以rgd为活性中心的多肽及其在制备治疗缺血性脑卒中靶向药物中的应用
【专利摘要】本发明属生物药物技术领域，涉及以RGD为活性中心的多肽其在制备治疗缺血性脑卒中靶向药物中的应用，本发明所述的RGD肽是由精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸构成的三肽序列(Arg-Gly-Asp)，以RGD三肽为活性中心的多肽包括五肽、七肽、环肽或拟肽化合物，经试验显示，以RGD为活性中心的线性肽及环状肽修饰纳米给药系统，可显著提高该系统在缺血性脑卒中缺血病灶的药物蓄积，具有明显的脑内病变部位的二级靶向递药特征。应用该系统包载抗氧化药物，可明显提高依达拉奉在缺血再灌注模型大鼠体内的抗氧化效果，降低梗死体积。
【专利说明】
以RGD为活性中心的多肽及其在制备治疗缺血性脑卒中靶 向药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明属生物药物技术领域，涉及以RGD为活性中心的多肽其在制备治疗缺血性 脑卒中靶向药物中的应用，特别是所述的RGD为活性中心的多肽可作为靶头构建缺血性脑 卒中靶向递药系统。
[0002] 发明技术
[0003] 据世界卫生组织统计数据表明，我国脑卒中的死亡率和发病率分别居世界第一位 和第二位。但对于该类疾病的治疗，由于血脑屏障（BBB)的存在，使几乎所有大分子及98% 的小分子药物无法进入大脑及中枢神经系统，临床常用的给药方式由于缺乏组织特异性和 病变部位的靶向性从而导致用药量大，极易引起严重的毒副作用。近年来，脑靶向制剂研究 取得了巨大的成绩，由抗体或配体修饰的免疫脂质体制剂，不仅延长了在体循环时间，同时 具有寻靶功能，增加药物的脑内递送。但是目前靶向递药手段将药物递送跨越BBB后如何 实现脑内病灶部位的进一步选择性是脑靶向给药研究面临的新难题。现有制剂手段在帮助 药物通过BBB后，缺乏在脑内的二次选择作用，因而脑内病灶部位的药物浓度仍然不高，且 对正常细胞同样产生损害。因此如何建立不仅可跨越BBB而且可进一步到达脑内病变部位 的脑靶向给药系统，是脑卒中治疗的关键。
[0004] 正常脑组织内无白细胞，但大量研究证实，在脑缺血/再灌注过程中，白细胞（主 要为中性粒细胞及单核细胞）可在细胞因子调控的趋化性作用下被激活，聚集于脑微血管 并通过BBB，浸润缺血脑组织。被活化的白细胞同时释放炎性介质及有毒物质（氧自由基 等），加重脑内局部炎症反应及氧化损伤，加重缺血后神经元损伤。因此，脑缺血/再灌注过 程中，白细胞不仅可通过BBB，而且可以到达脑内神经元损伤的部位。在这一病理过程中，血 循环中的白细胞是关键：其在细胞因子调节的趋化性作用下穿越BBB并到达缺血脑组织， 如果能利用白细胞，使其携带载药系统跨越BBB并到达脑内缺血组织，则可构建一种十分 理想的具有多级脑靶向功能的传输系统。
[0005] R⑶肽（Arg-Gly-Asp)是由精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸构成的三肽序列，为纤维 连接蛋白与其受体的特异性结合位点。RGD肽与整合素受体ανβ3具有高度亲和力，而 α νβ 3受体在肿瘤血管新生过程中的内皮细胞上具有高度的表达，因此采用R⑶修饰的载 体或诊断试剂可应用于肿瘤的治疗及诊断。此外，以RGD三肽为活性中心，研究合成了一系 列五肽、七肽、环肽或拟肽化合物，结果环化肽在体内具有更稳定的结构和更强的活性。近 年来以RGD三肽为活性中心的系列多肽在肿瘤靶向制剂方面的研究极为活跃并取得效果。
[0006] 与本发明相关的现有技术有：
[0007] 1.王大为，付研.急诊血栓栓塞性疾病的诊断与救治.世界急危重病医学杂 志· 2006, 3(4) :1385-1389.
