一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物及其提取方法和应用

一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物及其提取方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物及其提取方法和应用，属于医药技术领域。本发明的云牛膝多糖从云牛膝的茎和/或叶和/或根中提取得到，分子量范围为0.5～3kD，结构单元包括葡萄糖、半乳糖和半乳糖醛酸，单糖摩尔比为(10?30):1(2.5?4)。本发明主要开发云牛膝茎和/或叶和/或根部位，成本低，变废为宝，具有显著的社会价值和市场价值，具有良好的开发应用前景，云牛膝茎和/或叶和/或根的多糖提取物对肿瘤有显著的抑制作用及增强免疫力的功能，可用于制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品。
【专利说明】
一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物及其提取方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，更具体地说，涉及一种具有抗肿瘤活性和具有免疫增 强活性的云牛膝茎和/或叶和/或根多糖及其应用。
【背景技术】
[0002] 近几十年来，在抗肿瘤、抗病毒药及延缓衰老药等方面，免疫调节剂药物已日益凸 显出其优越性。大量的药理和临床研究表明，多糖类化合物是一种良好的免疫调节剂，它能 激活免疫细胞，提高细胞的免疫功能，而对正常的细胞没有毒副作用。例如从天然产物中分 离得到的灵芝多糖、香菇多糖等，它们与感染、肿瘤、炎症和一些自身免疫性疾病有密切关 系，它们通过影响网状内皮系统、巨噬细胞、抗体和补体的产生及干扰素等来促进机体细胞 和体液免疫反应，达到治疗疾病和保健的目的。
[0003] 目前，关于植物提取多糖的抗肿瘤研究报道很多。例如，中国专利申请号为 201510169864.0,申请公布日为2015年9月2日的专利申请公开了树莓多糖在抗肿瘤中的应 用，树莓多糖对起源于人的皮肤、头颈部、脑、甲状腺、胰腺、食管、结肠或直肠、卵巢、前列腺 的肿瘤都有良好的抑制作用，且作用与化疗药物相近似，毒副作用更小，为治疗或预防肿瘤 提供了新的选择。中国专利申请号为201210551228.0，授权公告日为2014年12月10日的专 利申请公开了具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法，该多糖是由摩尔比为1:0.9: 1:2.14:1.0的β-D-吡喃葡萄糖、α-D-吡喃甘露糖、α-D-半乳糖和α-L-吡喃岩藻糖构成，分子 量为8867。该多糖的基本单元的结构式为a-D-吡喃半乳糖（1-6)，和a-D-吡喃甘露糖(2- 6)为主链及甘露糖C-3分支连接a-L-吡喃岩藻糖（1-3)连接β-D-吡喃葡萄糖( - 1)。该发明 通过大量实验优选提取分离工艺，首先采用水提醇沉法得到粗多糖，再脱蛋白，然后DEAE-52纤维素树脂和SephadexG-100凝胶树脂联用进行纯化，制得纯度高的黄蜀葵花多糖，经过 抗肿瘤实验结果表明，该发明提供的黄蜀葵花多糖具有很好的抗肿瘤活性，并且长期使用 无不良反应，可以方便和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物，临床上服用方便。
[0004] 牛膝，别名：牛??膝，拉丁文名:Achyranthes bidentata Blume·苋科、牛膝属多年 生草本，高70-120厘米;根圆柱形，直径5-10毫米，土黄色;茎有棱角或四方形，绿色或带紫 色，有白色贴生或开展柔毛，或近无毛，分枝对生。叶片椭圆形或椭圆披针形，少数倒披针 形，基部楔形或宽楔形，两面有贴生或开展柔毛;退化雄蕊顶端平圆，稍有缺刻状细锯齿。胞 果矩圆形，黄褐色，光滑。种子矩圆形，黄褐色。花期7-9月，果期9-10月。根入药，生用，活血 通经。牛膝根据产地不同可分为怀牛膝和川牛膝，科学家们从怀牛膝和川牛膝中提取到2种 结构不同、相对分子质量较小的多糖，分别命名为怀牛膝多糖(Aehyranthes Mdentata polysaeeharides，AbPS)和川牛膝多糖(RCP)。由于对AbPs的研究较为深入，所以一般意义 上的牛膝多搪是指AbPS。研究发现AbPS是一种果聚糖，其相对分子质量小，水溶性好，易被 人体吸收，具有广谱的免疫调节活性和较好的抗肿瘤作用。纯化后的AbPS为均一多糖，相对 分子质量为1300-1400;经完全酸水解后进行高效液相色谱(HPLC)分析，显示AbPS是由果糖 和葡萄糖以8:1(物质的量比）组成的，同时相对分子质量分布显示AbPS含有4-21糖。对牛膝 多糖的研究由来已久，例如中国专利申请号为881055 24.7，授权公告日为1989年12月6日的 专利申请公开了从中药牛膝中提取牛膝多糖的方法。该发明以中药牛膝为原料，对其浸泡 液用与水互溶的丙酮进行二级分级沉淀后，再透析及冷冻干燥，得到的粗牛膝多糖再进行 一次醇类沉淀后，即得牛膝多糖精制品。中国专利申请号为02110987.7，授权公告日为2003 年2月19日的专利申请公开了牛膝多糖衍生物、制备方法和用途。其牛膝多糖衍生物包括牛 膝多糖磷酸酯(盐)及羟烷基牛膝多糖，其是用磷酸化试剂或羟烷基化试剂，在相应条件下 与牛膝多糖生成不同取代度的牛膝多糖衍生物，这一系列不同取代度的牛膝多糖衍生物经 生物活性试验表明，具有抗肿瘤及增强免疫功能的作用。
[0005] 云牛膝（Achyranthes aspera L · var · rubrafusca(Wight)Hook · f · [A · rubro-fusca Wi-ght])别名昆明土牛膝、拐牛膝、鸡豚草，为土牛膝的变种，为苋科植物红褐粗毛 牛膝的根及根茎。味苦、性平，归肝、肾经，具有活血通经、利尿通淋、清热解毒之功效。主腰 膝疼痛、风湿痹痛、闭经、淋浊、疔疮痈肿、毒蛇蛟伤。形似原种粗毛牛膝多年生草本，高20-120cm。根细长，直径3-5mm，土黄色。据《滇南本草》记载，云牛膝可治疔疮、痈疽，敷患处；亦 能打胎；同猪肉煨食之，能明日。川牛膝呈近圆柱形，微扭曲，向下略细或有少数分枝，表面 黄棕色或灰褐色，具纵皱纹、支根痕和多数横长的皮孔样突起。质韧，不易折断，断面浅黄色 或棕黄色，维管束点状，排列成数轮同心环。气微，味甜。怀牛膝因产于历史上的怀庆府而得 名，位于今河南焦作一带。其条子粗壮、明亮、色泽鲜艳、油性多。怀牛膝侧重补肝肾强筋骨， 川牛膝侧重活血化瘀。川牛膝主治血瘀经闭，痛经，难产，胞衣不下，关节痹痛，足痿筋挛，尿 血，血淋，跌扑损伤。通过对比云牛膝、川牛膝、怀牛膝的特征及功能，发现产地不同，其药用 价值及成分也有一定差异。

