaacacc cctgctcctg gcggctccca cccgggactt agaccctcag gtccctaata 240 tcccggaggt gctctcaatc agaaaggtcc tgctccgctt cgcagtggaa tggaacggat 300 ttagaagcct gcagtagggg agtggggagt ggagagaggg agcccagagt tacagacggc 360 ggcgagagga aggaggggcg tctttatttt tttaaggccc caaagagtct gatgtttaca 420 agaccagaaa tgccacggcc gcgtcctggc agagaaaagg ctgaaatgga ggaccggcgc 480 cttccttata agtatgcaca ttggcgagag aagtgctgca acctaaacca gcaattacac 540 ccaagctcgt tggggcctaa gccagtaccg acctggtaga aaaagcaacc acgaagctag 600 agagagagcc agaggaggga agagagcgcc agacgaaggt gaaagcgaac cacgcagaga 660 aatgcaggca agggagcaag gcggcagttc ccggaacaaa cgtggcagag ggcaagacgg 720 gcactcacag acagaggttt atgtattttt attttttaaa atctgatttg gtgttccatg 780 aggaaaaggg aaaatctagg gaacgggagt acagagagaa taatccgggt cctagctcgc 840 cacatgaacg cccagagaac gctggaaaaa cctgagcggg tgccggggca gcacccggct 900 cgggtcagcc actgccccac accgggccca ccaagccccg cccctcgcgg ccaccggggc 960 ttccttgctc ttcttatcat ctccatcttt atgatgaggc ttgttaacaa gaccagagag 1020 ctggccaagc acctctatct cagccgcgcc cgctcagccg agcagcggtc ggtgggggga 1080 ctgggaggcg ctaattaatt gattcctttg gactgtaaaa tatggcggcg tctacacgga 1140 acccatggac tcataaacaa tatatctgtt gggcgtgagt gcactgtctc tcaaataatt 1200 tttccatagg caaatgtcag agggttctgg atttttagtt gctaaggaaa gatccaaatg 1260 ggaccaattt taggaggccc aaacagagtc cgttcagtgt cagaaaatgc ttccccaaag 1320 gggttgggag tgtgttttgt tggaaaaaag cttgggttat aggaaagcct ttccctgcta 1380 cttgtgtaga cccagcccaa tttaagaatt acaaggaagc gaaggggttg tgtaggccgg 1440 aagcctctct gtcccggctg gatgcagggg acttgagctg ctccggaatt tgagaggaac 1500 atagaagcaa aggtccagcc tttgcttcgt gctgattcct agacttaaga ttcaaaaaca 1560 aatttttaaa agtgaaacca gccctagcct ttggaagctc ttgaaggttc agcacccacc 1620 caggaatcca cctgcctgtt acacgcctct ccaagacaca gtggcaccgc ttttctaact 1680 ggcagcacag agcaactcta taatatgctt atattaggtc tagaagaatg catcttgaga 1740 cacatgggta acctaattat ataatgcttg ttccatacag gagtgattat gcagtgggac 1800 cctgctgcaa acgggacttt gcactctaaa tatagacccc agcttgggac aaaagttgca 1860 gtagaaaaat agacatagga gaacacttaa ataagtgatg catgtagaca cagaaggggt 1920 atttaaaaga cagaaataat agaagtacag aagaacagaa aaaaaatcag cagatggaga 1980 ttaccattcc caatgcctga acttcctcct gctattaaga ttgctagaga attgtgtctt 2040 aaacagttca tgaacccaga agaatgcaat ttcaatgtat ttagtacaca cacagtatgt 2100 atataaacac aactcacaga atatattttc catacattgg gtaggtatgc actttgtgta 2160 tatataataa tgtattttcc atgcagtttt aaaatgtaga tatattaata tctggatgca 2220 ttttctgtgc actggtttta tatgccttat ggagtatata ctcacatgta gctaaataga 2280 ctcaggactg cacattcctt gtgtaggttg tgtgtgtgtg gtggttttat gcataaataa 2340 agttttacatgtggtgaata taaa 2364
【主权项】
1. 一种Hotair小分子抑制剂，其特征在于:所述Hotair小分子抑制剂的化学名称为7_ 氮-2-[4-(7-氮-3-氧-4，9-二氢呋喃[3，2-b]喹喔啉-2-基)苯基]-4，9-二氢呋喃[3，2-b] 喹喔啉-3-酮，分子量为540，其特异性的抑制Hotair的5'端与PRC2中的EZH2蛋白结合，化 学结构式?2. 根据权利要求1所述的一种Hotair小分子抑制剂，其特征在于:所述Hotair小分子 抑制剂与hotair和EZH2的接位结合能力deltaG=_10 · 5kcal/mol。3. -种权利要求1所述Hotair小分子抑制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK105859749SQ201610291580
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】康春生, 任玉, 王琦雪, 王蕴非, 周冰聪, 周俊虎
【申请人】天津医科大学总医院