[0008] 2. Tosi G, Costantino L, et al. Polymeric nanoparticles for the drug delivery to the central nervous system. Expert Opin Drug Deliv. 2008Feb ； 5(2) :155-74.
[0009] 3. Suzuki Y，Matsumoto Y，et al. SM-20220, a Na (+)/H (+) exchanger inhibitor: effects on ischemic brain damage through edema and neutrophil accumulation in a rat middle cerebral artery occlusion model.Brain Res. 2002,945(2):242-248.
[0010] 4. Phillips JBjWilliams AJjet al. Proteasome inhibitor PS519reduces infarction and attenuates leukocyte infiltration in a rat model of focal cerebral ischemia. Stroke. 2000, (7):1686-1693.
[0011] 5. Auzzas Lj Zanardi Fj Battistini L，et al. Targeting alphavbeta3integrin: design and applications of mono-and multifunctional RGD-based peptides and semipeptides. Curr Med Chem. 2010, 17(13):1255-1299.
[0012] 6. Shuang Liu. Radiolabeled Cyclic RGD Peptides as Integrina νβ 3-Targeted Radiotracers : Maximizing Binding Affinity via Bivalency. Bioconjug Chem. 2009, 20(12):2199-2213.
[0013] 7. Jain SjMishra Vj et al. RGD-anchored magnetic liposomes for monocytes/ neutrophils mediated brain t argeting. Inter J Pharm. 2003, 261:43-55.
[0014] 8.Eyal Aferganj Hila Epstein, Rachel Dahanj et al. Delivery of serotonin to the brain by monocytes following phagocytosis of liposomes. J Control Release，2008，（132)84-90.。
【发明内容】
[0015] 本发明的目的在于，提供一种不同于现有技术的以RGD为活性中心的多肽。
[0016] 本发明进一步提供了 RGD为活性中心的多肽作为靶头在构建缺血性脑卒中靶向 递药系统中的应用。
[0017] 基于现有技术的基础，事实上除α νβ 3外，R⑶肽与整合素受体家族中α νβ 1同 样具有高度的亲和力。α V β 1是在白细胞表面高度表达的整合素受体，因此RGD修饰的载 体可通过与ανβ?的高亲和力与白细胞结合，然后在炎症反应过程中被白细胞携带通过 BBB并到达脑内受损部位，实现多级脑靶向目。