【发明内容】

[0006] 1.要解决的问题
[0007] 针对目前云牛膝的研究存在空白、药用价值开发不足的问题，本发明提供一种云 牛膝茎和/或叶和/或根多糖的提取方法及多糖在制备抗肿瘤药物和增强免疫力保健品中 的应用。本发明中的云牛膝多糖从云牛膝的茎和/或叶和/或根中提取得到，分子量范围为 0.5~3kD，结构单元包括葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸和岩藻糖，具有抗肿瘤和增强免疫力 活性。
[0008] 2.技术方案
[0009] 为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
[0010] 一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物，提取物的组分为多糖。
[0011]优选地，所述的多糖的分子量范围为〇. 5~3kD。
[0012] 优选地，所述多糖的结构单元包括葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸和岩藻糖，葡萄糖、 半乳糖、半乳糖醛酸和岩藻糖之间的摩尔比为(12-40): 1: (3-5): (0.5-6)。
[0013] 优选地，所述多糖的结构单元包括葡萄糖、半乳糖和半乳糖醛酸，葡萄糖、半乳糖 和半乳糖醛酸之间的摩尔比为（10-30) :1(2.5-4)。
[0014] 上述的云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物在制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保 健品中的应用。
[0015] 优选地，所述的肿瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、胶质瘤、黑色素瘤和宫 颈癌以及起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肺脏、肝脏、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结 肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱、睾丸的原发或继发的癌、黑色素瘤以及肉瘤。
[0016] 云牛膝茎和/或叶和/或根多糖在制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品中的应 用。
[0017] 云牛膝茎和/或叶和/或根在制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品中的应用。
[0018] 一种抗肿瘤药物，包括云牛膝茎和/或叶和/或根多糖。
[0019] 一种云牛膝茎和/或叶和/或根的资源化利用方法，其步骤包括：（1)采集云牛膝的 茎和/或叶和/或根；（2)从云牛膝的茎和/或叶和/或根中提取多糖；（3)将步骤(2)中提取的 多糖制备成抗肿瘤药物或增强免疫力型保健品。
[0020] 本发明首次对云牛膝及云牛膝茎和/或叶和/或根多糖进行开发，包括其相对分子 量、单糖组成、免疫增强活性及抗肿瘤活性。云牛膝多糖的提取与一般植物多搪的提取方法 相同，可经洗净、烘干、粉碎、用水提醇沉，或用丙酮沉淀，再经浓缩，离心和透析，即可得云 牛膝多糖粗品。粗云牛膝多糖的分离纯化，一般要经过CM-Sephadex C50和Sephadex G50两 次纤维柱层析，可得到较纯的云牛膝多糖。云牛膝多糖（A c h y r a n t h e s a s p e r a polysaccharid^AAP)是指从云牛膝的茎和/或叶和/或根中提取获得。目前尚无文献报道 其成分及活性的研究。
[0021] 3.有益效果
[0022] 相比于现有技术，本发明的有益效果为：
[0023] (1)本发明中的从云牛膝的茎、叶、根提取得到的多糖对肿瘤有显著的抑制作用及 增强免疫力的功能，可用于制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品；
[0024] (2)本发明中云牛膝多糖通过细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞和增强NK细胞 活性方面等测定其有增强机体免疫力活性，并通过体外实验证实云牛膝多糖能有效的抑制 胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、结肠癌、胶质瘤和血管癌的增殖，在75yg/mL浓度下，对 卵巢癌、胃癌、子宫颈癌抑制率达到50%以上；lOOyg/mL浓度下，对子宫癌细胞抑制率达到 65%以上，对肺癌细胞抑制率达到50%以上;在体内检测其对S180小鼠肉瘤的抑制作用，结 果发现75mg/kg，其抑瘤率可达53.61 %，与阳性药环磷酰胺效果相当，且几乎无毒副作用； [0025] (3)本发明首次采用云牛膝茎、叶、根提取多糖，并发现其具有抗肿瘤和增强免疫 活性的作用，并公开了将云牛膝茎、叶、根中提取的多糖应用于制备抗肿瘤辅助药物和增强 免疫力保健品，能够抑制肿瘤的恶化和增强机体免疫力，可作为包括胃癌、肺癌、肝癌、乳腺 癌、结肠癌、胶质瘤、黑色素瘤和宫颈癌以及起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、 肺脏、肝脏、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱、睾丸的原 发或继发的癌、黑色素瘤以及肉瘤等的治疗或辅助治疗用药及增强免疫力保健品；
[0026] (4)本发明主要开发云牛膝茎、叶、根部位，成本低，变废为宝，具有显著的社会价 值和市场价值，具有良好的开发应用前景。
【附图说明】
[0027]图1为本发明中混合单糖标准品的HPLC色谱图；
[0028]图2为本发明中云牛膝多糖样品1的HPLC色谱图。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
[0030] 实施例1
[0031] 云牛膝多糖的提取
[0032]本发明分别从云牛膝的茎、叶和根中提取多糖，在提取过程中，将云牛膝的茎和叶 放在一起提取，对云牛膝的根单独提取，具体的提取方法如下：称取干燥云牛膝茎和叶（或 根)细段20g，超声波破碎2h，功率比为90%，后用沸水加热提取3h，抽滤后浓缩至原体积的 I/15;用4倍体积的无水乙醇沉淀，1000 rpm离心，5min;得到沉淀并用蒸馏水溶解，后用1 /3 倍体积的Sevag(氯仿:正丁醇=5:1，体积比）试剂除蛋白，重复3次，1000 rpm离心，5min，浓 缩并冻干得到云牛膝多糖粗品。
[0033] 用葡聚糖凝胶Sephadex G-50对云牛膝多糖粗品进行初步纯化。取Sephadex G-50 干粉100g，蒸馏水溶胀72h后，将溶胀好的葡聚糖凝胶用3倍体积的NaOH(0.02moI/L)浸泡 30min，蒸馏水洗至中性，再用HCl(0·02mol/L)同样处理，第三遍用0·02mol/L NaOH处理，蒸 馏水洗至中性。蒸馏水洗至中性。脱气后湿法装柱（IcmX 100cm)，蒸馏水平衡过夜后上样。 称取云牛膝多糖40mg，溶于2mL去离子水，充分溶解，0.45μπι滤膜过滤后上样。去离子水做流 动相进行洗脱，流出液用DSB-100A自动部份收集器收集，苯酚-硫酸法跟踪检测。以A 49q为纵 坐标，管号为横坐标绘制洗脱曲线，收集主峰，得到云牛膝多糖。
[0034]云牛膝多糖含量及单糖组成的测定 [0035] 一、主要试剂的配置
[0036] 80%硫酸蒽酮溶液：向装有20mL蒸馏水的烧杯沿壁缓慢加入SOmL浓硫酸，并不断 搅拌;待浓硫酸温度降至常温，向其中加入〇.2g的硫酸蒽酮固体，并不断搅拌，至完全溶解。 避光保存，现配现用。
[0037] 二、标准曲线的建立
[0038] 精确称取105°C干燥至恒重的葡萄糖100mg，定容至500mL容量瓶中，加蒸馏水至刻 度，混勾。在8支试管中分别加入0.2mg/mL葡萄糖标准溶液0.0mL、0 . lmL、0.2mL、0.3mL、 0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0 mL，补蒸馏水至1.0 mL，然后加入3mL 80%硫酸蒽酮溶液试剂 1.5mL，充分混匀。置于100°C沸水浴中煮沸15min，然后用流水迅速冷却。在620nm处读OD值。 以葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标，以OD值为纵坐标制作标准曲线，得到其线性回归方程:y = 9 · 5415x+0 · 003，R2 = 0 · 9994;线性范围为 0-0 · 2mg/mL。
[0039]三、多糖含量的测定
[0040] 吸取I.OmL的样品，按照上述步骤测定OD值，并代入回归方程中计算样品中的云牛 膝总多糖含量。
[0041 ]四、柱前衍生化HPLC法(PMP-HPLC)测定云牛膝多糖的单糖组成 [0042] 1.样品水解
[0043]分别称取3份5mg云牛膝多糖样品，分别标记为1、2、3、4、5(五种样品分别从不同采 集时间的云牛膝茎、叶、根中提取得到，提取方法如前所述，且均用葡聚糖凝胶Sephadex G-50进行初步纯化)于安瓿中，加入ImL 2mol/L的TFA，封口，于100°C水解8h，水解产物置于蒸 发皿中，80°C蒸干后加甲醇洗5次，洗涤后加 ImL双蒸水溶解水解样品。
[0044] 2.混合单糖标准品溶液的制备
[0045]称取核糖Rib、甘露糖Man、岩藻糖Fuc、鼠李糖Rha、阿拉伯糖Ara、半乳糖Gal、葡萄 糖Glc、木糖Xyl、半乳糖醛酸GalA、葡萄糖醛酸GlcA标准品各5mg，分别溶于ImL水中，再从中 各吸取相同体积的标准品溶液混合均匀，作为混合单糖对照品溶液。
[0046] 3.1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化HPLC
[0047] 取50yL上述样品水解液，加入50yL 0.6mol/L的NaOH，混匀后加入IOOyL 0.5mol/L 的PMP-甲醇液，混匀后置于70°C烘箱反应30min(注意避光），取出冷却后，再加入100μ LO. 3mol/L HCl，混匀后用ImL三氯甲烷萃取过量的PMP，静止后吸取上层水层再加入ImL氯 仿萃取，重复三次，将水层过0.45μπι滤膜作为样品溶液。
[0048] HPLC条件：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，色谱柱为waters symmetry C18(150mm X 4 · 6mm，5μπι)，检测器为紫外检测器，检测波长250nm，柱温30°C。流动相：KH2PO4溶液 (pH6.7)和乙腈按体积比83:17混合。进样量:20yL，流速:lmL/min。
[0049] 五、实验结果
[0050] 通过对比相同条件下混合标准单糖的保留时间可以得出云牛膝多糖样品1、2、3的 单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、岩藻糖，其中样品1的单糖摩尔比为31:1: 3 : 0.5;样品2的单糖摩尔比为12:1:5:2.5;样品3的单糖摩尔比为40:1:3:6(图1，图2)。
[0051 ]样品4、5的单糖主要由葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成，其中样品4的单糖摩尔比 为10:1: 2.5;样品5的单糖摩尔比为30:1:4。得出葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸之间的摩尔比 为（10-30):1(2.5-4)。
[0052] 实施例2
[0053]云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫器官的影响 [0054] 一、实验方法