[0018] 本发明中，以R⑶三肽为活性中心的多肽包括五肽、七肽、环肽或拟肽化合物，所 述的R⑶肽是由精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸构成的三肽序列（Arg-Gly-Asp);本发明的实 施例中优选环状RGD多肽；
[0019] 在本发明中，进行了以RGD为活性中心的多肽作为靶头在构建缺血性脑卒中靶向 递药系统试验，结果表明，本发明以RGD为活性中心的多肽作为靶头，应用于不同给药系统 后，可获得明显的脑靶向递药的效果，并显著提高了模型药的疗效。
[0020] 本发明中，所述的递药系统包括但不限于：脂质体、纳米粒、磷脂复合物、微球、聚 合物、纳米球、纳米乳、自微乳、包合物等任何一种常见于临床的剂型；
[0021] 本发明中，所述的RGD肽应用于递药系统的方式包括但不限为：与递药系统中的 任何一种常见的功能性材料偶联，所述的功能性材料为：一端含NHS活泼酯，一端含疏基等 任何一种常见的可与多肽发生反应的基团，本发明的实施例中，优选的功能性材料包括但 不限定为：功能性磷脂、功能性胆固醇、功能性PEG、功能性聚合物、功能性胆固醇等
[0022] 本发明中，以RGD为活性中心的线性肽及环状肽修饰纳米给药系统，可显著提高 该系统在缺血性脑卒中缺血病灶的药物蓄积，具有明显的脑内病变部位的二级靶向递药特 征。应用该系统包载抗氧化药物，可明显提高依达拉奉在缺血再灌注模型大鼠体内的抗氧 化效果，降低梗死体积。其机制主要涉及到缺血性脑卒中发病过程中的炎症反应。
[0023] 下面结合附图和具体的实施方案仅作为本发明的解释，但绝不是对本发明的限 制。
【附图说明】
[0024] 图I，RGD及反应液TLC检识图。
[0025] 图2, RGDL粒径分布㈧及透射电镜照片（B)。
[0026] 图3I/R裸鼠给予RGDL-Dir后脑部荧光照片，其中，
[0027] A: RGDL-Dir ;B: PL-Dir〇
[0028] 图 4, DSPE-PEG-NHS (A)和 DSPE-PEG-cRGD (B)modi-toff 图谱。
[0029] 图5，cRGDL及PL粒径分布。
[0030] 图6，cRGDL及PL透射电镜照片。
[0031] 图7,激光共聚焦显微镜照片，其中
[0032] A绿色：CFSE染色的THP-I细胞；B红色：Cy5标记的脂质体；C :AB叠加照片。
[0033] 图8, cRGDL-Dir及PL-Dir给予I/R裸鼠后活体荧光照片，其中
[0034] A: cRGDL-Dir ;B: PL-Dir。
[0035] 图9, I/R裸鼠给予PL-Dir或cRGDL-Dir后脑组织切片TTC染色（A)及荧光照片 ⑶。
[0036] 图10,炎症小鼠给予PG溶液组，普通纳米粒组PG，cRGD-NP及cRGD-NP后组织分 布结果。
[0037] 图11，I/R大鼠分别于在再灌后不同时间给予不同处方后脑梗死体积结果。
[0038] 图 12, I/R 裸鼠给予 PL-Dir，RGDL-Dir 及 cRGDL-Dir 后活体荧光。
【具体实施方式】
[0039] 实施例1
[0040] RGD与憐脂的偶联：
[0041] 精密称取适量线性 RGD 三肽和 DSPE-PEG-NHS(肽：DSPE-PEG-NHS = 1:2, molar ratio)，分别溶解于少量无水无氨DMF中，搅拌至全部溶解。将肽溶液缓慢滴加至快速搅拌 下的DSPE-PEG-NHS溶液中，加入少量三乙胺调节pH至碱性，通氮气保护，室温搅拌反应24 小时。反PL应过程中用TLC法茚三酮显色反应跟踪检测，直至肽的斑点消失，终止反应。 TLC展开剂为正丁醇：冰醋酸：水=3:1:2。反应终点TLC照片见图1。结果薄层板左侧 R⑶斑点清晰可见，说明该反应可灵敏检出R⑶肽，右侧反应终点时已不能检出RGD，说明已 反应完全。葡聚糖凝胶柱G-50分离纯化得到DSPE-PEG-R⑶冻干备用；
[0042] RGD修饰的脂质体（RGDL)的制备：