[0055]按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，每组12只；分为空 白组、环磷酰胺(CY)模型组、香菇多糖+CY组(50mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云 牛膝多糖高剂量+CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂 量+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(25mg/kg)。每天上午空腹称重一次，云牛膝多 糖按l〇〇mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，1次/d，连续给 药19天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白组其余7组开始腹腔注射 CY 75mg/kg，l次/d，连续5天。
[0056] 第20天，小鼠称重，脱颈椎处死小鼠后无菌取脾脏、胸腺，称重。
[0057]胸腺指数(mg/g)=胸腺重/体重；
[0058]脾指数(mg/g)=脾重/体重。
[0059] 二、实验结果
[0060]表1云牛膝多糖对免疫抑制小鼠体重的影响
[0062]与模型组比较，*P〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[0063]实验结果表明，小鼠造模前两周各组平均体重都有增长的趋势，第三周造模后除 空白组外其余各组的体重都有不同程度的下降。其中模型组体重下降趋势较明显，而且经 试验观察模型组小鼠活动明显迟缓、消瘦、两眼呆滞、毛发无光泽、说明CY能抑制小鼠体重 的增长，推测对小鼠免疫系统有抑制作用。也说明了免疫抑制小鼠模型建立成功。而多糖能 促进CY小鼠体重的增长。
[0064]表2云牛膝多糖对免疫抑制小鼠脾、胸腺的重量及指数的影响
[0066] 与模型组比较，*P〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[0067] 实验结果表明，低剂量+CY组和高剂量+CY组脾重、胸腺重与模型组比较差异均显 著(P〈0.05);高剂量+CY组的脾指数、胸腺指数与模型组比较差异显著(P〈0.05);说明云牛 膝多糖能促进免疫抑制小鼠胸腺、脾脏的增长，提高其指数，对免疫抑制小鼠免疫器官有一 定的促进作用。
[0068] 实施例3
[0069] 云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫细胞的影响-碳廓清法试验方法
[0070] 一、实验方法
[0071] 按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，每组12只；分为空 白组、环磷酰胺(CY)模型组、香菇多糖+CY组(50mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云 牛膝多糖高剂量+CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂 量+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(25mg/kg)。每天上午空腹称重一次，云牛膝多 糖按l〇〇mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，1次/d，连续给 药19天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白组其余7组开始腹腔注射 CY 75mg/kg，l次/d，连续5天。
[0072]末次给药Ih后每只尾静脉注入50%印度墨汁，注入印度墨汁的量按小鼠空腹体重 0.1 mL/109计算。2min(Tl)和10min(T2)后立即分别从眼眶静脉丛采取20yL，同时立即注入 4mL 0.1 ^NaHCO3溶液中。两次采血完毕之后脱颈处死，取脾脏和肝脏并称重。以正常小鼠 血注入4mL 0.1 ^NaHCO3溶液中作对照。在可见分光光度计600nm波长处，以NaHCO3。溶液作 校对，测A值。结果以吞噬指数来表示。
[0073] !^(lgODi-lgODd/Urti))，吞噬指 α =体重/(肝重+脾重)*K1/3。
[0074] 二、试剂配制
[0075]印度墨水:用生理盐水稀释10倍，临用前配置。注射体积为0.1mL/10g。
[0076] 三、实验结果
[0077] 表3云牛膝多糖对免疫抑制小鼠吞噬指数α的影响
[0079] 与模型组比较，*Ρ〈〇 · 05，林 Ρ〈0 · 01。
[0080] 实验结果表明，CY模型组吞噬指数与空白组比较差异极显著(Ρ〈0.01)，与高剂量+ CY组比较差异极显著（Ρ〈0.01);中剂量+CY组和低剂量+CY组与模型组比较差异显著（Ρ〈 0.05)，小剂量+CY组与模型组比较无显著差异，说明云牛膝多糖能在一定程度上提高免疫 抑制小鼠的吞噬指数，增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能。
[0081 ] 实施例4
[0082]云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫细胞的影响-脾淋巴细胞增殖反应的测定 [0083] 一、实验方法
[0084]按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，每组12只；分为空 白组、环磷酰胺(CY)模型组、香菇多糖+CY组(50mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云 牛膝多糖高剂量+CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂 量+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(25mg/kg)。每天上午空腹称重一次，云牛膝多 糖按l〇〇mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，1次/d，连续给 药19天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白组其余7组开始腹腔注射 CY 75mg/kg，l次/d，连续5天。
[0085] 第18天，将小鼠摘眼球处死，于75%乙醇中浸泡5-10min。于超净工作台中无菌取 小鼠脾脏，PBS清洗，5mL注射器芯研磨，200目筛网过滤，制成单细胞悬液，离心1000r/min， 5min)，弃上清;TriS-NH4CI破解红细胞，离心（1000r/min，5min)，弃上清，重复3次;最后用 PBS清洗细胞，离心后加入10 %小牛血清的DMEM培养液。用血球计数板细胞计数，调整细胞 浓度为5 X IO6个/mL，于96孔板中培养。
[0086] 二、主要试剂的配置
[0087] 1.红细胞裂解液（Tris-NH4Cl):称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷（Tris) 1.3g加超纯水溶解并稀释至500mL，0.22μπι滤膜过滤除菌，4°C保存。
[0088] 2.磷酸盐缓冲液(？85):恥(：18.(^，1((：10.28，恥2册〇4.12!12〇2.9 8，诎2?〇4〇.28， 溶于1000 mL超纯水中，调节pH至7.4，高压灭菌后于4°C保存。
[0089]三、实验结果
[0090]表4云牛膝多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
[0093] 与模型组比较，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01。
[0094] 实验结果表明，CY模型组与空白组比较差异极显著(P〈0.01);三个剂量+CY组与模 型组比较差异显著(P〈〇. 05);小剂量+CY组和中剂量+CY组之间无显著差异，高剂量+CY组与 空白组比较无显著差异。说明云牛膝多糖能在一定程度上促进免疫抑制小鼠的脾淋巴细胞 的增殖，增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能。
[0095] 实施例5
[0096] 云牛膝多糖对免疫抑制小鼠血清血溶素水平的影响
[0097] -、实验方法
[0098]按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，每组12只；分为空 白组、环磷酰胺(CY)模型组、甘露聚糖肽+CY组(4mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云 牛膝多糖高剂量+CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂 量+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(25mg/kg)。每天上午空腹称重一次，云牛膝多 糖按l〇〇mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，给药体积为 0.1ml/10g，l次/d，连续给药19天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白 组其余7组开始腹腔注射CY 75mg/kg，1次/d，连续5天。给药后第14天上午，各鼠腹腔注射 20% (V/V)的生理盐水兔红细胞0.2mL进行免疫，同日下午继续给药。
[0099] 免疫后d6(免疫当天为d0)，动物摘眼球取血，收集尽量多的血液于1.5mL的EP管 中，置电热恒温培养箱中37°C下斜放温育1.5h，此时血清充分析出，2000rpm离心5min，收集 上清。取50yL血清样品于盛有450yL生理盐水的EP管中，即为10倍稀释;再取10倍稀释的样 品IOOyL加入96孔板(反应板)小孔中；来自一个动物的血清样品作为一个样本，每个动物的 样品进行同样的处理。然后每孔加体积分数为2%生理盐水兔红细胞和10%补体各50yL。再 做一组补红本底孔(2%生理盐水兔红细胞和10%补体各50yL+生理盐水IOOyL)和全溶血孔 (2%生理盐水兔红细胞50yL+蒸馏水150yL)，各3孔。置37°C恒温箱中温育3h，然后，取上清 液IOOyL移至另一96孔板(测量板）中，于450nm处用酶标仪测OD值，此时得到的数据分别为 样品溶血测量值、补红本底测量值、全溶血测量值。另取一 96孔板按照测量板的分布，每孔 加10倍稀释的样品和生理盐水各5〇yL，此为样品本底孔;另做3孔空白本底孔(每孔加生理 盐水IOOyL)。在450nm处测OD值，得到的数据分别为样品本底测量值和空白本底测量值，将 样品本底测量值减去空白本底测量值的平均值即为样品本底净值。结果以样品溶血OD净值 表示，样品溶血OD净值等于样品溶血测量值减去样品本底净值和补红本底测量值(3孔的均 值）。加2%生理盐水兔红细胞时要边混匀边加入，最好是样品按组别横向排列，红细胞按顺 序纵向依次加入小孔中。
[0100] 二、实验结果
[0101]表5云牛膝多糖对免疫抑制小鼠血清血溶素水平的影响 [0103]与模型组比较，*P〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[01 04]实验结果表明，CY( 75mg/kg)体内给药，可以明显抑制小鼠血清溶血素水平，与阴 性对照组比较具有极显著性差异(P〈〇. 01)。云牛膝多糖高、中剂量（100，75mg/kg)体内给 药，可以显著提高由环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的血清溶血素水平，与CY组比较具有显 著性差异（P〈〇.05)且呈现剂量依赖趋势。阳性对照药甘露聚糖肽（4mg/kg)、怀牛膝多糖 (50mg/kg)均可以显著提高由环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的血清溶血素水平，与CY组比 较具有极显著性差异(P〈〇. 01)。
[0105] 实施例6
[0106]云牛膝多糖对免疫抑制小鼠 NK细胞活性的影响-乳酸脱氢酶(LDH)测定法
[0107] 一、实验方法