[0043] 称取大豆磷脂100mg，A胆固醇20mg，DSPE-PEG-RGD 4mg置于250mL茄形瓶中，加 入IOmL氯仿溶解，室温旋蒸成膜。加入3mL无水乙醚，将磷脂膜复溶，再加入ImL蒸馏水， 水浴超声5min形成白色的w/o乳剂。40°C旋蒸，抽去乙醚，形成粘稠透明凝胶后，补加9mL 水，继续旋转洗膜，磁力搅拌lh，探头超声，得RGDL ;
[0044] 处方中不加入DSPE-PEG-RGD，按上述方法制备得到普通脂质体（plain liposome， PL);焚光标记脂质体的制备：
[0045] 将Dir加入脂质体处方（Dir:磷脂1:100mol/mol)，然后同上称取大豆磷脂 l〇〇mg，胆固醇20mg，DSPE-PEG-RGD 4mg置于250mL茄形瓶中，加入IOmL氯仿溶解，室温旋 蒸成膜。加入3mL无水乙醚，将磷脂膜复溶，再加入ImL蒸馏水，水浴超声5min形成白色的 w/o乳剂。40°C旋蒸，抽去乙醚，形成粘稠透明凝胶后，补加9mL 7K，继续旋转洗膜，磁力搅拌 lh，探头超声，得Dir标记的RGDL-Dir ;
[0046] 处方中不加入DSPE-PEG-RGD，按上述方法制备得到荧光标记的普通脂质体 PL-Dir ；
[0047] RGDL的评价：将制备的RGDL适当稀释，以粒径仪测其粒度分布及Zeta电位，结果 如图2A-B所示，RGDL粒径约为115nm，形态为类圆形；
[0048] 采用大脑中动脉闭塞术制备裸鼠缺血再灌注（I/R，Ischemic/Reperfusion)模 型。将RGDL-Dir给予I/R模型裸鼠，给药后采0. 511、111、311、611、9、1211用小动物活体成像仪 观察裸鼠脑部荧光强度，结果见图3 (红色方框内为脑部），结果可见，RGDL-Dir组裸鼠脑部 给药后Ih即出现明显的荧光，3-9小时内均持续检测到较强的荧光。PL-Dir组Ih有微弱 荧光，其他时间内与RGDL-Dir相比均未检测到荧光，说明RGDL-Dir可明显的聚集于脑内， 具有较强的脑靶向作用。
[0049] 实施例2
[0050] RGD环肽与磷脂的偶联：
[0051] 精密称取适量 RGD 五环肽（cRGD，Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)和 DSPE-PEG-NHS (肽：DSPE-PEG-NHS = 2:1，molar ratio)，分别溶解于少量无水无氨 DMF 中， 搅拌至全部溶解。将肽溶液缓慢滴加至快速搅拌下的DSPE-PEG-NHS溶液中，加入少量三乙 胺调节pH至碱性，通氮气保护，室温搅拌反应24小时。葡聚糖凝胶将DSPE-PEG-cRGD与未 反应的小肽分离。然后将DSPE-PEG-cR⑶和DSPE-PEG-NHS进行modi-toff检测，结果如图 4所示，从图中可以看出，DSPE-PEG-NHS的平均分子量为4273, DSPE-PEG-cR⑶的平均分子 量为4633, DSPE-PEG-cR⑶的质子峰向右迀移，说明cR⑶肽已成功和DSPE-PEG-NHS偶联；
[0052] cRGD修饰的脂质体（cRGDL)的制备：
[0053] 称取大豆磷脂100mg，A胆固醇20mg，DSPE-PEG-cRGD 6mg置于250mL茄形瓶中，加 入IOmL氯仿溶解，室温旋蒸成膜。加入3mL无水乙醚，将磷脂膜复溶，再加入ImL蒸馏水， 水浴超声5min形成白色的w/o乳剂。40°C旋蒸，抽去乙醚，形成粘稠透明凝胶后，补加9mL 水，继续旋转洗膜，磁力搅拌lh，探头超声，得cRGDL ;
[0054] 处方中不加入DSPE-PEG-cRGD，按上述方法制备得到普通脂质体（plain liposome，PL);焚光标记脂质体的制备：