[0108] 按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，每组12只；分为空 白组、环磷酰胺(CY)模型组、香菇多糖+CY组(50mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云 牛膝多糖高剂量+CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂 量+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(25mg/kg)。每天上午空腹称重一次，云牛膝多 糖按l〇〇mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，1次/d，连续给 药19天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白组其余7组开始腹腔注射 CY 75mg/kg，1次/d，连续5天。于末次给药Ih后处死动物，取脾进行实验。
[0109] (一)脾脏单细胞悬液的制备(效应细胞）
[0110] 将小鼠摘眼球处死，于75%乙醇中浸泡5-10min。于超净工作台中无菌取小鼠脾 脏，PBS清洗，5mL注射器芯研磨，200目筛网过滤，制成单细胞悬液，离心1000r/min，5min)， 弃上清;Tris-MMCl破解红细胞，离心（1000r/min，5min)，弃上清，重复3次;最后用I3BS清洗 细胞，离心后用ImL含10 %胎牛血清的RPMI1640完全培养基重悬，用台盼蓝染色计数活细胞 数(应在95%以上），最后用RPMI-1640完全培养基调整细胞浓度为2 X IO7个/mL。
[0111](二)靶细胞的传代(YAC-1细胞）
[0112]实验前24h将靶细胞进行传代培养。用前以PBS液洗3次，用RPMI1640完全培养液调 整细胞浓度为4 X IO5个/mL。
[0113] (三)NK细胞活性检测
[0114] 取靶细胞和效应细胞各IOOyL (效靶比50:1 )，加入U型96孔板中：靶细胞自然释放 孔加靶细胞和培养液各IOOyU靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40或2.5%Triton各100 yL;上述各项均设三个平行孔，于37 °C、5 % CO2培养箱中培养4h，然后将96孔板以1500r/min 离心5min，每孔吸取上清IOOyL置平底96孔板中。同时加入LDH基质液IOOyL，根据室温不同 反应3-10min，每孔加入lmol/L的HCl 30yL，在酶标仪490nm处测定光密度值(0D)。
[0115] 按下式计算NK细胞活性，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活 性，即可判定该项实验结果阳性。
[0116] NK细胞活性（％ )=(反应孔OD-自然释放孔OD)/ (最大释放孔OD-自然释放孔OD) X 100%
[0117] 二、LDH基质液的配置
[0118] 乳酸锂 5X10-2mol/L
[0119] 硝基氯化四氮唑（ΙΝΤ)6·6Χ10-4mol/L
[0120] 吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)2 · 8 X 10-4moI/L [0121 ]氧化型辅酶I (NAD) 1.3 X 10-3mol/L
[0122] 将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液中（pH 8.2)
[0123] 三、实验结果
[0124] 表6云牛膝多糖对免疫抑制小鼠 NK细胞活性的影响
[0126] 与模型组比较，*p〈0 · 05，**P〈0 · 01。
[0127] 实验结果表明，云牛膝多糖高、中、低3个剂量均能显著增强CY免疫抑制小鼠脾脏 NK细胞活性(P〈〇. 05)，药效随剂量的增加而增强，呈剂量依赖关系。
[0128] 实施例7
[0129] 云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫因子的影响-血清细胞因子的检测
[0130] 一、实验方法
[0131] 按试验检测指标分批饲养小鼠，适应性喂养4天后随机分为8组，空白组、环磷酰胺 (CY)模型组、香菇多糖+CY组(50mg/kg)、怀牛膝多糖组+CY组(50mg/kg)、云牛膝多糖高剂量 +CY组（100mg/kg)、云牛膝多糖中剂量组+CY组(75mg/kg)、云牛膝多糖低剂量+CY组(50mg/ kg)、云牛膝多糖小剂量+CY组(50mg/kg);每组12只。每天上午空腹称重一次，云牛膝多糖按 100mg/kg、75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg高中低小四个剂量组给小鼠灌胃，1次/d，连续给药19 天，空白组和CY模型组给予蒸馏水，自由采食。第15天除空白组其余7组开始腹腔注射CY 75mg/kg，l 次/d，连续 5天。
[0132] 末次给药Ih后摘眼球取血，分离血清，4°C保存备用。血清中各因子的检测严格按 照IL-6、TNF-a、IFN- γ ELISA试剂盒说明书具体操作测定。
[0133] 二、实验结果
[0134] 表7云牛膝多糖对免疫抑制小鼠 IL-6的影响

[0137] 与模型组比较，*p〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[0138] 实验结果表明，CY模型组IL-60D值与空白组比较差异极显著(P〈0.01)，云牛膝多 糖高剂量+CY组与CY模型组比较差异极显著(P〈0.01);中剂量+CY组与CY模型组比较差异显 著(P〈0.05)。说明中剂量组和高剂量组云牛膝多糖能增强免疫抑制小鼠 IL-6的OD值。
[0139] 表8云牛膝多糖对免疫抑制小鼠干扰素 IFN-γ的影响
[0141] 与模型组比较，*Ρ〈0 · 05，**Ρ〈0 · 01。
[0142] 实验结果表明，CY模型组IFN-γ OD值与空白组比较差异极显著(Ρ〈0.01)，云牛膝 多糖高、中、低三个剂量+CY组与CY模型组比较差异极显著(Ρ〈0.01);高剂量+CY组OD值与空 白组比较差异极显著(Ρ〈〇.01)，小剂量+CY组和中剂量+CY组OD值之间无显著差异。说明云 牛膝多糖能提高免疫抑制小鼠干扰素 IFN- γ OD值，并恢复到正常水平。
[0143] 表9云牛膝多糖对免疫抑制小鼠肿瘤坏死因子TNF-α的影响
[0145] 与模型组比较，*P〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[0146] 实验结果表明，CY模型组TNF-a〇D值与空白组比较差异极显著(P〈0.01)，云牛膝多 糖高、中、低三个剂量+CY组与CY模型组比较差异极显著(P〈0.0 l);小剂量+CY组与模型组比 较差异显著(P〈0.05);中剂量+CY组和高剂量+CY组OD值与空白组比较无显著差异。说明云 牛膝多糖能提高免疫抑制小鼠肿瘤坏死因子水平，中剂量组和高剂量组能使免疫抑制小鼠 肿瘤坏死因子TNF-α恢复到正常水平。
[0147] 实施例8
[0148] 云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫球蛋白的影响
[0149] 一、实验方法
[0150] 同实施例9。
[0151] 二、实验结果
[0152] 表10云牛膝多糖对免疫抑制小鼠免疫球蛋白IgA、IgM、IgG含量(mg%)的影响
[0154] 与模型组比较，*P〈〇 · 05，**P〈0 · 01。
[0155] CY模型组IgA含量与空白组比较差异显著(P〈0.05);云牛膝多糖高剂量+CY组和低 剂量+CY组与模型组比较差异显著(P〈0.05)，小剂量+CY组和中剂量+CY组与模型组无显著 差异，高剂量+CY组和空白组无显著差异。说明云牛膝多糖高剂量组能促进免疫抑制小鼠免 疫球蛋白IgA含量的提高。
[0156] CY模型组IgM含量与空白组比较差异极显著(P〈0.01);中剂量+CY组和高剂量+CY 组与模型组比较差异显著(P〈〇.05)，与空白组比较无显著差异。说明云牛膝多糖中剂量组 和高剂量组能促进免疫抑制小鼠免疫球蛋白IgM含量的提高。
[0157] CY模型组IgG含量与空白组比较差异极显著(P〈0.01);高剂量组+CY和中剂量组+ CY组与模型组比较差异显著(P〈0.05)，与空白组比较无显著差异。说明云牛膝多糖高、中剂 量组能促进免疫抑制小鼠免疫球蛋白IgG含量的提高。
[0158] 实施例9
[0159] 云牛膝多糖对免疫抑制小鼠补体的影响 [0160] 一、实验方法
[0161] 同实施例9。
[0162] 二、实验结果
[0163] 表11云牛膝多糖对免疫抑制小鼠补体C3、C4含量(mg%)的影响
[0165] 与模型组比较，*P〈0 · 05，林 P〈0 · 01。
[0166] 实验结果表明，CY模型组C3含量与空白组比较差异显著(P〈0.05);中剂量组+CY组 和高剂量组+CY组与模型组比较差异显著(P〈0.05);三个剂量+CY组之间无显著差异，与空 白组比较无显著差异。说明云牛膝多糖高剂量组和中剂量组能促进免疫抑制小鼠补体C 3含 量的提尚。
[0167] CY模型组C4含量与空白组比较差异显著(P〈0.05)，高剂量+CY组与模型组比较差 异显著(P〈0.05)，其中，中剂量+CY组与CY模型组比较差异极显著(P〈0.01)。说明云牛膝多 糖高剂量组和中剂量组能促进免疫抑制小鼠补体C 4含量的提高。
[0168] 实施例10
[0169] 云牛膝多糖对多种肿瘤细胞的增殖抑制试验 [0170] 一、实验方法
[0171] 采用MTT法检测云牛膝多糖抑制多种肿瘤细胞生长的活性。肿瘤细胞在37°C、5% CO2的培养箱中培养至90 %以上的汇合度时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在 显微镜下计数，将细胞浓度调整为2 X IO4个/mL，将细胞悬液接种到96孔板中，IOOyL/孔，并 于37 °C，5 %⑶2培养箱中培养过夜。云牛膝多糖用培养液稀释到高（100μg/ml)、中（75yg/ ml)、低(50μg/ml)、小（25μg/ml)四个浓度。多西他赛用培养液稀释到终浓度(2.5μg/ml)。待 细胞完全贴壁后，将各个稀释液分别加入96孔板中（100μL孔）。以加入云牛膝多糖稀释液 作为给药组，以加入多西他赛作为阳性对照组，以不加任何药物的培养液作为阴性对照组。 在37°C，5%⑶ 2培养箱孵育48h。向96孔板中加入5mg/mL的MTT，每孔20yL，继续培养4h。吸掉 培养基，每孔加入150yL DMSO溶解，摇床IOmin轻轻混匀。用酶标仪在测定波长为570nm，参 比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率(pro liferat ion inhibit ion，PI)，公式 如下：
[0172] PI(%) = 1-给药组/阴性组
[0173] 试验独立重复3次，试验得到的结果以mean 土 SD表示，试验结果见表19。
[0174] 二、实验结果
[0175] 表19云牛膝多糖对多种肿瘤细胞的增殖抑制试验
[0177] 结果：与阴性对照相比，云牛膝多糖对多种肿瘤细胞的增殖均有一定程度的抑制 作用，其中云牛膝多糖高剂量组（lOOyg/rnl)对部分肿瘤细胞的增殖抑制作用效果超过了阳 性药，为本发明开发为有效的抗肿瘤药物提供了良好的前景。
[0178] 实施例11
[0179] 云牛膝多糖对小鼠肉瘤细胞S180体内增殖的抑制作用及其对免疫器官的影响
[0180] 一、实验方法
[0181] (一)接种动物模型的建立
[0182] 取一只腹腔接种S180细胞生长5-7d的小鼠，处死后抽取腹水4mL，加生理盐水以1: 4的比例稀释成细胞悬液，于冰上放置，混匀。取50只健康的雄性BALB/c小鼠，分别于右腋下 皮下接种〇. 2mL细胞悬液，即得Sl 80荷瘤小鼠模型。
[0183] (二)分组及给药
[0184] 实验随机分为9组，每组12只，分别为云牛膝多糖给药组:高剂量组（100mg/kg)、中 剂量组（75mg/kg)、低剂量组（50mg/kg)和小剂量组（25mg/kg);阳性对照组：环磷酰胺 (25mg/kg)、香燕多糖(5Omg/kg)、怀牛膝多糖（50mg/kg);阴性对照组:等剂量的生理盐水。 每天每只小鼠腹腔注射〇.2mL样品溶液或生理盐水，连续给药10d。另设空白对照组，小鼠不 做任何处理。各组小鼠隔天称重一次，记录体重变化情况。
[0185] 末次给药后禁食一晚，次日称重后处死小鼠。小鼠处死前先进行眼眶取血，每只小 鼠取血ImL置于EDTA抗凝管中，测血常规。小鼠处死后剥离出肿瘤组织，并取脾脏、胸腺，称 重。
[0186] 按以下公式计算云牛膝多糖对S180体内增殖的抑制率、脾指数：
[0187] 抑瘤率=(阴性对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重X 100% ；
[0188] 胸腺指数(mg/g)=胸腺重/体重；