[0055] 将碘化1，Γ -双十八烷基3, 3, 3'，3' -四甲基吲三羰花青（Dir)或3H-吲哚菁 类染料（Cy5)加入脂质体处方（Dir/Cy5:磷脂l:100mol/mol)，然后同上称取大豆磷脂 l〇〇mg，胆固醇20mg，DSPE-PEG-cRGD 6mg置于250mL茄形瓶中，加入IOmL氯仿溶解，室温旋 蒸成膜。加入3mL无水乙醚，将磷脂膜复溶，再加入ImL蒸馏水，水浴超声5min形成白色的 w/o乳剂。40°C旋蒸，抽去乙醚，形成粘稠透明凝胶后，补加9mL 7K，继续旋转洗膜，磁力搅拌 lh，探头超声，得Dir标记的cRGDL-Dir ;Cy5标记的cRGDL-Cy5 ;
[0056] 处方中不加入DSPE-PEG-cRGD，按上述方法制备得到荧光标记的普通脂质体 PL-Dir 或 PL-Cy5 ;
[0057] cRGDL的评价：将制备的cRGDL及PL适当稀释，以粒径仪测其粒度分布，透射电镜 观察其形态，结果见图5-6。cRGDL粒径约为114nm，PL粒径约为llOnm，二者平均粒径及粒 径分布无显著差异，cRGDL及PL透射电镜观察均为类圆形；
[0058] 将人单核细胞株THP-I细胞株用含10% FBS、5 % NEAA、5 % PS的1640细胞培养 基培养在37°C，5% CO2的培养箱中，隔天换液，当细胞密度达到IX 10 5个/cm 2时加入羧基 荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE)细胞质染料孵育。然后cRGDL-Cy5脂质体共同孵育 30min，激光共聚焦显微镜观察脂质体被THP-I细胞摄取的情况，结果如图7所示，cRGDL可 被THP-I大量摄取进入细胞质内，THP-I为人源白细胞株，说明cRGDL可以与白细胞结合；
[0059] 采用大脑中动脉闭塞术制备裸鼠缺血再灌注（I/R，Ischemic/Reperfusion)模 型。将cRGDL-Dir给予I/R模型裸鼠，给药后采0. 5h、lh、2h、4h、6、8h用小动物活体成像 仪观察裸鼠脑部荧光强度，结果见图8。结果可见，cRGDL-Dir组裸鼠脑部给药后30min后 即出现明显的荧光，8小时内均持续检测到较强的荧光，PL-Dir组均未检测到荧光，说明 cRGDL-Dir可明显的聚集于脑内，具有较强的脑靶向作用；
[0060] 12h后将动物处死，取脑组织脑冷冻切片TTC染色后发于小动物活体成像仪检测， 结果见图10。TTC切片染色中可见白色部分为缺血区域（如图9A所示），活体成像照片中 左侧对应区域可见明显荧光聚集（如图9B所示），与TTC染色缺血区域重合，说明cR⑶修 饰的脂质体与普通脂质体相比具有明显的二级脑靶向作用，可聚集于脑内缺血部位。
[0061] 实施例3
[0062] 载掊丙酯（PG)纳米粒的制备及靶向性评价
[0063] 将掊丙酯 100mg、单甘酯 600mg，2mol % 的 DSPE-PEG-RGD 或 DSPE-PEG-cRGD，溶于 15ml乙醇中，超声溶解，再加入磷脂100mg，微热形成有机相。另取泊洛沙姆溶于水中，构成 泊洛沙姆浓度为〇. 5 %的水相，在搅拌下将有机相用针头注入30ml水相中，整个过程保持 温度在75°C左右，继续搅拌，浓缩体积至原来的1/3,将所得的半透明体系快速混于0-2°C 的20ml水相中，继续搅拌90min，即得载药RGD-NP，cRGD-NP ;
[0064] 按上述方法不加入DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-cR⑶即可得载药普通纳米粒NP ;