[0189]脾指数(mg/g)=脾重/体重。
[0190] 二、实验结果
[0191]表23云牛膝多糖对小鼠肉瘤细胞S180体内增殖的抑瘤率
[0193 ] 与阴性对照组比较，*P〈〇 · 05，#P〈0 · 01。
[0194] 实验结果表明，云牛膝多糖各剂量对S180体内增殖均有抑制作用。与阴性对照组 相比，高、中剂量组表现出良好的抑瘤效果，有极显著性差异(P〈〇.01)，低剂量有显著性差 异(P〈0.05)。与阳性对照比较，中剂量组与环磷酰胺组、黄芪多糖组相比，抑瘤率接近;说明 云牛膝多糖具有良好的体内抑瘤效果。云牛膝多糖给药组的体重增长率均大于环磷酰胺 组，说明云牛膝多糖比环磷酰胺毒副作用小，对正常细胞影响相对较小。
[0195] 表24云牛膝多糖对小鼠肉瘤细胞S180荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数的影响
[0197] 与阴性对照组比较，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01。
[0198] 实验结果表明，与阴性对照组比较，云牛膝多糖四个剂量组脾脏指数都有显著提 高，高、中剂量组差异极显著(P〈〇. 01 )，与阳性药香菇多糖、怀牛膝多糖脾脏指数相近，低剂 量组与阴性对照组比较差异显著(P〈〇.05);云牛膝多糖高剂量组胸腺指数较阴性对照组有 显著提高(P〈〇.05)，与阳性药香菇多糖、怀牛膝多糖胸腺指数相近；阳性药环磷酰胺组中， 脾脏指数和胸腺指数较阴性对照组均显著下降(P〈〇.01)，说明其虽能抑制肿瘤细胞生长但 同时降低了宿主免疫功能，对正常细胞也有伤害;而云牛膝多糖在抑制肿瘤生长的同时可 刺激宿主免疫组织，促进脾细胞的增殖分化，提高宿主的免疫功能发挥抗肿瘤的效果，对正 常细胞亦无损害。
[0199] 经血常规检测，云牛膝多糖对S180荷瘤小鼠血液中各种免疫细胞（白细胞WBC、淋 巴细胞LY、单核细胞MO、红细胞RBC)均有不同程度的影响，具体结果见表所示。
[0200] 表25云牛膝多糖对荷瘤小鼠血液中免疫细胞的影响
[0203] 与阴性对照组比较，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01。
[0204] 实验结果表明，云牛膝多糖各剂量下对S180荷瘤小鼠血液中各种免疫细胞均有影 响。云牛膝多糖给药组的白细胞数目对比阴性组、环磷酰胺组、空白组，均显著性增多，且随 剂量的增加而增大，特别是高剂量组白细胞数比中、低剂量组明显增多(**P〈〇.01)，而环磷 酰胺组与空白组相比白细胞数大幅度减少。云牛膝多糖给药组的淋巴细胞数目及比例与阴 性组、环磷酰胺组、空白组的相比同样增加，且随剂量的增大而增大，其中高剂量组具有明 显优势(**P〈0.01)，而环磷酰胺组淋巴细胞数目及比例同样是最低的。云牛膝多糖给药组 的单核细胞数目及比例依旧比其他对照组大，其中高剂量组单核细胞数最多，阳性组单核 细胞数最少。云牛膝多糖给药四个剂量组随剂量的增加红细胞数有所增多，但都与空白组 无显著性差异，而阳性组比空白组红细胞数减少，阴性组比空白组红细胞数增多。免疫细胞 数目的变化说明未给予治疗的阴性组可以激活自身免疫功能对抗入侵的外源性物质;环磷 酰胺组则体现了化疗药物在抑制肿瘤生长的过程中对淋巴细胞、单核细胞等免疫细胞的过 多破坏及造成的免疫缺陷；而云牛膝多糖给药组不仅未对各种免疫细胞造成损伤和破坏， 更能刺激免疫细胞的产生，提高机体的自身免疫功能，从而可以更好的对抗入侵的外源性 物质，如抗肿瘤。免疫细胞的变化与脾指数的变化趋势相符。
【主权项】
1. 一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物，其特征在于:提取物的组分为多糖。2. 根据权利要求1所述的一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物，其特征在于:所述的 多糖的分子量范围为0.5~3kD。3. 根据权利要求1所述的一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物，其特征在于:所述多 糖的结构单元包括葡萄糖、半乳糖和半乳糖醛酸。4. 根据权利要求1所述的一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物，其特征在于:所述多 糖的结构单元包括葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸和岩藻糖。5. 权利要求1-4中任意一项所述的云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物在制备抗肿瘤药 物和增强免疫力型保健品中的应用。6. 根据权利要求5所述的云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物在制备抗肿瘤药物和增强 免疫力型保健品中的应用，其特征在于:所述的肿瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、 胶质瘤、黑色素瘤和宫颈癌以及起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肺脏、肝脏、 胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱、睾丸的原发或继发的 癌、黑色素瘤以及肉瘤。7. 云牛膝茎和/或叶和/或根多糖在制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品中的应用。8. 云牛膝茎和/或叶和/或根在制备抗肿瘤药物和增强免疫力型保健品中的应用。9. 一种抗肿瘤药物，其特征在于:包括云牛膝茎和/或叶和/或根多糖。10. -种云牛膝茎和/或叶和/或根的资源化利用方法，其步骤包括：（1)采集云牛膝的 茎和/或叶和/或根；（2)从云牛膝的茎和/或叶和/或根中提取多糖；（3)将步骤(2)中提取的 多糖制备成抗肿瘤药物或增强免疫力型保健品。
【文档编号】A61P35/00GK105859904SQ201610283822
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】康梦实, 戚微岩, 罗燕平
【申请人】南京安吉生物科技有限公司