[0065] 将上述三种纳米粒及PG药物溶液组尾静脉给予IL-I β致炎症模型小鼠，每组12 只，剂量分别以PG计算为12mg/kg ;给药后10,15min立即处死，解剖取心、肝、脾、肺、肾、 脑组织；组织样品用生理盐水冲洗表面血液和内容物后，滤纸吸干后称重，装入自封袋中， 于-20°C冰箱冻存待测，取各组织样品取0.1 g(不够0.1 g的全取），加入lmL30%甲醇溶 液进行组织匀浆，测定给药后各组织药物含量，结果如图10所示，与溶液组PG相比，NP， RGD-NP，cRGD-NP均可显著提高药物脑内浓度，且RGD-NP及cRGD-NP效果优于NP ;cRGD-NP 与RGD-NP相比，脑内药物浓度显著提高，说明cRGD-NP脑靶向作用强于RGD-NP。
[0066] 实施例4
[0067] 载依达拉奉脂质体的制备
[0068] 精密称取大豆磷脂100mg，胆固醇20mg，依达拉奉10mg，2mol %的DSPE-PEG-RGD或 DSPE-PEG-cRGD置于250ml茄形瓶中，加入IOml无水乙醇，水域超声完全溶解，25°C减压旋 转蒸干成膜，加入蒸馏水溶液l〇ml，25°C旋转使膜溶解，探头超声。即可得到载有依达拉奉 的ER-RGD-L，ER-cRGD-L。如果不加入DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-cR⑶即得到普通脂质体 ERL，分别测定三种脂质体的包封率，载药量，平均粒径及Zeta电位，结果如表1所示，三种 脂质体包封率约为75%，载药量约为5%，平均粒径IlOnm左右，Zeta电位-20mV左右，由 此可见载入药物或RGD/cRGD靶头修饰不影响脂质体理化性质；
[0069] 表1三种脂质体理化性质表征
[0071] 载依达拉奉脂质体药效学评价
[0072] SD大鼠90只，随机分为6组，分别为：假手术组、依达拉奉溶液组（ERS组）、ERL 组、ER-RGD-L组、ER-cRGD-L组，模型组（Model组）。实验前12h禁食，自由饮水，大脑中动 脉闭塞术建立大鼠 I/R模型，于再灌他、311、611、1211、2411尾静脉分别注射上述4种不同的制 剂，假手术组及模型组给予PBS水溶液。48h后进行神经功能评分，结果如表2所示，然后用 0. 9% NaCl溶液将大鼠心脏灌流，取出脑组织，在-20°C条件下速冻20min后切片，2% TTC 染色后计算脑梗死面积％，结果如图12所示，
[0073] 脑梗死面积％ =(手术侧半球的面积一手术侧未梗死部的面积）/手术侧半球的 面积X 100%
[0074] 神经功能评分结果
[0075] 各组大鼠给药48h后对其进行神经功能评分，从表2中看出，再灌各个时间点给药 后，模型组大鼠均无法行走，神经功能得分最高（平均4分），表明造模成功。ERS组除Oh 及24h给药外，神经功能评分与模型组有显著性差异，下降幅度不大（平均3. 4分）动物表 现为可以行走，但出现向一侧倾倒的现象，说明再灌后3-12h给予依达拉奉可促进I/R动物 神经功能恢复，但程度较小，
[0076] ERL组0_24h给药神经功能评分与模型组均有显著性差异说明ERL对I/R大鼠的 神经功能恢复具有明显的促进作用（平均3分）；与ERS组相比，Oh及24h给药与ERS组有 显著性差异，3-12h给药评分与ERS组无显著性差异，说明3-12h给药ERL与ERS促进神经 功能恢复的程度无差异，但ERL可明显加宽ER的治疗窗，将给药时间延长至24h，
[0077] ER-RGD-L组0_24h给药后多数动物只表现出行走时顺时针旋转，神经功能评分与 模型组、ERS组及ERL组相比均有显著性差异，说明ER-RGD-L具有明显的促进神经功能恢 复作用，且恢复程度显著高于ERS及ERL，
[0078] ER-cRGD-L组0_24h给药后动物仅仅出现右前肢无法伸直，无不能行走、行走倾 倒或顺时针转圈的现象出现，神经功能评分最低且下降幅度最大，与模型组、ERS、ERL及 ER-RGD-L相比均具有显著性差异，说明ER-cRGD-L各时间点给药均具有明显的治疗效果， 且效果显著优于ER-RGD-L、ERL、ERS及模型组，动物神经功能恢复水平在各组中处于最优 水平；
[0079] 表.2神经功能评分结果（η = 3)
[0081] 脑梗死面积评价结果
[0082] 图11脑梗死面积计算结果表明，模型组大鼠梗死体积达到30%以上，说明造模成 功，假手术组未出现梗死，说明并没有假阳性结果的干扰；ERS组与模型组比较，0_24h给药 后梗死面积均有显著性差异，ER可减小梗死面积，但0-24h不同时间给药效果无差异；
[0083] ERL组0_24h给药，脑梗死面积与模型组比较均具有显著性差异，说明ERL可显著 减小IS造成的脑梗死面积；与ERS组比较，0-6h给药梗死面积无显著性差异，12h及24h给 药梗死面积显著小于ERS组，说明ERL0-6h内给药对ER治疗效果无增强作用，但12h及24h 给药可显著提高ER治疗效果且拓宽了 ERS的治疗窗；
[0084] ER-RGD-L组及ER-cRGD-L组0-24h给药与模型组、ERS组及ERL组比较，脑梗死面 积均有显著下降，且ER-cRGD-L组下降得更多，说明ER-RGD-L及ER-cRGD-L均可增强ER治 疗作用，效果优于ERL，且ER-cRGD-L作用效果最优；
[0085] 荧光标记的PL，RGDL及cRGDL的制备及靶向性评价
[0086] 称取大豆磷脂 300mg，胆固醇 60mg，DSPE-PEG-RGD 或 DSPE-PEG-cRGD 2mol %置于 250mL茄形瓶中，加入IOmL氯仿溶解，室温旋蒸成膜。加入3mL无水乙醚，将磷脂膜复溶， 再加入ImL蒸馏水，水浴超声5min形成白色的w/o乳剂。40°C旋蒸，抽去乙醚，形成粘稠透 明凝胶后，补加9mL水，继续旋转洗膜，磁力搅拌lh，探头超声，得RGDL-Dir和cRGDL-Dir。 如果不加入DSPE-PEG-RGD或DSPE-PEG-cRGD，即得到PL-Dir。将三种脂质体分别给予 I/R模型裸鼠，并与给药后24h于小动物活体荧光仪检测荧光，结果如图12所示，结果与 PL-Dir相比，RGDL-Dir和cRGDL-Dir具有明显的脑靶向作用，且cRGDL-Dir作用明显强于 R ⑶ L-Dir〇
【主权项】
1. 一种以RGD为活性中心的多肽，其特征在于，所述多肽包括五肽、七肽、环肽或拟肽 化合物，所述的R⑶肽是由精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸构成的三肽序列（Arg-Gly-Asp)。2. 权利要求1所述的RGD为活性中心的多肽在制备缺血性脑卒中靶向递药系统中的用 途，其中所述的多肽作为靶头。3. 按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的递药系统选自脂质体、纳米粒、磷脂 复合物、微球、聚合物、纳米球、纳米乳、自微乳或包合物中任何一种剂型。4. 按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的RGD肽用于递药系统的方式为：与递 药系统中的任何一种常见的功能性材料偶联。5. 按权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的功能性材料为：一端含NHS活泼酯， 一端含巯基的可与多肽发生反应的基团。6. 按权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述的功能性材料为：功能性磷脂、功 能性胆固醇、功能性PEG、功能性聚合物或功能性胆固醇等。
【文档编号】C07K7/06GK105859832SQ201510024557
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2015年1月19日
【发明人】秦晶, 王建新, 侯佳, 杨旭, 谢运飞
【申请人】复旦大学